Tema 14. Genética de levaduras. Saccharomyces cerevisiae

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Antonia Calderón Coronel
hace 7 años
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1 Tema 14. Genética de levaduras Saccharomyces cerevisiae

2 Formas de división Saccharomyces cerevisiae Schizosaccharomyces pombe

3 Esporulación Ascosporas Formación de basidiosporas

4 Esporulación Ascosporas Saccharomyces cerevisiae Schizosaccharomyces pombe

5 Pseudohifas e hifas Saccharomyces cerevisiae

6 Saccharomyces cerevisiae

7 Saccharomyces cerevisiae, ciclo de vida a α apareamiento a/α cigoto esporulación -C -N germinación +C +N Asca con 4 esporas a a α α Células haploides

8 Saccharomyces cerevisiae Morfogénesis y diferenciación en un organimos unicelular

9 Schizosaccharomyces pombe

10 Saccharomyces cerevisiae Fermentación de la glucosa

11 Saccharomyces cerevisiae

12 Tamaño y composición de las células de S. cerevisiae Célula haploide Célula diploide Volumen (µm 3 ) Composición (10-12 g) Peso húmedo Peso seco DNA 0,017 0,034 RNA 1,2 1,9 Proteína 6 8

13 S. Cerevisiae: genoma

14 S. cerevisiae cromosomas

15 S. cerevisiae Electroforesis de campo pulsante

16 Centromeros

17 Plásmidos artificiales

18 S. cerevisiae, genoma

19 Número de intrones >1 Yeast Fungi Mammal

20 Tamaño de los intrones Fungi Verterbrate <100 <200 <1 kbp 1 to 5 >5

21 Genética de levaduras

22 Genética de levaduras Prueba de dominancia X ts - TS + ts - TS + / Cruce del mutante con el silvestre y examen del fenotipo del diploide Prueba de complementación X ts - 1 ts - 2 ts - 1 ts - 2 / Cruce de dos mutantes con el mismo fenotipo y examen del fenotipo del diploide

23 Genética de levaduras Prueba de complementación

24 Genética de levaduras Prueba de fenotipos no seleccionados

25 Genética de levaduras Análisis de tétradas a b c d Se debe un fenotipo a la mutación de un solo gen? Mapeo de los genes entre sí y respecto al centrómero Creación de dobles mutantes Test de reversión Comprobación de que dos fenotipos se deben a la misma mutación

26 Análisis de tétradas por micromanipulación

27 Análisis de tétradas por micromanipulación

Sí: el fenotipo se debe a la mutación de un solo gen NO: algo más ha

28 Genética de levaduras Análisis de tétradas Segrega el fenotipo 2:2 tras la meiosis? Sí: el fenotipo se debe a la mutación de un solo gen NO: algo más ha ocurrido (más de una mutación no ligadas, mutación en plásmido o en el genoma mitocondrial) Segregación 2:2 Otro tipo de segregación

29 Análisis de tétradas

30 Genética de levaduras Terminología de ligamiento: Ejemplo: Rb x rb R = Resistente a una droga r = sensible B = Blanco b = azul Tres posibles tipos de tétradas espora genotipos a Rb RB RB b Rb RB Rb c rb rb rb d rb rb rb PD NPD T Ditipo parental Ditipo No parental Tetratipo

31 Genética de levaduras

32 Genética de levaduras Segregación durante la meiosis Ditipos parentales Ditipos no parentales Tetratipo rb rb RB rb rb Rb Rb RB rb Rb RB rb No ligados 1 : 1 : 4 Ligados >1 : <1 Ligado al centrómero 1 : 1 : <4

33 Algunos escrutinios

34 Supresores extragénicos GEN2 gen1 No crece mutagénesis gen2 gen1 Crece

35 Supresores multicopia silvestre mutante un ejemplo supresor X X x 1

36 Supresores multicopia GEN2 gen1 No crece genoteca 2µ gen1 GEN2 Crece

37 Suprimidos multicopia Mutagénesis GEN2 GEN1 GEN2 El plásmido puede perderse gen1 GEN2 El plásmido no puede perderse

38 Fenotipo por dosis alta No crece en galactosa

39 Ausencia de complementación Suele indicar genes que codifican subunidades de un complejo heteromultimético

40 Mutantes letales sintéticos Mutante viable Segunda mutación Mutante inviable

41 Mutantes letales sintéticos GEN2 gen1 GEN1 posible la segregación mutagénesis gen1 gen2 GEN1 NO es posible la segregación

42 Mutantes letales sintéticos mutx ade2 ade3 ADE3 URA3 ura3 mutx ade2 ade3 ADE3 URA3 muty ura3 GEN X Colonias blancas Crecimiento en 5 -FOA UV GEN X Colonias rojas sin sectores Sensibles a 5 -FOA

43 Genética molecular de levaduras Aislamiento de alelos por gap repair

44 Genética molecular de levaduras Reemplazamiento de genes

45 Genética molecular de levaduras Deleción

46 Genética molecular de levaduras Barajado de plásmidos

47 Saccharomyces cerevisiae

48 Saccharomyces cerevisiae

49 Tipo sexual

50 E Interconversión del tipo sexual HMLα 200 kb MATα 150 kb HMRa CEN III HO I W X Yα ZL W X Yα Z X Ya ZR E I W Y a Y α Z L Z R ~700 bp ~600 bp ~750 bp ~300 bp ~250 bp HO corta en una secuencia de ~18 bp (α-inc) Evento no recíproco. Se pierde el casette Conversión génica, vía reparación de corte de doble cadena

51 Interconversión del tipo sexual α mother daughter mother α α daughter a a a o α pero no a/α cambian Sólo las madres cambian α α HO está: Apagado en a/α Apagado en hijas Encendido al final de G1 Nasmyth (1983)

52 Un linaje de célula madre controlado por los genes SWI

53 Aislamiento del mutante ash1

57 Genética del ciclo celular Mutantes cdc Aislamiento de ciclinas de G1 como supresores de cdc28 por sobrexpresión

58 Regulación del ciclo celular

59 Regulación del ciclo celular

60 Regulación del ciclo celular

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