BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin

Transcripción

1 INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR Rev.: Dec 2013 BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin USO PREVISTO BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin (agar chocolate BD con IsoVitale y bacitracina) y BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin (agar de infusión de cerebro y corazón con sangre de caballo al 5% y bacitracina) son medios selectivos para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras clínicas. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. Aunque las especies Haemophilus normalmente forman parte de la flora de las vías respiratorias superiores del ser humano, determinados serotipos de H. influenzae, tales como b y f (y también c, pero en muy pocas ocasiones), representan una causa importante de meningitis, sepsis, epiglotitis y muchas otras infecciones graves. Hasta la aplicación de vacunas en muchos países, H. influenzae era una de las tres causas principales de la meningitis bacteriana en todo el mundo 1. En medio común con agar sangre de carnero, H. influenzae y otras especies determinadas de Haemophilus no pueden crecer porque necesitan los factores X (=hemo) y V (=NAD). BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin contiene hemoglobina, que suministra hemo y BD IsoVitaleX, que aporta NAD (nicotinamida adenina dinucleótido) y otras vitaminas. La base de agar chocolate GC II proporciona nutrientes generales. En BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, el agar de infusión de cerebro y corazón proporciona los nutrientes generales, y la sangre de caballo proporciona el hemo (factor X) y NAD (factor V) para favorecer el crecimiento de H. influenzae. El crecimiento de este organismo puede facilitarse colocando tiras de factor V (por ejemplo, tiras de factor V BD Taxo) en el medio después de su inoculación. Se añade bacitracina a ambos medios para inhibir la mayor parte de la flora, mientras que H. influenzae es resistente a este agente antimicrobiano 1-4. BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin y BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin se utilizan para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras clínicas con flora normal. REACTIVOS Fórmulas* por litro de agua purificada BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Digerido pancreático de caseína 7,5 g Infusión de cerebro y corazón de 8,0 g sólidos Peptona de carne seleccionada 7,5 Digerido péptico de tejido animal 5,0 Almidón de maíz 1,0 Digerido pancreático de caseína 16,0 Fosfato dipotásico de hidrógeno 4,0 Cloruro sódico 5,0 Fosfato monopotásico 1,0 Glucosa 2,0 Cloruro sódico 5,0 Fosfato disódico de hidrógeno 2,5 Agar 14,0 Agar 13,5 Bacitracina UI Bacitracina UI Hemoglobina 10,0 Sangre de caballo, desfibrinada 50,0 ml IsoVitaleX 10,0 ml ph 7,4 +/- 0,2 ph 7,2 ± 0,2 * Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento

2 BD IsoVitaleX Enrichment, incluido en BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin, contiene los siguientes factores de crecimiento (fórmula* por litro de agua purificada): Vitamina B 12 0,01 g L-glutamina 10,0 Adenina 1,0 Clorhidrato de guanina 0,03 Acido p-aminobenzoico 0,013 Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) 0,25 Pirofosfato de tiamina 0,1 Nitrato férrico 0,02 Clorhidrato de tiamina 0,003 Hidrocloruro de cisteína 25,9 L-cistina 1,1 Glucosa 100,0 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. PRECAUCIONES. Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biólogicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados. Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 C. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante h en una atmósfera aerobia enriquecida con dióxido de carbono. Cepas Haemophilus influenzae ATCC Staphylococcus aureus ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pyogenes ATCC Streptococcus mitis DSM Sin inocular BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Crecimiento de aceptable a Crecimiento satisfactorio; colonias bueno; colonias pequeñas de pequeñas y transparentes; transparentes a grises crecimiento de bueno a excelente alrededor de las tiras de factor V colocadas en el medio. Color marrón chocolate, opaco. Rojo (color sangre) - 2 -

3 PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin o BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, ambos suministrados en placas Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente. Material no suministrado Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de laboratorio según se requiera; tiras con factor V BD Taxo (para BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin solamente). Tipos de muestras Estos medios se han diseñado para su uso en el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras de las vías respiratorias, por ejemplo, torundas faríngeas u otras muestras con flora normal, como las torundas conjuntivales (véase también CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Recogida y transporte de las muestras Haemophilus influenzae es sensible a las condiciones ambientales adversas. Por consiguiente, se deben utilizar medios de transporte adecuados para todas las muestras. Las muestras deben ser enviadas al laboratorio tan pronto como sea posible y no deben transcurrir más de 24 horas, incluso si se utilizan medios de transporte. La temperatura de transporte óptima es de C. No refrigerar! Procedimiento de análisis Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La placa con la muestra extendida se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. Se puede colocar una tira de factor V sobre BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin después de la inoculación para favorecer el crecimiento. Incubar las placas durante h en un ambiente húmedo. Aunque H. influenzae no depende de una alta concentración de CO 2, la incubación en un frasco BD GasPak equipado con una envoltura de generación de dióxido de carbono BD GasPak puede favorecer el crecimiento del organismo. Para el aislamiento de todos los agentes presentes en la muestra, también deben inocularse BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Resultados BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin: Después de la incubación, examinar si las placas presentan colonias de transparentes a grises con un diámetro inferior a 2 mm después de 48 h de incubación. Las especies Haemophilus diferentes de H. influenzae también pueden crecer en este medio. BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin: Después de la incubación, examinar si las placas presentan colonias pequeñas y transparentes después de 48 h de incubación. El crecimiento de H. influenzae es mayor alrededor de la tira de factor V. Otras especies de Haemophilus pueden crecer sin el suplemento de factor V. H. influenzae no es hemolítico, H. haemolyticus por lo general es beta-hemolítico. Se necesitan pruebas bioquímicas o serológicas adicionales para lograr una identificación definitiva de los aislados a partir de dichos medios. CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Estos medios se utilizan para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras clínicas de zonas corporales con flora normal. Estos medios no deben utilizarse para el - 3 -

4 aislamiento primario de las especies Haemophilus species de líquido cefalorraquídeo o a partir de muestras que no sean zonas corporales primarias estériles. En cambio, utilizar medios no selectivos tales como BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) para dichas muestras. Aunque BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin y BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin son medios selectivos, es posible que crezcan organismos diferentes de Haemophilus influenzae. Los medios inhiben la mayoría de las especies bacterianas de la flora bucal, pero no inhiben por completo la especie Neisseria que afecta la cavidad bucal, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens y determinados estafilococos. Se necesita realizar tinciones de Gram y más pruebas bioquímicas y serológicas para confirmar el aislamiento de H. influenzae u otras especies Haemophilus. Ciertas cepas y especies Haemophilus, incluidas H. influenzae var. aegyptius (=H. aegyptius) y H. ducreyi son conocidas por su inhibición ante la bacitracina y, por consiguiente, no crecerán en dichos medios. Para obtener un aislamiento completo de todos los patógenos en cuestión, también se debe inocular con la muestra BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Dado que las especies Haemophilus habitualmente forman parte de la flora del sistema respiratorio, su presencia en muestras de las vías respiratorias superiores (tales como las torundas faríngeas y el esputo) no necesariamente indica que estos organismos son la causa de una infección. Se necesitan pruebas serológicas para demostrar que el aislado pertenece a serogrupos característicos de las infecciones 1,2. REFERENCIAS 1. Kilian, M Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Mannheim, W. et al.: Pasteurellaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (ed. F. Burkhardt). Thieme Verlag, Stuttgart Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Chapin, K., and G.V. Doern Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from species contaminated with upper respiratory tract microbial flora. J. Clin. Microbiol. 17: ENVASE/DISPONIBILIDAD BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas INFORMACIÓN ADICIONAL Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com

5 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD - 5 -