Licda. Yarisel Rodríguez Mgtra. Dalis Mojica ICGES/LCRSP

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1 Licda. Yarisel Rodríguez Mgtra. Dalis Mojica ICGES/LCRSP

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3 RED NACIONAL DE DENGUE PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DE LA CALIDAD SUPERVISIONES PRUEBAS DE PROFICIENCIA CONTROL DE CALIDAD INDIRECTO

4 No hay laboratorios de la red

5 Evaluación de los Kits comerciales para diagnóstico que ingresen a Panamá (Decreto 148 del 9 de agosto de 1999 (gaceta oficial 23868)

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8 ACCESIBILIDAD MÉTODOS DIRECTOS MÉTODOS INDIRECTOS Aislamiento Viral Detección del genoma Detección de antígeno Serología IgM Serología IgG CONFIABILIDAD Guzman et al., Nature Rev, 2011

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10 MUESTRAS: Suero Momento de recolección: - 5 a 21 días CADENA DE FRÍO: Muestras < 4 días (4-8ºC) y > 4 días (-20º C) DATOS COMPLETOS : Formulario único de vigilancia epidemiológia: (Fecha de inicio de los síntomas, Fecha toma de muestra, Historia de viajes, etc.) CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD MUESTRAS: Suero (1ml) o sangre completa (sin aditivos o con gel) Momento de recolección: > 9 días de inicios de síntomas hasta 45 días CADENA DE FRÍO: Muestras < 4 días (4-8ºC) y > 4 días (-20º C) DATOS COMPLETOS : Formulario único de vigilancia epidemiológica (Fecha de inicio de síntomas, Fecha toma de muestra, Historia de viajes, etc.) CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD IMPORTANTE EVITAR CICLOS DE CONGELADO Y DESCONGELADO DE LAS MUESTRAS

11 Transmisión de CHIKV: Por picaduras de artrópodos infectados. Protegerse: ropa, mosquitero impregnado, repelente e insecticida CHIKV es un agente de bioriesgo de nivel 3, La viremia es más alta y se transmite más facilmente que el dengue (sangre-piel). Se considera que se pueden transmitir por el contacto con animales infectados, sangre, suero, plasma y tejidos Durante toma de muestra y manipulación: Equipo de protección personal: guantes, bata, mascarilla, lentes protectores o mascara protectora de rostro. Diagnóstico molecular o de serología: BSL2, aislamiento BSL2* o BSL3 Las muestras deben enviadas como material potencialmente infeccioso, utilizar guantes cuando se manipulan Toda muestra sospechosa o todo instrumento en contacto con esas muestras: descartar en basuras de bioriesgo

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13 IgG Signos y síntomas Signos y síntomas Viremia IgM Viremia Vaughn, 2005

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16 ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE DENGUE EN LA RED NACIONAL DE DENGUE LABORATORIO DE LA RED NACIONAL DE DENGUE RECIBE PACIENTE CON FORMULARIO COMPLETO CLASIFICA MUESTRAS 0-3 DÍAS DE SÍNTOMAS DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO -Detección del AgNS1 - Pacientes hospitalizados - Vigilancia del serotipo circulante- Enviar muestra al ICGES 4 DÍAS DE SÍNTOMAS* NO TOMAR MUESTRA Y CITAR AL PACIENTE PARA TOMARLA DEL DÍA 5 AL 21 DE INICIO DE SÍNTOMAS 5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS IgM/IgG PRUEBA DE ELISA POSITIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO REPORTAR ENVIAR 10% DE MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD Y VIGILANCIA VIROLÓGICA AL ICGES* CITAR AL PACIENTE PARA II MUESTRA EN FASE CONVALESCIENTE REPORTAR ENVIAR 10% DE REPORTAR MUESTRAS PARA MUESTRAS CONTROL DE ENVIADAS POR LOS LABORATORIOS DE LA RED NACIONAL DE DENGUE AL CALIDAD AL ICGES INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD *Los casos con sospecha de Dengue Grave deben ser enviados inmediatamente al ICGES previa notificación CLASIFICACIÓN a DE MUESTRAS Epidemiología local y al ICGES. 0-4 DÍAS DE SÍNTOMAS RT-PCR TIEMPO REAL * 5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS PRUEBAS SEROLÓGICAS POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO REPORTAR REPORTAR REPORTAR REPORTAR CASO CONFIRMADO CASO CONFIRMADO Versión 2013 * En caso de agotarse los reactivos para RT-PCR Tiempo Real, las muestras serán analizadas mediante cultivo celular, del cual seobtienen resultados entre los 14 a 30 días. NOTA: Los Laboratorios de la Red enviarán el 10% de muestras Negativas y Positivas para detección de anticuerpos IgM e IgG y Antígeno NS1, además las muestras agudas para vigilancia virológica de acuerdo a lo establecido en los lineamientos para la temporada baja y de brote de casos de dengue.

17 ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE CHIKUNGUNYA EN EL ICGES MUESTRAS ENVIADAS POR LAS INSTALACIONES DE SALUD A NIVEL NACIONAL AL INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD CLASIFICACIÓN DE MUESTRAS 0-8 DÍAS DE SÍNTOMAS RT-PCR TIEMPO REAL CHIK V * Mayor o igual a 9 DÍAS DE SÍNTOMAS (PRIMERA MUESTRA) ELISA IgM CASERA PARA CHIKV O COMERCIAL CON R.S POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO SOSPECHOSO REPORTAR CASO CONFIRMADO REQUIERE SEGUNDA MUESTRA* REQUIERE SEGUNDA MUESTRA* NEGATIVO POSITIVO REQUIERE SEGUNDA MUESTRA* NEGATIVO POSITIVO REPORTAR SOSPECHOSO INDETERMINADO CASO CONFIRMADO * LA SEGUNDA MUESTRA DEBE OBTENERSE DOS SEMANAS DESPUÉS DE TOMADA LA PRIMERA MUESTRA. Versión 2014

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19 Standard test: Detección de IgM e IgG Sencilla Gran cantidad de sueros Diagnóstico de rutina Ampliamente distribuída Diagnóstico rápido ELISA (formato más común) Infección reciente Serum MUESTRAS Saliva Filter paper

20 IgM La prueba de ELISA de captura contra Acs IgM para Dengue utilizada en la red no distingue entre Infección primaria o secundaria.

21 Ig G La prueba de ELISA de captura contra Acs IgG para Dengue utilizada en la red sólo es positiva en casos de Infección Secundaria.

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24 MUESTRAS DEL DÍA 4 NO SE DEBEN PROCESAR EXCEPTO CASOS FATALES, GRAVES U HOSPITALIZADOS. LOS LINEAMIENTOS DE LABORATORIO SOLO APLICAN PARA LAS MUESTRAS NO PARA MANEJO CLÍNICO. CONTROL DE CALIDAD (ENVIAR AL ICGES): 10% DE MUESTRAS POSITIVAS Y NEGATIVAS EN EL DX DE ACS 10% DE POSITIVAS Y 10% DE NEGATIVAS EN EL DX DE NS1 VIGILANCIA VIROLÓGICA (ENVIAR AL ICGES): EN TEMPORADA BAJA: TODAS LAS MUESTRAS AGUDAS (O-3 DÍAS DE SÍNTOMAS) EN BROTE O EPIDEMIA: SÓLO EL % DE MUESTRAS QUE ESTIPULE EPIDEMIOLOGÍA. ES OBLIGATORIO EL USO DEL FORMULARIO UNICO PUES CONTIENE VARIABLES NECESARIAS PARA LA TOMA DE DECISIONES EN LA REALIZACIÓN DE LAS PRUEBAS DE LABORATORIO. SE REQUIERE UNA COMUNICACIÓN Y COORDINACIÓN PERMANENTE ENTRE LABORATORIO, EPIDEMIOLOGÍA Y CLÍNICOS PARA EL ADECUADO USO DE LAS PRUEBAS Y RECURSOS DE LA INSTALACIÓN.

25 ELISA IgM DE CAPTURA -ELISA Casera (Protocolo del CDC) ELISAs COMERCIALES (IgM, IgG) -En proceso de registro sanitario

26 1. Coat With Goat anti-human IgM 4 Overnight 2. Add Patient 1:400 1 Hour Reacción cruzada posible con otros alfavirus (Mayaro, EEEV) Confirmar muestras positivas con 2nda muestra (y neutralización en placas) Neutralization 3. Add Antigen 4 Overnight HRP HRP 4. Add HRP antigroup McAb 37 1 Hour No neutralization

27 CHIK IgM Capture ELISA (P/N) CHIK VEE MAY EEE Cortesía, Dr. Robert Lanciotii, DVBID, CDC-USA

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29 Colaboración con el CDC

30 Cada 15 días se realiza genérico de alfavirus para muestras con sospecha de dengue que resulten negativas. Identificación de CHIK -RT-PCR en tiempo final genérico para Alfavirus (Sanchez-Seco MP, J Virol Methods 2001;95:153-61) -Secuenciación y comparación por BLAST Diagnóstico diferencial sólo clínicamente indicado

31 La confirmación etiológica específica de CHICK sólo es posible por técnicas de laboratorio. Las plataformas para vigilancia de dengue, permitirán la detección y vigilancia de CHICK. Los laboratorios deben implementar y fortalecer la capacidad básica para la detección viral (limitaciones de ensayos serológicos) La detección de IgM en una sola muestra es presuntiva. Una vez demostrada la circulación autóctona, no será necesario confirmar el 100% de los casos. PAHO/OMS

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