Instructivo técnico para el diagnóstico de PRRS mediante ELISA IDEXX. Tabla de Contenidos
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- Rosario Quintana Gutiérrez
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1 INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL DIAGNÓSTICO DE PRRS MEDIANTE Tabla de Contenidos Contenido Página 1 OBJETIVOS Y ALCANCE REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REQUISITOS Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de infraestructura Requisitos de equipamiento Requisitos de materiales y reactivos Requisitos de personal Requisitos específicos Medios de verificación de requisitos ANÁLISIS/ENSAYO Captación y envío de la muestra Recepción y manejo de la muestra/contramuestra Metodología Cálculo y expresión de resultados REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS ANEXOS... 5 Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 1 de 9
2 1 OBJETIVOS Y ALCANCE El objetivo de este instructivo es entregar las directrices para la realización del análisis/ensayo de ELISA PRRS IDEXX en sueros porcinos por parte de laboratorios acreditados como apoyo al proyecto de control oficial de dicha enfermedad. Del mismo modo, en este documento se estipulan instrucciones técnicas que deben cumplir los laboratorios que obtengan finalmente la acreditación. 2 REFERENCIAS Y DOCUMENTOS RELACIONADOS a) Protocolo requisito para laboratorio de nivel de bioseguridad 1 (Anexo N 1). b) Protocolo de trabajo y desarrollo de la técnica ELISA-PRRS-IDEXX. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS PRRS : Síndrome Reproductivo -Respiratorio Porcino. ELISA : Enzime Linked Inmunosorbent assay. B : Buena. R : Regular. M : Mala. 4 REQUISITOS 4.1 Requisitos de infraestructura, equipos, materiales y reactivos Requisitos de infraestructura El laboratorio debe contar con todos los requisitos estructurales establecidos para un laboratorio tipo 1. (ver Anexo N 1) Requisitos de equipamiento El laboratorio debe contar con el siguiente equipamiento: - Refrigerador con congelador. (Refrigerador 2 a 8 C y congelador -10 a -25 C) - Estufa de cultivo de C. - Lector ELISA. - Sistema de destrucción y eliminación de residuos tóxicos y microbiológicos. - Micropipetas. (debidamente calibradas) Requisitos de materiales y reactivos El laboratio debe contar con: - Probetas de diferentes volúmenes. - Placas de dilución de 96 pocillos - Puntas plásticas. Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 2 de 9
3 - Bañitos para poner soluciones. - Recipientes para eliminar puntas y placas de dilución. - Lavador de placas manual o automático (opcional). - Kit comercial ELISA-PRRS-IDEXX. (Herd Check virus antibody test kit 2XR) - Agua destilada. - Solución desinfectante (alcohol, cloro, otro.) 4.2 Requisitos de personal El analista a cargo de la realización de la prueba debe estar en posesión de un titulo técnico relacionado con el área biológica y tener la capacitación que asegure el buen desempeño de la técnica acreditada. 4.3 Requisitos específicos. El laboratorio debe tener las condiciones de infraestructura y funcionamiento de un laboratorio de nivel 1. El laboratorio de contar con un libro de ingreso de muestras, donde se registren los siguientes datos de cada muestra recepcionada: a) Tipo de muestra. b) Calidad de la muestra recibida (B -R-M). c) Nombre de propietario. d) Región. e) N de protocolo. f) Fecha de toma de muestra. g) Fecha de recepción de la muestra. h) Fecha de entrega de resultados. i) Nombre de persona que envía la muestra. j) Resultados obtenidos. 4.4 Medios de verificación de requisitos. El laboratorio postulante debe adjuntar a la solicitud de Acreditación, además de los antecedentes establecidos en el numeral 6.1 del Reglamento para la Acreditación de Laboratorios de Análisis /Ensayo del Servicio Agrícola y Ganadero, los documentos que a continuación se detallan y que dan cuenta del cumplimiento de los requisitos establecidos por el SAG en este capítulo. - Listado de equipos críticos que incluya la mantención y calibración de éstos. - Registro de eliminación de residuos y material contaminante. - Plano del laboratorio. - Currículo del personal (currículo, certificado de titulo y certificado de capacitación). Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 3 de 9
4 5 ANÁLISIS/ENSAYO Técnica ELISA PRRS - IDEXX de acuerdo a kit comercial. 5.1 Captación y envío de la muestra. La muestra para este análisis es sangre de porcino, sin anticoagulante, en cantidad suficiente con refrigeración permanente. Su captación y envío a un laboratorio acreditado para este, será responsabilidad de un Médico Veterinario Oficial del SAG o de un Médico Veterinario Acreditado, por lo tanto no es una actividad incluida en la competencia del laboratorio acreditado para este análisis. En todo caso siempre la muestra será acompañada de un Protocolo de toma de muestra y resultados de laboratorios (Anexo N 2). 5.2 Recepción y manejo de la muestra/contramuestra La muestra debe ser recepcionada por una persona capacitada para esa función. Las muestras deben ser recibidas acompañadas de un protocolo oficial de toma y envío de muestras. El laboratorio debe registrar toda muestra recepcionada en el libro de ingreso de muestras. De las muestras que salgan positivas se deberá conservar una contramuestra para ser verificada en el laboratorio del SAG, en caso de que se estime necesario, por el plazo de un año. El laboratorio debe contar con un libro de ingreso de muestras en el cual queda expresado: 5.3 Metodología. La metodología a seguir, es de acuerdo al protocolo establecido en el kit comercial. 5.4 Cálculo y expresión de resultados Se debe aplicar el sistema de cálculo y expresión descrito en el protocolo del kit comercial. 6 REGISTRO Y ENVÍO DE LOS RESULTADOS El analista debe anotar los resultados obtenidos en el mismo Protocolo de toma de muestra y resultados de laboratorios con el cual la muestra fuera recepcionada, de acuerdo al formato oficial del SAG que se entrega en Anexo N 2. Este protocolo será devuelto al Médico Veterinario Oficial o Acreditado que solicitó el servicio de diagnóstico. Copia del protocolo será archivada en el laboratorio y registrada en el libro de ingreso de muestras. El laboratorio deberá enviar al Jefe del Departamento de Laboratorios y Estaciones Cuarentenarias del SAG un informe semestral de la actividad realizada como laboratorio acreditado, de acuerdo al formato que se adjunta (Anexo 3). Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 4 de 9
5 7 ANEXOS 7.1 Anexo Nº 1: Laboratorio de Nivel de Bioseguridad 1 1 El Nivel 1 de Bioseguridad (BSL-1) es apropiado para trabajar con microorganismos no considerados causantes de enfermedades en seres humanos sanos. Éste es el tipo de laboratorio presente en el control de aguas municipales, colegios de enseñanza media y universitaria que imparten clases de Microbiología Introductoria, en los cuales los agentes manipulados no son considerados de riesgo. Existe una puerta que puede ser cerrada para mantener a las visitas fuera del laboratorio cuando los trabajos con agentes estén en curso. Se deben colocar señales de advertencia de riesgo biológico en la entrada del laboratorio que indiquen la presencia de cualquier riesgo, incluyendo materiales radioactivos, rayos láser, equipos emisores de sonidos de alta frecuencia o químicos tóxicos. Hay un lavamanos disponible, de preferencia cerca de la puerta. Los materiales de desecho son descartados de acuerdo al tipo de riesgo y existe una bandeja química apropiada para recolectar los implementos contaminados. El trabajo es realizado sobre una mesa de trabajo abierta sobre la cual pueden desplegarse protectores con respaldos de plástico para recibir salpicaduras o gotas asociadas con la manipulación. Las superficies de las mesas deben ser impermeables al ácido y todo el mobiliario debe ser resistente. Si existen ventanas que se abren hacia el exterior, deben estar provistas de pantallas protectoras o mosquiteros. El laboratorio debe estar diseñado de tal forma que pueda ser fácilmente limpiado y descontaminado. En Nivel 1 de Bioseguridad (BSL-1) no existen recomendaciones especiales respecto a que el laboratorio esté aislado de otras áreas del edificio. Aunque no exista una razón específica de seguridad biológica para realizar más de seis (6) cambios de aire por hora en un laboratorio BSL-1, esto puede ser necesario si existen químicos volátiles o químicos tóxicos en uso. En general, el flujo de aire direccional hacia el interior es lo ideal. En Nivel 1 de Bioseguridad, las prácticas microbiológicas estándar incluyen el uso de dispositivos pipeteadores mecánicos, existiendo la prohibición de comer, beber o fumar en el laboratorio y se requiere de lavado de manos de todas las personas al finalizar el trabajo o abandonar el laboratorio. Las personas que trabajen en el laboratorio deben usar un delantal para proteger su ropa de calle. Es una práctica recomendada el uso de guantes al manipular agentes. El equipo de protección adicional puede incluir el uso de máscaras contra salpicaduras o protecciones faciales y oculares. En Nivel de Bioseguridad (BSL- 1) las precauciones especiales no son necesarias. El lavado de manos es uno de los procedimientos más importantes que pueden ser utilizados por los laboratoratoristas para asegurar la remoción de agentes microbiológicos indeseados, materiales radioactivos o químicos presentes en el medio ambiente del laboratorio. El uso de jabón líquido es preferible al jabón de barra; veinte segundos de vigoroso jabonado removerán efectivamente la mayoría de estos materiales. Luego del secado de manos con una toalla de papel, puede usarse ésta para cerrar las llaves, evitando así la recontaminación de las manos. Los científicos que realizan supervisiones totales de los laboratorios BSL-1 necesitan tener una capacitación general en Microbiología o una ciencia relacionada. El supervisor es responsable del establecimiento de los procedimientos generales de seguridad en el laboratorio y de asegurar que cada laboratorista sea debidamente instruido sobre estos procedimientos. El personal de laboratorio, por otra parte, necesita aceptar dicha capacitación y cumplir con los protocolos establecidos. 1 Basado en: Jonathan Y. Richmond, Ph.D. Director, Office of Health and Safety Centers for Disease Control and Prevention Atlanta, GA Adaptado de la 3ª edición de Bioseguridad en Laboratorios Microbiológicos y Biomédicos (Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories [1] ) del Centro de Control y Prevención de Enfermedades/ Institutos Nacionales de Salud (CDC/NIH) Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 5 de 9
6 Anexo Nº 2: Protocolo de toma de muestra y resultados de laboratorios REPUBLICA DE CHILE MINISTERIO DE AGRICULTURA SERVICIO AGRÍCOLA Y GANADERO Departamento Laboratorios y Estaciones Cuarentenarias Agrícola y Pecuaria Sub-Depto. Laboratorios Pecuarios Ruta 68 Km 22 Lo Aguirre Fono: ; Fax Anexo 268 SANTIAGO USO EXCLUSIVO DEL LABORATORIO PROTOCOLO N FECHA ING. FECHA DESP. PROTOCOLO DE TOMA DE MUESTRAS Y RESULTADOS LABORATORIO REGION SECTOR SAG ORD. H/E PROT ORIGEN PRE MAT VER MON CUAR VIG NOMBRE PROPIETARIO NOMBRE DEL PREDIO O LUGAR DE ORIGEN DIRECCION NOMBRE VE TERINARIO SAG / PARTICULAR: N DE MUESTRAS POR ESPECIE Nombre, Firma y Timbre FECHA DE MUESTREO BOV OV CAP POR EQ CAM AV OTRO TOTAL EXAMENES SOLICITADOS: OBSERVACIONES: N Autocrotales Raza Cat Edad Resultados N Autocrotales Raza Cat Edad Resultados MEDICO VETERINARIO LABORATORIO JEFE LABORATORIO PECUARIO Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 6 de 9
7 Instructivo del Llenado de Protocolo de Toma de Muestras y Resultados Laboratorio El correcto y completo llenado del Protocolo de Toma de Muestras y Resultados de Laboratorio, es una parte fundamental para la posterior interpretación de los resultados del laboratorio y para los correspondientes análisis epidemiológicos. Debido a las eventuales implicancias de los resultados de las muestras enviadas, es necesario que todos los datos que el protocolo solicita sean llenados completamente y de una manera legible, que pueda ser entendida por cualquier persona que requiera la información. El Protocolo consta de 2 partes: 1.- Identificación del origen de las muestras En esta parte se solicita la siguiente Información: Región: En esta casilla se debe poner la región del país donde la muestra fue recolectada. Sector: En esta casilla, se debe poner el nombre de la Oficina SAG, donde geográficamente se ubica el predio o lugar de donde las muestras fueron colectadas. ORD, H/E: Es el número del documento (Ordinario o Hoja de Envío) que acompaña el envío del protocolo y las muestras al Laboratorio. Origen: Esta casilla contiene 6 celdas que se dividen en 2 grupos. Las que describen el lugar de origen de las muestras. Una de estas casillas debe ser llenada con una X : PRE: referida a Predio. Si la muestra fue tomada en cualquier tipo de predio o plantel de producción animal MAT: referida a Matadero. Si la muestra fue tomada en algún tipo de centro de faenamiento de animales VER: referida a Veranada. Si las muestras fueron tomadas en zonas establecidas como campos de pastoreo cordillerano bajo control. Las que describen el propósito de las muestras. Una de estas casillas debe ser llenada con una X. Las celdas MON, CUA y VIG sólo podrán ser marcadas cuando la toma de muestras haya sido realizada por veterinarios SAG. MON: referida a Monitoreo. Si la muestra tomada corresponden o están insertas dentro del plan de monitoreo anual entregado por el Departamento de Protección Pecuaria. CUA: referida a Cuarentenas. Si las muestras tomadas corresponden a animales que se encuentran en cuarentena de importación o de exportación, no refiriéndose en este caso a las cuarentenas decretadas por emergencia sanitaria. VIG: referida a Vigilancia. Si las muestras tomadas corresponden a actividades de vigilancia. Nombre Propietario: Debe indicarse el nombre del propietario de los animales muestreados o de su responsable legal. Debe llenarse un protocolo por cada propietario. Nombre del Predio o Lugar de Origen: Debe ponerse el nombre del Predio, plantel o lugar donde se encuentran los animales muestreados. Dirección: Debe indicarse la dirección del predio, plantel o lugar donde se encuentran los animales muestreados, esta dirección debe ser clara y suficiente como para llegar al sitio. Nombre Veterinario SAG / Particular: Debe indicarse el nombre del profesional que es responsable del muestreo y envío de las muestras, además debe estamparse la firma y timbre correspondiente. Además Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 7 de 9
8 debe tacharse la palabra que no corresponda al origen del veterinario, por ejemplo si el que envía el protocolo es un veterinario particular deberá tachar la palabra SAG. Fecha de Toma de Muestra: Se debe incluir la fecha (día, mes y año), en que las muestras fueron colectadas. N de Muestras por Especies: Incluye 9 casillas donde se debe indicar el número de muestras colectadas en cada una de las especies. BOV: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en la especie Bovina OVI: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en la especie Ovina CAP: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en la especie Caprina POR: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en la especie Porcina EQ: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en la especie Equina CAM: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en la especie Camélida AV: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en la Aves OTR: Se debe Incluir el Número de muestras colectadas en otras especies, señalando de cuál se trata TOTAL: Se debe Incluir el Número Total de muestras colectadas, o sea, la sumatoria de las muestras. Exámenes Solicitados: Se debe incluir el o los nombres del los exámenes solicitados o los nombres de las enfermedades que se requiere diagnosticar. Observaciones: En este punto se debe incluir cualquier elemento que sea importante en el diagnóstico de laboratorio, por ejemplo: si los animales muestreados han sido vacunados, si existen antecedentes previos de enfermedad en el predio, etc. 2.- Identificación de las muestras y resultados. Aquí se encuentra un cuadro, en cuyas columnas se indica: N : se refiere al número correlativo de la muestra tomada. Autocrotales: se refiere al número de autocrotal o alguna característica que permita identificar el animal en forma individual. Raza: se refiere a la raza del animal muestreado Cat.: se refiere a la categoría o tipo de animal muestreado. Edad: se refiere a la edad del animal muestreado. Resultado: Esta casilla es de uso exclusivo del laboratorio, donde debe indicarse el resultado del examen realizado y la técnica aplicada. Importante Al enviar las muestras al laboratorio debe adjuntarse el protocolo por fuera del embalaje de las muestras y no al interior, puede utilizar un sobre que este adherido al exterior pero no enviar al interior. Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 8 de 9
9 7.2 Anexo Nº 3: Formato de consolidado semestral. SERVICIO AGRÍCOLA Y GANADERO LABORATORIO DIRECCIÓN REGION FECHA DIAGNOSTICO DE PRRS INFORME SEMESTRAL LABORATORIO ACREDITADO ANALISTA SERIE ANTIGENO UTILIZADO PREDIO PROPIETARIO UBICACIÓN N ANIMALES MUESTREADOS N ANIMALES POSITIVOS FECHA DEL DIAGNOSTICO Código: IT-LAB-03-v01 Pág. 9 de 9
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