RELACION DEL TAMAÑO FOLICULAR Y PRESENCIA DE CELO PREVIO A LA IATF A 48 Y 56 HORAS DEL RETIRO DE DISPOSITIVOS EN LA CONCEPCIÓN DE VACAS HOLANDO

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL CÓRDOBA ESPECIALIDAD EN REPRODUCCIÓN BOVINA RELACION DEL TAMAÑO FOLICULAR Y PRESENCIA DE CELO PREVIO A LA IATF A 48 Y 56 HORAS DEL RETIRO DE DISPOSITIVOS EN LA CONCEPCIÓN DE VACAS HOLANDO M.V. Martín G. Ludueña M.V. Pedro Molfino Córdoba, Agosto 2013.

2 INTRODUCCIÓN Los protocolos de sincronización basados en el uso de progestinas y sales de estradiol son los más utilizados en Sudamérica para sincronizar la ovulación en bovinos (Bó et al., 2003). Los similares resultados de preñez obtenidos por diferentes autores que compararon el benzoato (BE) y el cipionato (CPE) de estradiol como inductores de la ovulación en vacas (Veiga et al., 2011 a) y en vaquillonas (Veiga et al., 2011 b) hicieron que el CPE pase a ser el inductor de elección dado que su empleo permite realizar un encierre menos porque es aplicado al momento del retiro de los dispositivos intravaginales (DI), mientras que el BE se aplica 24 horas después. Trabajos recientes indican que vacas sincronizadas con dispositivos de progesterona y CPE pueden ser inseminadas a las 48 y 56 horas posteriores al retiro sin efectos adversos en la preñez (Díaz et al., 2011, Zabala et al., 2012). Souza et al (2009) describe que el CPE incrementa el porcentaje de vacas en celo dentro de las 48 horas, las cuales ovulan antes y son menos sincronizadas comparadas con vacas sin celo prematuro. A su vez, la inseminación durante 3 días posteriores a la IATF (Scándolo et al., 2011 a) o mediante el empleo de GnRH a las que no presentan celo a la inseminación (Lopez del Cerro et al., 2011) mejora la preñez del protocolo, indicando que una proporción de las hembras sufren un atraso en la ovulación. Por ende, el porcentaje de hembras que ovulan durante la sincronización no es completa en vacas utilizando cipionato de estradiol o GnRH (Galvão et al., 2004; Souza et al., 2009) o en vaquillonas utilizando benzoato de estradiol como inductor de la ovulación (Scandolo et al., 2012). Existe una mayor variabilidad al momento de pico de LH en vacas tratadas con CPE en relación con las tratadas con GnRH (Souza et al., 2009). Esta dispersión en la ovulación explicaría, en parte, porque la concepción es similar en hembras inseminadas a las 48 horas o 56 horas de retirados los DI. Las vacas que presentan un celo prematuro presentarían una buena fertilidad cuando se las insemina a las 48 horas, mientras que cuando se las insemina a las 56 horas se estaría logrando una buena concepción en aquellas hembras que sufren un atraso en la ovulación. Existen numerosas evidencias que indican una asociación entre la presencia de celo previo y la fertilidad del servicio de un protocolo de IATF en vaquillonas

3 (Lopez del Cerro et al., 2011) y vacas de carne con cría al pie (Dick et al., 2009; Sa Filho et al., 2011 b), en vaquillonas (Scándolo et al., 2011 a) y vacas de leche (Galvão et al., 2004). Una manera eficaz de diferenciar aquellas hembras que no presentan celo en el momento de la IA es mediante el empleo de dispositivos laminares detectores de monta (DM) aplicados en la base de la cola al momento del retiro de los dispositivos intravaginales (Cuatrin et al., 2011). Además, es de amplio conocimiento que el momento de la ovulación y la preñez en hembras de leche (Galvão et al., 2004; Scándolo et al., 2011 b) y carne (Perry et al., 2005; Perry et al., 2007; Sá Filho et al., 2010) sincronizadas con un protocolo de IATF está asociado al tamaño del folículo dominante ovulatorio. Según lo expuesto, es necesario determinar la concepción de vacas Holando inseminadas a las 48 y 56 horas posteriores al retiro del dispositivo identificando el tamaño folicular al momento de retiro y la presencia de celo previo a la IATF para delinear futuras estrategias de inseminación que permitan incrementar la fertilidad del protocolo. El objetivo del presente trabajo fue determinar y relacionar el tamaño folicular al momento del retiro del dispositivo intravaginal y la presencia de celo previo a la IATF en la concepción de vacas Holando inseminadas a las 48 y 56 horas posteriores al retiro del dispositivo intravaginal. MATERIALES Y MÉTODOS El ensayo se realizó en un establecimiento lechero comercial perteneciente a Tambos y Cabañas La Lilia, Colonia Aldao, Santa Fe, en 27 vacas Holando Argentino con un promedio de 106 ± 32 días en leche, 1,9 ± 1,1 partos, 27,2 ± 4,7 litros de leche por día y 2,70 ± 0,27 puntos de condición corporal (escala 1-5). El protocolo de sincronización empleado fue: día 0: inserción dispositivo intravaginal (DI) 1gr (DIB1gr, Syntex)+ 2 mg Benzoato de Estradiol; día 7: remoción del DI pg d-cloprostenol + 2 mg Cipionato de Estradiol (CPE) UI EcG (Novormon, Syntex) + detector de monta (DM). Al día 9 se dividieron las hembras en dos grupos según el horario de la IATF: 48 y 56 horas posteriores al retiro del DI. Todas las vacas fueron inseminadas artificialmente por el mismo técnico y con un mismo toro de fertilidad

4 comprobada. Las hembras se agruparon según los días de paridas, número de partos, litros diarios de leche, condición corporal y estructuras ováricas presentes al momento de la inserción del DI. A la IA se visualizó el despintado de los DM, considerando celo positivo la remoción de la pintura (DMP) y celo negativo (DMN) cuando se mantuvo intacta. A estas últimas se le aplicó a todas 50 µg de Lecirelina al momento de la IA. Al inicio del protocolo se realizó una ecografía para determinar las estructuras ováricas presentes en cada ovario. La totalidad de las vacas fueron categorizadas según la presencia o ausencia de cuerpo lúteo (CL) al ingreso y al retiro del DI. En este momento, se estimó el tamaño del folículo dominante preovulatorio al retiro (FDPR). El FDPR fue definido como un folículo 12 mm de diámetro en ausencia de otros folículos de diámetro similar. Al momento de la IATF se determinó la presencia o la desaparición del FDPR. El tono uterino, las estructuras ováricas y la preñez se determinaron mediante palpación rectal y con un ecógrafo WellD con un transductor lineal de 5,5 MHz. El diagnóstico de gestación se realizó a los 35 días de la IATF. Se utilizó estadística descriptiva y prueba de normalidad Shapiro-Wilks (modificado). Para relacionar el horario de inseminación y el despintado de los DM con la tasa de concepción (TC), se utilizó diferencia de proporciones. La Prueba de Kruskal Wallis se empleó para analizar el tamaño folicular en relación con la concepción, el despintado de los DM y los horarios de IA (InfoStat, 2011). RESULTADOS Y DISCUSIÓN Del total de vacas, el 70,4 % (19/27) presentó DMP al momento de la IATF, mientras que el 29,6 % (8/27) restante fue DMN. Esto fue similar a los 68,5 % DMP y a los 31,5 % DMN, a los 66,7 % DMP y a los 33,3 % DMN reportados en trabajos previos con vaquillonas Holando (Cuatrín et al., 2011;.Scándolo et al., 2011 a) y a los 74% en vacas y 70% en vaquillonas de carne (Regalado et al., 2012), pero fue algo superior a los 60,8% DMP y a los 39,2% DMN informado en vaquillonas Braford (Lopez del Cerro et al., 2011) y a los 57,8 % (Sá Filho et al., 2010) y a los 58,2 % reportados en vacas de cría (Sá Filho et

5 al., 2011). El rango de hembras que presentan DMP entre el retiro de los DI y la IATF varía entre % a 70 %, por ende, la proporción de animales con DMN es de 30 % a %. La TC general fue del 37,0 % (10/27); la preñez de las que presentaron DMP fue del 36,8 % (7/19) y de las que tuvieron DMN fue de 37,5 % (3/8). El empleo de Lecirelina durante la IA mejora la fertilidad de las hembras con DMN, sugiriendo un incremento en la tasa de ovulación en este grupo que puede estar desfasada (Lopez del Cerro et al., 2011, Regalado et al., 2012). En el Cuadro 1 se presenta la tasa de concepción del protocolo de sincronización según el momento de inseminación y el estado de los DM al momento de la IATF. Cuadro 1: Tasa de concepción en las vacas inseminadas a las 48 y 56 horas de retirados los DI utilizando cipionato de estradiol como inductor de la ovulación. Horario IA TC (n/n) TC DMP (n/n) TC DMN (n/n) 48 33,3 % (4/12) 44,4 % (4/9) 0,0 % (0/3) 56 40,0 % (6/15) 30,0 % (3/10) 60,0 (3/5) La TC fue similar entre horarios de inseminación (P>0,05). No obstante, la preñez fue 14,4 puntos porcentuales mayor en las vacas con DMP a las 48 horas en relación con las inseminadas a las 56 horas. Esta información presentaría una importancia práctica ya que vacas con celo anticipado probablemente presentan menos posibilidad de concebir si son inseminadas a las 56 horas de retirado los dispositivos (Souza et al., 2009). En vacas de carne inseminadas con un protocolo de CO-Synch con una inyección de CPE 36 horas antes de la segunda dosis de GnRH, la ovulación se produjo 2,75 horas antes en vacas que exhibieron celo en relación con las que no lo presentaron (Perry y Perry, 2008). Por otra parte, la diferencia porcentual fue 60,0 % superior en las vacas con DMN inseminadas a las 56 horas (P>0,05). Un trabajo realizado en vaquillonas Holstein donde la presencia de celo fue validado mediante un medidor de actividad (ALPRO ), demostró que las hembras con un DMP mostraron su máxima actividad entre 10 y 16 horas previas al inicio de la IATF e incluso durante la inseminación, mientras que las

6 que tuvieron DMN lo presentaron entre 1-2 horas e incluso hasta 6 horas posteriores a la finalización de la IA (Cuatrín et al., 2011). Si bien la baja cantidad de animales presentes en cada grupo impidieron detectar diferencias significativas entre ellos, la mayor preñez obtenida en las vacas con DMN inseminadas a las 56 horas estaría asociada a una ovulación mas retardada que se produce en este grupo (Scandolo, AÑO, comunicación personal). Otros autores reportaron en vaquillonas que el 60,0 % ovularon entre la IA y 24 horas posteriores, mientras que el 40,0 % restante lo hizo entre las 24 y 48 horas, indicando que el momento de ovulación es variable e impreciso (Scándolo et al., 2011 b). Además en este trabajo menciona que independientemente si se preñan o no, las preñadas y las que ovulan en 0 a 1 día tienen un FDP mayor que las vacías y las que ovulan 1 a 2 días. Se ha descripto que vacas Holando que fueron detectadas en celo antes de las 48 horas de retirado los dispositivos ovularon antes y tuvieron una mayor variación entre vacas comparada con vacas que no presentaron celo hasta las 48 horas (celo < 48 horas = 63,3 ± 2,1 horas vs. no celo hasta 48 horas = 75,7 ± 1,2 horas) (Souza et al., 2009). El tamaño del FDPR fue de 13,7± 4,4 mm en las preñadas y de 12,7 ±3,5 mm en las vacías (P>0,05). El tamaño del folículo preovulatorio es similar entre preñadas y vacías al momento del retiro del DI (Scándolo et al., 2011; Scándolo et al., 2011 b). En el Cuadro 2 se presenta el FDPR según los horarios de IA y el diagnóstico de gestación. Cuadro 2: Tamaño del folículo dominante preovulatorio al retiro de los dispositivos en vacas inseminadas a las 48 o 56 horas según el diagnóstico de gestación. Horario IA Diagnóstico de gestación n Media D.E Mín Máx 48 Preñadas 4 17,0 a 2,4 15,0 20,0 48 Vacías 8 12,5 b 2,7 10,0 15,0 56 Preñadas 6 11,5 4,1 8,0 18,0 56 Vacías 9 12,9 4,2 8,0 20,0 a, b Letras diferentes entre filas indican diferencias significativas (P<0,05) El FDPR en las vacas preñadas inseminadas a las 48 horas fue 4,5 mm (P=0,0323) mayor que las vacías, mientras que fue similar entre las preñadas y vacías inseminadas a las 56 horas (P>0,05). El 100,0 % de las vacas preñadas

7 a las 48 horas presentaron DMP, mientras que el 62,5 % de las vacías presentaron un DMP con un FDPR promedio de 14,0 ± 2,2 mm y el 37,5 % restante presentaron un DMN con un FDPR promedio de 10,0 mm. Por otra parte, el 50,0 % de las vacas preñadas inseminadas a las 56 horas, presentaron DMP con un FDPR promedio de 12,7 ± 4,6 mm y el otro 50,0% presentó un FDPR de 10,3 ± 4,0 mm. Las vacías presentaron un 77,8 % DMP con un FDPR promedio de 14,0 ± 4,1 mm y el 22,2 % restante presentaron DMN un FDPR promedio de 9,0 ± 1,4 mm. El tamaño promedio del FDPR de todas las vacas fue de 13,1 ± 3,8 mm. El 53,8 % (7/13) de las vacas que tuvieron a la IATF un DMN mostraron un FDPR 13,1 mm, mientras que en las vacas con FDPR 13,2 mm la presentación de DMN fue del 7,1 % (1/14) (P=0,012754), donde el 92,8 % restante presentó un DMP. En el Cuadro 3 se presenta el FDPR según el estado de los DM. Cuadro 3: Tamaño del folículo dominante preovulatorio de las vacas según el estado de los detectores de monta al momento de la inseminación artificial a tiempo fijo DM a la IATF n Media D.E Mín Máx DMP 19 14,4 a 3,5 10,0 20,0 DMN 8 9,9 b 2,3 8,0 15,0 a, b Letras diferentes entre filas indican diferencias significativas (P<0,05) Las vacas con DMP a la IATF presentaron un FDPR 4,5 mm (P=0,0027) mayor de las que presentaron un DMN. Galvão et al,(2004) describen que una mayor proporción de vacas con folículos 15 mm fue observada en celo (78,4 vs. 57,1%; P < 0,001) y alcanzó la ovulación (87,7 vs. 73,7%; P = 0,05) cuando se las comparó con vacas con folículos <15 mm. Además estos autores describen que vacas con folículos 15 mm tienen 3,7 veces más chance de presentar celo (95% CI = 2,24 a 6,05), y 2 veces más de ovular (95% CI = 1,00 a 3,76) que vacas con folículos más pequeños. Se ha descripto una interacción entre el CPE, la manifestación de celo y el tiempo con la concentración de LH. Vacas inyectadas con CPE y que exhibieron celo prestaron mayor concentración de LH comparado con vacas que recibieron CPE y no

8 manifestaron celo, vacas que no recibieron CPE y exhibieron celo y vacas que no recibieron CPE y no manifestaron celo (Perry y Perry, 2008). Diversos autores (Galvão et al., 2004; Perry et al., 2005; Perry et al., 2007; Sá Filho et al., 2011) reportaron que las hembras que presentaron celo tuvieron un mayor tamaño folicular al momento del retiro del DI, un mayor diámetro folicular a la IATF, una mayor tasa de ovulación que aquellas hembras que no manifiestan celo previo a la IATF. En el Cuadro 4 se observa según el horario de IA y el estado de los DM a la IATF. Cuadro 4: Tamaño promedio (± DE) del folículo dominante preovulatorio al retiro del dispositivo intravaginal según el horario de inseminación y el estado de los detectores de monta al momento de la inseminación Grupos DM a la IATF n FDPR (mm) 48 DMP 9 15,3 ± 2,7 a 48 DMN 3 10,0 ± 0,0 b 56 DMP 10 13,6 ± 4,1 a 56 DMN 5 9,8 ± 3,0 b a, b Letras diferentes entre filas indican diferencias significativas (P<0,05) Las vacas con DMP a la IATF presentaron un FDPR 5,3 mm (P=0,0182) y 3,8 mm (P=0,0509) mayor en relación con las que presentaron un DMN a las 48 horas y 56 horas respectivamente. No se observaron diferencias significativas (P>0,05) en el FDPR entre vacas con DMP y vacas con DMN a las 48 o 56 horas de la IATF. El 100,0 % de las vacas que presentaron DMN a las 48 horas resultaron vacías, mientras que el 60,0 % (3/5) de las que se inseminaron a las 56 horas resultaron preñadas. Independientemente del horario de IA, el 50,0 % de las vacas con DMN presentaron al momento de la IATF un CL en uno de los ovarios. A la IATF, el 79,0 % (15/19) de las vacas con DMP se encontraron con un FDPR, mientras que el 21,0 % restante se encontró sin folículos (metaestro). Por otra parte, el 25,0 % (2/8) de las vacas con DMN se encontraron con un FDPR, el 50,0 % (4/8) de las vacas presentaron un CL en uno de los ovarios y el 25,0 % restante folículos pequeños (< 8,0 mm).

9 CONCLUSIONES Se concluye que existe una estrecha relación entre el tamaño folicular, al momento del retiro del dispositivo intravaginal y la presencia de celo previo a la IATF. La similar concepción lograda en vacas inseminadas a 48 o 56 horas posteriores al retiro de los DI estaría asociada a una mayor concepción a las 48 horas en las vacas que presentan un celo prematuro la cual se compensaría en aquellas hembras que no manifiestan celo a la IATF y que son inseminadas a las 56 horas. Es necesario realizar trabajos futuros en vacas lecheras donde las vacas que manifiestan celo previo a la IATF sean inseminadas a las 48 horas y las que no lo hacen sean inseminadas a las horas.

10 BIBLIOGRAFÍA Bó, G.A., P.S. Baruselli, M.F. Martínez Pattern and manipulation of follicular development in Bos indicus cattle Animal Reproduction Science Cuatrín, A., Scándolo, D.G., Scándolo, D., Maciel, M Detección de celo por actividad en vaquillonas Holstein sincronizadas con un protocolo de inseminación a tiempo fijo. En CD: D:\Resumenes I Simposio Latinoamericano de Reproducción Animal\COMUNCACIONES CORTAS\BOVINOS CUATRÍ~1. 7 y 8 de Noviembre. Viña del Mar, Chile. Diaz, T, G. Saralegui, L. Cutaia Efecto del momento de la IATF (48 vs. 54 h) en vaquillonas británicas tratadas con dispositivos con 1 g de progesterona y cipionato de estradiol sobre los porcentajes de preñez. IX Simposio Internacional de Reproducción Animal. pp al 11 de Noviembre. Córdoba, Argentina. Dick, A.; Maciel, M.; Scandolo, D.; Scilipoti, G.; Salado, E.; Mihura, H., y Reynals, V Uso de pintura para detección de celo y escore de despintado en relación a concepción en programas de IATF en bovinos. 32 Congreso Argentino de Producción Animal, 14 al 16 de Octubre, Malargüe, Mendoza. Di Rienzo J.A., Casanoves F., Balzarini M.G., Gonzalez L., Tablada M., Robledo C.W. InfoStat versión Grupo InfoStat, FCA, Universidad Nacional de Córdoba, Argentina. URL Galvão, K. N., J. E. P. Santos, S. O. Juchem, R. L. A. Cerri, A. C. Coscioni, and M. Villasenor Effect of addition of a progesterone intravaginal insert to a timed insemination protocol using estradiol cypionate on ovulation rate, pregnancy rate and late embryonic loss in lactating dairy cows. J. Anim. Sci. 82: Lopez del Cerro, P., Scándolo, D.G., Vanzetti, L., Cuatrín, A., Scándolo, D., Maciel, M Efecto de la aplicación de Lecirelina en la fertilidad de vaquillonas Braford que no manifiestan celo previo a la IATF. IX Simposio Internacional de Reproducción Animal. pp al 11 de Noviembre. Córdoba, Argentina.

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13 Agradecimientos - Cabañas y Tambos La Lilia, familia Barberis, Colonia Aldao, Santa Fe. - Area de Producción Animal, INTA, Rafaela. - Equipo Técnico de M.V.L Reproducción Bovina.