Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

Transcripción

1 Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos Sesión nº 7 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt-176 M. Querci y M. Mazzara WORLD HEALTH ORGANIZATION REGIONAL OFFICE FOR EUROPE ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE BUREAU REGIONAL DE L'EUROPE WELTGESUNDHEITSORGANISATION REGIONALBÜRO FÜR EUROPA ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD OFICINA REGIONAL PARA EUROPA

2 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Índice Sesión nº 7 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt-176 Características de la soja Roundup Ready 3 Características del maíz MON810 7 Características del maíz Bt Bibliografía 17

3 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Características de la soja Roundup Ready 1 Identificación sucinta Denominación GTS Solicitante Monsanto Canada Inc. Especie vegetal Glycine max L. (soja) Caracteres nuevos Nueva tolerancia al glifosato, ingrediente activo del herbicida Roundup Método de introducción del Aceleración de partículas (biolística) nuevo carácter genético Utilización propuesta Producción de soja para la alimentación animal (principalmente harina y copos tostados desgrasados) y el consumo humano (principalmente aceite, fracciones de proteínas y fibra dietética) Información de base Monsanto Canada Inc. ha desarrollado la línea de soja GTS para permitir la utilización de glifosato como forma alternativa de lucha contra las malas hierbas en la producción de soja. El desarrollo de GTS se ha basado en la tecnología de recombinación de ADN, mediante la introducción de una forma tolerante al glifosato del gen de la enzima 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintasa (EPSPS), aislada de la cepa CP4 de Agrobacterium tumefaciens, en la variedad comercial de soja "A5403" (Asgrow Seed Company). Descripción del nuevo carácter Tolerancia al glifosato El ingrediente activo de Roundup, el glifosato, es un herbicida sistémico postemergente utilizado en todo el mundo como agente de lucha contra las malas hierbas no selectivo. El glifosato actúa como inhibidor competitivo de la 5- enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintasa, enzima esencial de la ruta bioquímica del shikimato que participa en la producción de los aminoácidos aromáticos: fenilalanina, 1 Procedentes de la Agencia Canadiense de Inspección Alimentaria, Documento de decisión DD95-05.

4 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt tirosina y triptófano (figura 1). La inhibición de la EPSPS supone la interrupción del crecimiento y la muerte de la planta. Esta enzima esencial presenta una amplia distribución entre vegetales, hongos y microorganismos, pero el gen introducido de tolerancia al glifosato codifica una versión bacteriana (derivada de la cepa CP4 de Agrobacterium tumefaciens) sumamente insensible al glifosato y que puede, por tanto, satisfacer las necesidades metabólicas de aminoácidos aromáticos de la planta. El gen EPSPS está regulado por un fuerte promotor constitutivo del virus del mosaico de la coliflor (P- CaMV E35S) y termina con el terminador de la nopalina sintasa (T-nos) de Agrobacterium tumefaciens (figura 2). Se ha clonado en el extremo 5 del gen de la tolerancia al glifosato, una secuencia de ADN derivada de plantas que codifica un péptido de tránsito al cloroplasto (CTP4 de Petunia hibrida). El péptido señal fusionado al gen EPSPS facilita la importación de la enzima recién traducida a los cloroplastos, donde se encuentran la ruta del shikimato y los sitios de acción del glifosato. Una vez ha tenido lugar la importación, se retira el péptido de tránsito y se degrada rápidamente mediante una proteasa específica. La EPSP sintasa se encuentra abundantemente en la naturaleza y, en principio, no es tóxica ni alergénica. Al someterla a análisis comparativos con bases de datos de secuencias de polipéptidos tóxicos o alergénicos, la secuencia de aminoácidos de la enzima no muestra ninguna homología significativa con ninguna toxina o alérgeno conocido. fosfoenolpiruvato + shikimato-3-fosfato eritrosa-4-fosfato fosfoenolpiruvato glifosato (Roundup) N-(fosfonometil)glicina 5-enolpiruvil-shikimato-3-fosfato fenilalanina tirosina triptófano Figura 1 La EPSPS cataliza la reacción de shikimato-3-fosfato y fosfoenolpiruvato (PEP) para formar 5-enolpiruvilshikimato- 3-fosfato (EPSP) y fosfato. El EPSP es un producto intermedio en la síntesis de los aminoácidos aromáticos. Como consecuencia de la inhibición de esta ruta bioquímica, se altera la síntesis de proteínas, provocando la muerte de la planta. La EPSPS es el único objetivo fisiológico del glifosato en las plantas, y ninguna otra enzima que utilice PEP es inhibida por el glifosato.

5 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt P-E35S CTP4 CP4 EPSPS T-nos Figura 2. Representación esquemática del casete del gen de soja Roundup Ready (modificado a partir de Padgette et al., 1995). Método de desarrollo La variedad comercial de soja A5403 (Asgrow Seed Co.) se ha transformado mediante un bombardeo de partículas de oro, con el vector plasmídico PV-GGMT04 recolectado de Escherichia coli (véase la figura 3). El plásmido PV-GGMT04 contenía el gen CP4 EPSPS que codifica la tolerancia al glifosato, el gen gus de producción de ß-glucuronidasa como marcador genético y el gen nptii de resistencia a antibióticos (kanamicina). El transformante original seleccionado mostró dos sitios de integración, uno con el marcador genético gus y otro con el gen de tolerancia al glifosato. Esos dos sitios se segregaron posteriormente de forma independiente en la generación sexual siguiente, y se observó mediante análisis que la línea GTS contenía un único sitio de inserción en el que solo estaba integrado el gen de tolerancia al glifosato. Figura 3. Mapa plasmídico que incluye los elementos genéticos del vector PV-GGMT04 utilizado en la transformación de la soja RR, (procedente de Monsanto, 2000)

6 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Estabilidad de la inserción de los caracteres introducidos Los datos originales (Padgette et al., 1995, 1996) indicaron que GTS contenía un único casete génico CP4 EPSPS funcional, consistente en el promotor E35S del virus del mosaico de la coliflor (CaMV), un péptido de tránsito del cloroplasto, la secuencia de codificación CP4 EPSPS y la secuencia de poliadenilación nos. No se observaron incorporaciones de ninguna región de codificación desde fuera del gen de fusión del vector plasmídico original. En las generaciones posteriores no se observó más segregación del gen de fusión descrito más arriba, lo que revelaba que la línea GTS era homocigótica para el gen de fusión. Los análisis del ADN realizados en seis generaciones mostraron que la inserción era estable. En estudios de caracterización más recientes se ha comprobado que, durante la integración del ADN insertado, se habían producido varias modificaciones y que, además del inserto primario funcional, el producto de la soja Roundup Ready contiene dos pequeños segmentos no funcionales de ADN insertado de 250 pb y 72 pb, respectivamente (Monsanto, 2000; Windels et al., 2001) Decisión de reglamentación La soja Roundup Ready (RR) es actualmente la única línea de soja transgénica cuya comercialización está aprobada en la UE. Tras su autorización en los EE. UU. en 1994, la Decisión 96/281/CE de la Comisión, de 3 de abril de 1996, permitió su importación a la Unión Europea. La citada Decisión autoriza la importación de semillas a la UE únicamente para su transformación industrial en productos inviables, incluidos piensos, productos alimenticios y otros productos en los que se utilicen fracciones de soja.

7 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Características del maíz MON810 2 Identificación sucinta Denominación Maíz producto de la transformación MON810 (nombre comercial YieldGard) Solicitante Monsanto Canada Inc. Especie vegetal Zea mays L. (maíz) Caracteres nuevos Resistencia al piral del maíz (Ostrinia nubilalis) Método de introducción del Aceleración de partículas (biolística) nuevo carácter genético Utilización propuesta Producción de Z. mays para el consumo humano (productos de molienda húmeda o seca o aceite de semillas) y harina y ensilado para alimentación del ganado. Información de base El maíz producto de la transformación MON810 (YieldGard) ha sido desarrollado por Monsanto Canada Inc. específicamente para ser resistente al piral del maíz (Ostrinia nubilalis) y proporcionar un método de lucha contra las pérdidas de las cosechas ocasionadas por la alimentación del piral de maíz en su fase de larva, sin utilizar los plaguicidas convencionales. La línea MON810 se ha desarrollado utilizando la tecnología de recombinación del ADN y el bombardeo con microproyectiles de células vegetales para introducir un gen que codifique la producción de una proteína insecticida presente en la naturaleza (derivada de Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki). Esta proteína es activa contra determinadas especies de Lepidoptera, el orden de insectos al que pertenecen las mariposas y polillas, incluido el piral del maíz. Más concretamente, la proteína expresada en la línea MON810 es una forma truncada de una proteína insecticida, la δ-endotoxina CRYIA(b), y protege a las plantas de maíz de los daños causados por las larvas del piral del maíz en las hojas y tallos. 2 Procedentes de la Agencia Canadiense de Inspección Alimentaria, Documento de decisión

8 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Descripción del nuevo carácter Resistencia al piral del maíz Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki es una bacteria que forma endosporas, grampositiva y presente en el suelo. En su fase esporogénica, además de la endospora, produce varios cristales de proteína insecticida, incluida la δ-endotoxina CRYIA(b), activa contra determinados insectos lepidópteros como el piral del maíz, la tórtrix de las yemas de la picea, el gusano telarañoso, la palomilla gitana, la palomilla de dorso de diamante, la lagarta del girasol, el gusano de la yema del tabaco y la oruga de la col. Se ha demostrado en numerosas ocasiones que la proteína no es tóxica para los seres humanos, para otros animales vertebrados ni para los insectos beneficiosos (Lee et al., 1995). La línea MON810 fue transformada con una copia del gen cryia(b) bajo el control del potente promotor constitutivo reforzado CaMV 35S y la secuencia principal del intrón de HSP70 del maíz (figura 4). La secuencia de codificación cryia(b) de Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki HD-1 fue modificada para optimizar y maximizar la expresión de la δ-endotoxina CRYIA(b) en las plantas. La proteína resulta tóxica para las larvas de lepidópteros tras romperse para dar un núcleo bioactivo y resistente a la tripsina. Se cree que la actividad insecticida depende de la unión de los fragmentos activos a receptores específicos presentes en células epiteliales del mesogastrio de insectos sensibles y de la posterior formación de poros, lo que altera el equilibrio osmótico y, finalmente, deriva en lisis celular. Las plagas de lepidópteros específicas del maíz, sensibles a la proteína, son el piral del maíz y el gusano Helicoverpa zea. La secuencia de aminoácidos de la toxina expresada en el maíz modificado resultó ser idéntica a la producida de forma natural y equivalente a la proteína producida como plaguicida biológico, ampliamente utilizada por la industria alimentaria ecológica. P-E35S hsp70 cryia(b) T-nos Figura 4. Representación esquemática de la construcción genética cryia(b) del plásmido PV-ZMBK07 utilizado en la transformación de MON810, que incluye el promotor reforzado CaMV 35S, el intrón de hsp70 del maíz y el gen sintético de la δ- endotoxina cryia(b) seguido del terminador nos (modificado de BATS, 2003).

9 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Método de desarrollo La línea MON810 se obtuvo a partir del genotipo Hi-II de maíz mediante transformación biolística con una mezcla de ADN plasmídicos, PV-ZMBK07 y PV- ZGMT10. El plásmido PV-ZMBK07 contiene el gen cryia(b) (figura 5) y el plásmido PV-ZGMT10 contiene los genes CP4 EPSPS y gox. Ambos plásmidos contienen también el gen nptii (para la selección bacteriana) bajo el control de un promotor bacteriano, y un origen de replicación de un plásmido puc (ori-puc) necesario para la replicación de los plásmidos en E. coli. Los dos vectores se introdujeron mediante el bombardeo con microproyectiles en células vegetales cultivadas. Se seleccionaron las células transformadas con tolerancia al glifosato y a continuación se cultivaron en un medio de cultivo tisular para la regeneración de plantas (Armstrong et al., 1991). Los análisis moleculares proporcionados por los autores indicaron que sólo los elementos de la construcción genética PV-ZMBK07 se integraron en el genoma de la línea MON810 como un inserto único, consistente en el promotor reforzado CaMV 35S (E35S), la secuencia principal de hsp70 y el gen truncado cryia(b). La señal de terminación en 3' de nos, presente en el plásmido PV-ZMBK07, se perdió mediante un truncamiento en 3 del casete del gen y, por consiguiente, no se integró en el genoma hospedador (BATS, 2003). CryIA(b) Figura 5. Representación esquemática del plásmido PV-ZMBK07 utilizado en la formación de la línea MON810 (procedente de Agbios Database on Essential Biosafety).

10 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Estabilidad de inserción de los caracteres introducidos Los datos facilitados por los autores muestran que la segregación y la estabilidad corresponden a un único sitio de inserción del gen cryia(b) en el genoma de MON810. La estabilidad de la inserción se demostró mediante múltiples generaciones de cruces. La línea de maíz se ha cruzado con varios genotipos de maíz diferentes durante 4 generaciones, manteniendo la protección contra el piral del maíz. La línea MON810 deriva de la tercera generación de retrocruzamiento. La integración estable del inserto único se demostró a través de las tres generaciones mediante análisis de transferencia de Southern. Decisión de reglamentación La Agencia de Protección del Medio Ambiente de EE. UU. autorizó en julio de 1996 la plantación de la línea de maíz MON810 en dicho país. La comercialización de esta línea de maíz en la UE se autorizó mediante la Decisión 98/294/CE de la Comisión, de 22 de abril de La Agencia Canadiense de Inspección Alimentaria elaboró el Documento de decisión para su aprobación en la alimentación humana y animal. La línea MON810 está también autorizada en Argentina, Australia, Japón, Sudáfrica y Suiza. Esta línea de maíz se destina al consumo humano (producto de molienda húmeda, seca o aceite de semillas) y harina y ensilado para alimentación del ganado.

11 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Características del maíz Bt Identificación sucinta Denominación Solicitante Especie vegetal Caracteres nuevos Método de introducción del nuevo carácter genético Utilización propuesta Maíz producto de la transformación 176 Bt Ciba Seeds de Ciba-Geigy y Mycogen Corporation Zea mays L. (maíz) Resistencia al piral del maíz (Ostrinia nubilalis); tolerancia al herbicida glufosinato de amonio Aceleración de partículas (biolística) en embriones inmaduros Para cultivo como maíz en grano híbrido Información de base Ciba Seeds y Mycogen Corporation han desarrollado una línea de maíz resistente al piral del maíz. Esta línea de maíz, denominada producto Bt-176, ha sido transformada mediante la tecnología de recombinación de ADN y el bombardeo con microproyectiles de embriones para producir una proteína insecticida, derivada de Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki, activa contra determinadas especies de Lepidoptera, el orden de insectos al que pertenecen las mariposas y polillas, incluido el piral del maíz. Concretamente, esta proteína es una forma truncada de la δ- endotoxina CRYIA(b) y protege las plantas de maíz contra los daños causados por las larvas del piral del maíz con su alimentación. Además, esta línea de maíz fue cotransformada con un gen que confiere tolerancia al herbicida glufosinato de amonio, utilizado para seleccionar las plantas transformadas en fases muy tempranas de desarrollo. Descripción de los caracteres nuevos Resistencia al piral del maíz Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki es una bacteria que forma endosporas, grampositiva y presente en el suelo. En su fase esporogénica, además de la endospora, produce varios cristales de proteína insecticida, incluida la δ-endotoxina CRYIA(b), 3 Procedentes de la Agencia Canadiense de Inspección Alimentaria, Documento de decisión DD96-09.

12 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt activa contra determinados insectos lepidópteros como el piral del maíz, la tórtrix de las yemas de la picea, el gusano telarañoso, la palomilla gitana, la palomilla de dorso de diamante, la lagarta del girasol, el gusano de la yema del tabaco y la oruga de la col. Se ha demostrado en numerosas ocasiones que la proteína no es tóxica para los seres humanos, para otros animales vertebrados ni para los insectos beneficiosos (Lee et al., 1995). Se desarrolló un gen sintético cryia(b), derivado de la cepa HD-1 de Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki, que codifica una forma truncada de la δ-endotoxina CRYIA(b), y modificada para aumentar su expresión en el maíz. El gen sintético tiene aproximadamente una homología del 65 % en lo que respecta a los nucleótidos con el gen nativo (Koziel et al., 1993). La proteína CRYIA(b) truncada contiene la región insecticida de la CRYIA(b) nativa. Se cree que la actividad insecticida depende de la unión del fragmento activo a los receptores específicos presentes en células epiteliales del mesogastrio de insectos sensibles y de la posterior formación de poros, lo que altera el equilibrio osmótico y deriva en lisis celular, interrupción de la alimentación y finalmente muerte del insecto. La línea Bt-176 se obtuvo por transformación con dos construcción genéticas sintéticos del gen cryia(b). Un construcción genética está bajo control transcripcional del promotor de la fosfoenolpiruvato carboxilasa (P-PEPC) del maíz y se expresa en tejidos verdes. El segundo construcción genética está bajo el control del promotor de una proteína kinasa dependiente de calcio (P-CDPK) del maíz y se expresa específicamente en el polen. Ambas construcciones genéticas se terminan con un terminador extraído del virus del mosaico de la coliflor (T-CaMV 35S) y también incluye el intrón 9 del gen de la fosfoenolpiruvato carboxilasa (véanse las figuras 6 y 7). La finalidad de la expresión de la proteína CRYIA(b) en los tejidos verdes es hacer la planta resistente a la primera generación de larvas del piral del maíz, que se alimenta de las hojas. La expresión en polen se dirige a la segunda generación de larvas de piral del maíz, ya que éstas se alimentan de polen. La proteína CRYIA(b) de las hojas del producto de transformación Bt-176 se sometió a estudios de digestibilidad in vitro simulando condiciones gástricas de mamífero y se demostró su degradación como proteína dietética convencional.

13 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt P-CDPK cryia(b) T-35S PEPC Intr # 9 Figura 6. Representación esquemática del gen sintético cryia(b) bajo el control del promotor CDPK (de Matsuoka et al., 2000). PEPC Intr # 9 T-35S cryia(b) P-PEPC Figura 7. Representación esquemática del gen sintético cryia(b) bajo el control del promotor PEPC (de Matsuoka et al., 2000). Tolerancia al herbicida glufosinato de amonio El gen de la tolerancia al glufosinato de amonio (gen bar), extraído de la bacteria común del suelo Streptomyces hygroscopicus, codifica una fosfinotricina acetiltransferasa (PAT) bajo control transcripcional del promotor constitutivo CaMV 35S, activo en todos los tejidos vegetales, excepto en el polen. La fosfinotricina, un inhibidor de la glutamina sintetasa, es la fracción activa del glufosinato de amonio. La actividad herbicida de la fosfinotricina se caracteriza por la inhibición de la glutamina sintetasa resultante de la acumulación de cantidades letales de amoniaco en la planta. La PAT cataliza la acetilación de fosfinotricina, de tal modo que elimina su actividad herbicida. El L- isómero de la fosfinotricina (L-PPT) es ampliamente utilizado como un agente de amplio espectro para luchar contra las malas hierbas. El L-PPT es el ingrediente activo del herbicida glufosinato de amonio desarrollado por Hoechst y denominado BASTA. Este isómero es un análogo estructural de glutamato, el sustrato de la

14 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt glutamina sintetasa (véase la comparación entre el L-PPT y el glutamato en la figura 8). O H H CH 3 P CH 2 CH 2 C COOH HOOC CH 2 CH 2 C COOH OH NH 2 NH 2 Figura 8. El L-isómero de fosfinotricina (izquierda) comparado con el glutamato (derecha). En un principio, el L-PPT fue aislado de Streptomyces viridochromogenes, que sintetiza sólo el L-isómero de la fosfinotricina. El glufosinato de amonio sintético es una mezcla equimolar y racémica de los isómeros D- y L- de la PPT (la D-PPT no exhibe actividad herbicida). Se ha demostrado que la PAT actúa específicamente sobre la fosfinotricina, ya que no se ha observado ninguna otra actividad con otros sustratos comunes de la acetiltransferasa, como el piruvato, la colina o la serina. Mediante estudios de digestibilidad in vitro, simulando condiciones gástricas de mamífero simuladas, llevados a cabo sobre la PAT expresada en E. coli, se vio que esta proteína se digiere como una proteína dietética convencional. El gen de la tolerancia al glufosinato de amonio se introdujo como un marcador genético que permitía la identificación de embriones transformados en un medio selectivo para poder realizar un seguimiento de los genes introducidos durante el cultivo de las plantas. Como ya se ha notificado (FSANZ, 2000), los datos moleculares indican que la línea Bt-176 contiene una sola copia del gen bar, bajo la regulación transcripcional del promotor 35S y el terminador 35S extraídos del virus del mosaico de la coliflor (P-CaMV 35S y T-CaMV 35S, respectivamente) (véase la figura 9). P-35S bar T-35S Figura 9. Representación esquemática del gen bar (extraído de Matsuoka et al., 2000).

15 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Método de desarrollo La línea Bt-176 se obtuvo mediante la transformación biolística de la línea endogámica de maíz CG00526 (Zea mays L.) con dos plásmidos. Los dos construccion geneticas sintéticos del gen cryia(b) se clonaron juntos en un único vector plasmídico (pcib4431). Un segundo vector plasmídico (pcib3064) contenía el gen de la tolerancia al herbicida (bar), aislado de la bacteria del suelo Streptomyces hygroscopicus. Los dos vectores se introdujeron en la línea de maíz CG00526 mediante el bombardeo con microproyectiles de embriones inmaduros. Con análisis moleculares de la planta transformada se vio que en el genoma de la línea de maíz están integradas dos o más copias de cada construcción genética plasmídica. Los resultados de ensayos y análisis de transferencia de Northern indican que el gen de la resistencia a la ampicilina (gen bla), regulado por un promotor bacteriano (utilizado para la selección de los vectores en entornos bacterianos) no se expresó en tejidos de hojas ni en polen de la planta. Se seleccionaron dos productos transgénicos independientes de la transformación del maíz para posteriores cruces y caracterizaciones: el 171 y el 176 (Koziel et al., 1993). La presencia en maíz Bt-176 de los genes cryia(b) (Koziel et al.,1993), bar y bla (Privalle, 1994) se confirmó mediante estudios de caracterización adicionales. Los datos comunicados por Food Standards Australia New Zealand (FSANZ, 2000) también indican que puede haber hasta seis copias de los genes cryia(b) y bla presentes en Bt-176, y al menos dos del gen bar (junto con el promotor 35S), tal como determinó el análisis de Southern frente al ADN del maíz Bt-176 (Privalle, 1994). Estabilidad de inserción de los caracteres Según la información comunicada (FSANZ, 2000), se determinó que la producción de las proteínas CRYIA(b) y PAT en hojas y polen de plantas cultivadas en invernadero era estable tras cuatro generaciones sucesivas de retrocruzamientos. Los análisis de segregación indicaron que los caracteres de resistencia al piral del maíz y tolerancia al herbicida se segregan como caracteres mendelianos vinculados. Un estudio realizado con plantas indicó que solo cinco plantas (el 0,15 %) se consideraron con tolerancia al glufosinato de amonio pero susceptibles de ser dañadas por larvas de piral del maíz.

16 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Decisión de reglamentación En agosto de 1995, la Agencia de Protección del Medio Ambiente de los Estados Unidos aprobó con reservas la comercialización de maíz de campo derivado del producto de transformación 176 hasta el año La comercialización de esta línea de maíz se autorizó en la UE mediante la Decisión 97/98/CE de la Comisión, de 23 de enero de Esta línea de maíz se destina al cultivo, producción de semillas y producción de ensilado y grano para la alimentación animal y grano para la transformación industrial (Decisión 97/98/CE de la Comisión).

17 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Bibliografía Agbios database on Essential Biosafety. Molecular Characterization of MON810 inserted DNA. (Último acceso enero de 2010) Armstrong, C. L., Green, C. E. y Phillips, R.L. (1991). Development and availability of germplasm with high type II culture formation response. Maize Genetics Cooperation NewsLetter 65, BATS (2003). Genetically Modified (GM) Crops: molecular and regulatory details. (Último acceso enero de 2010) Canadian Food Inspection Agency, Plant Products Directorate, Plant Biosafety Office. Decision Document DD96-09: Determination of Environmental Safety of Event 176 Bt Corn (Zea mays L.) Developed by Ciba Seeds and Mycogen Corporation. (Último acceso enero de 2010) Canadian Food Inspection Agency, Plant Products Directorate, Plant Biosafety Office. Decision Document DD95-05: Determination of Environmental Safety of Monsanto Canada Inc.'s Glyphosate Tolerant Soybean (Glycine max L.) Line GTS (Último acceso enero de 2010) Canadian Food Inspection Agency, Plant Products Directorate, Plant Biosafety Office. Decision Document 97-19: Determination of the Safety of Monsanto Canada Inc.'s Yieldgard TM Insect Resistant Corn (Zea mays L.) Line MON (Último acceso enero de 2010) Decisión 97/98/CE de la Comisión, de 23 de enero de 1997, relativa a la comercialización de maíz (Zea mays L.) modificado genéticamente con una alteración de las propiedades insecticidas conferidas por el gen de la endotoxina Bt, combinada con una mayor resistencia al herbicida glufosinato de amonio, con arreglo a la Directiva 90/220/CEE del Consejo. (DO L 31 de , p. 69).

18 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Decisión 96/281/CE de la Comisión, de 3 de abril de 1996, relativa a la comercialización de semillas de soja (Glycine max L.) modificada genéticamente con una mayor resistencia al herbicida glifosato, de conformidad con la Directiva 90/220/CEE del Consejo. (DO L 107 de , p. 10). Decisión 98/294/CE de la Comisión, de 22 de abril de 1998, relativa a la comercialización de maíz (Zea mays L. línea MON 810) modificado genéticamente con arreglo a la Directiva 90/220/CEE del Consejo. (DO L 131 de , p. 33). Food Standards Australia New Zealand FSANZ (formerly Australia New Zealand Food Authority - ANZFA) (2000). Draft risk analysis report. Food produced from insect-protected Bt-176 corn. Application (Último acceso enero de 2010) Koziel, M.G. et al. (1993). Field performance of elite transgenic maize plants expressing an insecticidal protein derived from Bacillus thuringiensis. BIO/Technology 11, Lee, T.C., Zeng, J., Bailey, M., Sims, S.R., Sanders, P.R. y Fuchs, R.L. (1995). Assessment of equivalence of insect protected corn- and E. coli-produced B.t.k. HD-1 protein. Plant Physiol. Suppl. 108, 151. Matsuoka, T., Kawashima, Y., Akiyama, H., Miura, H., Goda, Y., Kusakabe, Y., Isshiki, K., Toyota, M., y Hino, A. (2000). A method of detecting Recombinant DNAs from four lines of genetically modified maize. Journal of Food Hygienic Society of Japan 41, Monsanto Company (2000). Updated Molecular Characterization and Safety Assessment of Roundup Ready Soybean Event Monsanto Report, Product Safety Centre. Padgette, S.R., Kolacz, K.H., Delannay, X., Re, D.B., LaVallee, B.J., Tinius, C.N., Rhodes, W.K., Otero, Y.I., Barry, G.F., Eichholtz, D.A., Peschke, V.M., Nida, D.L., Taylor, N.B. y Kishore, G.M. (1995). Development, identification, and characterization of a glyphosate-tolerant soybean line. Crop Science 35,

19 Características de la Soja Roundup Ready, del Maíz MON810 y del Maíz Bt Padgette, S.R., Re, D.B., Barry, G.F., Eicholtz, D.E., Delannay, X., Fuchs, R.L., Kishore, G.M., y Fraley, R.T. (1996). New weed control opportunities: Development of soybeans with a Roundup Ready gene. In Duke, S.O. (ed.) Herbicide-Resistant Crops. Agricultrual, Economic, Regulatory and Technical Aspects. CRC Lewis Publishers., pp Privalle, L. (1994). Quantification of Cry1A(b) and PAT proteins in Bt corn (corn) tissues, whole plants and silage. Performing laboratory: Ciba Seeds Agricultural Biotechnology Research Unit, Ciba-Geigy Corporation, Research Triangle Park, NC, USA. Study No CAB Windels, P., Taverniers, I., Depicker, A., Van Bockstaele, E. y De Loose, M. (2001). Characterisation of the Roundup Ready soybean insert. European Food Research Technology 213,