SCREENING DE RESIDUOS DE ANTIBIÓTICOS EN PRODUCTOS DE

Transcripción

1 JORNADA TÉCNICAS RÁPIDAS DE CONTROL DE CALIDAD Y SEGURIDAD ALIMENTARIA APLICADAS A LOS PRODUCTOS DE LA PESCA Y LA ACUICULTURA 8 de Septiembre, 2011 SCREENING DE RESIDUOS DE ANTIBIÓTICOS EN PRODUCTOS DE LA PESCA Y LA ACUICULTURA ÁREA DE MICROBIOLOGÍA Y TOXINAS ANFACO-CECOPESCA Campus Univ. 16, Vigo (PO)

2 INTRODUCCIÓN: LOS ANTIBIÓTICOS EN LA PRODUCCIÓN ACUÍCOLA ACUICULTURA: Producción intensiva de organismos marinos destinados al consumo humano, incluyendo pescado y marisco, en condiciones controladas para incrementar la producción Tanques de cultivo intensivo de rodaballo Ejemplares de lenguado criados en cautividad

3 INTRODUCCIÓN: LOS ANTIBIÓTICOS EN LA PRODUCCIÓN ACUÍCOLA Alta densidad de población Aparición de episodios infecciosos y/o parasitarios Alevines de trucha Utilización ió de fármacos con fines profilácticos y/o terapéuticos Juveniles

4 INTRODUCCIÓN: LOS ANTIBIÓTICOS EN LA PRODUCCIÓN ACUÍCOLA RIESGOS DEL MAL USO DE LOS ANTIBIÓTICOS Problemas medioambientales Aparición de cepas bacterianas resistentes Cloranfenicol Consecuencias sobre la salud humana: alergias, intoxicaciones, TIEMPO DE ESPERA O PERÍODO DE SUPRESIÓN

5 INTRODUCCIÓN: LOS ANTIBIÓTICOS EN LA PRODUCCIÓN ACUÍCOLA REQUISITOS Calidad Seguridad: animales de destino, administrador, consumidor y medio ambiente Eficacia LMRs ( Límites Máximos de Residuos ): contenido máximo resultante de la utilización de un medicamento veterinario autorizado por la legislación Tiempo de espera

6 INTRODUCCIÓN: LOS ANTIBIÓTICOS EN LA PRODUCCIÓN ACUÍCOLA LEGISLACIÓN EUROPEA Directiva 96/23/EC Planes nacionales anuales de control de residuos de antibióticos Directiva 37/2010/EC Pharmacologically active substances and their classification regarding maximum residue limits in foodstuffs of animal origin

7 Contiene antibióticos? Cuáles? En qué concentración? Filetes de pescado Económico en tiempo y coste Sencillo Multiresiduo Límite de detección del método ajustado al LMRs Adecuados para el análisis de un elevado número de muestras

8 MÉTODOS DE SCREENING O CRIBADO Métodos inmunológicos (ELISAs) Métodos microbiológicos Biosensores MÉTODOS DE CONFIRMACIÓN Métodos cromatográficos Espectrometría de masas

9 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS Inhibición del crecimiento bacteriano No requieren un equipamiento sofisticado Permiten cubrir un amplio espectro de antibióticos en un único análisis Dos tipos de pruebas microbiológicas Tests multi-placa Tests en tubo

10 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS: TESTS MULTI-PLACA HALOS DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO BACTERIANO Las placas se vuelven opacas cuando se produce crecimiento bacteriano y se observa una clara inhibición del crecimiento cuando las muestras contienen residuos de antibióticos

11 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS: TESTS MULTI-PLACA Test de las 4 placas (Four Plate Test, FPT) Detección de residuos de antibióticos en carne de ganado 3 placas con Bacilus subtilis, 1 placa de Microccocus luteus Falsos positivos en riñón Laborioso

12 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS : TESTS EN TUBO Alternativa práctica a los Tests multi-placa Kit Explorer y Kit Equinox Tests en tubo

13 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS : TESTS EN TUBO Kit Explorer Formato Placa microtiter de 96 tests (pocillos divisibles) Tipo de muestra carne fresca, hígado, riñón, pienso y huevos Tiempo de ensayo 3,5 h aprox. (preparación de la muestra no incluida) Preparación de la muestra Carne: Calentamiento y centrifugación (o filtrado) Huevos: Dilución con agua destilada y calentamiento Interpretación de resultados Lectura visual o fotométrica Caducidad Caduc dad 6 meses

14 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS : TESTS EN TUBO Kit Equinox Formato Placa microtiter de 96 tests Tipo de muestra carne, leche y huevos Tiempo de ensayo 20 h aprox. (preparación de la muestra no incluida) Preparación de la muestra Carne: Calentamiento y centrifugación (o filtrado) Huevos: Dilución con agua destilada y calentamiento Interpretación de resultados Lectura visual o fotométrica Caducidad Caduc dad 7 meses

15 DESARROLLO DE UN MÉTODO PARA EL EMPLEO DE LOS KIT EXPLORER Y EQUINOX EN LA DETECCIÓN DE RESIDUOS DE ANTIBIÓTICOS EN PRODUCTOS DE LA PESCA Y LA ACUICULTURA Distintas matrices de pescado: rodaballo y panga Suplemento con distintas concentraciones de antibióticos 8 réplicas de cada concentración Límite de detección para cada uno de los antibióticos

16 Principios activos LMR (µg/kg) Límite screening Sulfonamidas Quinolonas Tetraciclinas Beta-lactámicos Florfenicol Trimetoprim Límite de detección de residuos de antibióticos en pescado mediante los kits Explorer y Equinox

17 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS : TESTS EN TUBO Triturar el músculo de pescado Pesar 2 g Añadir 5 ml de acetonitrilo/acetona 70:30 (v/v) Homogenizar durante 1 min Centrifugar a 5000 g / 10 min /4ºC Recuperar el sobrenadante y evaporarlo en chorro de nitrógeno a 40ºC Resuspender en 10 ml de extracto de carne (8 g/l)

18 Esquema del procedimiento del Kit Explorer

19 Esquema del procedimiento del Kit Equinox

20 CONCLUSIONES Los métodos de screening o cribado permiten analizar un elevado número de muestras con un coste económico y de tiempo bajo Los métodos microbiológicos son una alternativa sencilla y fiable que permiten abarcar un amplio espectro de antibióticos Los métodos microbiológicos optimizados para productos de la pesca son escasos Para optimizar un método de screening o cribado es necesario considerar con qué matriz estamos trabajando y qué tipo de residuo de antibiótico queremos detectar

21 MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN!