Tratamientos con productos naturales contra Varroa jacobsoni. Estudio comparativo de varios compuestos (timol, mentol y alcanfor)

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1 Agricultura Ecológica y Desarrollo Rural II Congreso de la Sociedad Española de Agricultura Ecológica. Pamplona-Iruña, septiembre de 1996 Tratamientos con productos naturales contra Varroa jacobsoni. Estudio comparativo de varios compuestos (timol, mentol y alcanfor) J. Llorente, M. Higes & M. Suarez Centro Apícola Regional. Servicio de Investigación Agraria de Castilla La Mancha. Marchamalo. Guadalajara. ABSTRACT The control of Varroa jacobsoni is being carried almost exclusively with chemical products with acaricide power. The possible appearance of resistences obliges us to look for any alternative to these products, substances which composition doesn t leave waste in the products of the hive. The use of thimol, menthol and camphor has been essayed in the Regional Apicultural Centre of Castilla-La Mancha. The efficiency obtained by thimol has been 99.2 per cent ( ); with reference to menthol, the efficiency was very low, 20.5 per cent ( ) and with camphor, it was obtained an average efficiency between those of the two former products, 71.4 per cent ( ). These results coincide with those reached by other searchers. Thimol as well as camphor can be used for varroosis control; thimol doesn t reach the minimum requested to be used in the V. jacobsoni control. RESUMEN El control de Varroa jacobsoni se está realizando casi exclusivamente con productos químicos con poder acaricida. La posibilidad de aparición de resistencias nos obliga a buscar alternativas a estos productos y hacerlo con aquellas sustancias que por su composición no dejen residuos en los productos de la colmena. La utilización de timol, mentol y alcanfor, ha sido ensayado en el Centro Apícola de Castilla-La Mancha. La eficacia obtenida por el timol ha sido del 99,2 por ciento (99,1-99,3); en cuanto al mentol, la eficacia fue muy baja, 20,5 por ciento (11,4-28,4) y con el alcanfor se obtuvo una eficacia

2 502 J. LLORENTE, M. HIGES & M. SUAREZ intermedia a la conseguida con los dos productos anteriores, 71,4 por ciento (62,7-81,1). Estos resultados coinciden con los obtenidos por otros investigadores. Tanto el timol como el alcanfor pueden utilizarse para el control de la varroosis. El mentol no alcanza el mínimo exigido para ser empleado en el control de V. jacobsoni. INTRODUCCIÓN En España, el control de Varroa jacobsoni se ha venido realizando mediante el uso de diferentes acaricidas sintéticos desde su aparición en nuestros apiarios en La presencia, casi constante, de cría en amplias zonas de nuestro país, así como la alta eficacia demostrada por el fluvalinato (Llorente et al., 1989; Ferrer-Dufol et al., 1991; Llorente et al., 1991), han sido determinantes para que en la actualidad el control de V. jacobsoni se realice casi exclusivamente mediante el uso de este acaricida, bien bajo la formulación autorizada Apistán, o en preparados artesanales basados en diferentes productos fitosanitarios (Klartan, etc). Estudios previos, Marchetti y Barbattini, (1984); Mladan et al., (1985); Hoppe y Ritter, (1989); Colin, (1990); Gal et al., (1992); Kraus et al., (1994); Imdorf et al., (1995) han demostrado la eficacia acaricida de diferentes aceites esenciales extraidos de plantas aromáticas: timol, lavanda, eucalipto, orégano, menta, etc. y por tanto la posibilidad de utilizarlos en el control de V. jacobsoni. El objetivo de nuestro estudio ha sido conocer la eficacia del timol, mentol y alcanfor en el control de V. jacobsoni, bajo las condiciones climáticas de la zona centro de España. MATERIAL Y MÉTODOS Material El ensayo se ha realizado en dos colmenares experimentales del Centro Apícola Regional, en Marchamalo provincia de Guadalajara, durante los meses de octubre y noviembre de Se utilizaron 16 colmenas Langstroth, modelo perfección, con el fondo modificado, lo que permitía la introducción por la parte posterior de la colmena de bandejas de polietileno que quedaban separadas de la actividad de la colonia por una malla metálica de 3 3 mm de luz. Las colmenas fueron divididas en dos grupos E1 (apiario 1) y E2 (apiario 2). Las colmenas del grupo E1 recibieron tratamiento acaricida: Timol (colmenas T-1, T-2, T- 3 y T-4). Mentol (colmenas M-1, M-2, M-3,y M-4). Alcanfor (colmenas A-1, A-2, A- 3 y A-4). Las colmenas del apiario E2 (colmenas 14, 15, 16 y 17) se utilizaron como testigo, no recibiendo tratamiento alguno.

3 TRATAMIENTOS CON PRODUCTOS NATURALES CONTRA VARROA JACOBSONI 503 Las colmenas fueron ocupadas por abejas (Apis mellifera) que estaban infestadas por V. jacobsoni de manera natural. Ninguna colonia había recibido tratamiento acaricida en los últimos 12 meses y no presentaban cría en el momento de comenzar el estudio. Los productos: timol, alcanfor y mentol estaban en forma cristalizada (sintetizados por Laboratorios Roig España) con una pureza próxima al 100 por cien. Método En base a la diferente toxicidad para las abejas fueron preparadas dosis de 10 g de timol, 30 g de mentol y 60 g de alcanfor, (previamente pulverizados y homogeneizados), y colocadas en paquetes de papel de aluminio. Estos fueron abiertos y aplicados en la parte superior de los cuadros. El tratamiento consistió en cuatro aplicaciones con intervalo de siete días en el caso del timol y una sóla aplicación en el caso del mentol y del alcanfor, debido a la evaporación mas lenta de estos últimos productos. Los ácaros muertos debido al tratamiento, así como los muertos por causas fisiológicas en las colmenas control, fueron recogidos en las bandejas situadas en el fondo de las colmenas. Estas fueron renovadas por primera vez a los siete días de aplicar el primer tratamiento y con el mismo intervalo durante todo el tiempo de duración del ensayo. El recuento de varroas fue realizado en el laboratorio del C.A.R. utilizando una técnica puesta a punto en el Centro. Para determinar la efectividad de los productos problema, se realizaron un tratamiento con dos tiras de Apistan por colmena, situadas en contacto con las abejas durante 35 días, seguido de dos tratamientos con Perizin, con un intervalo de siete días entre ambos. La eficacia del tratamiento fue calculada según la siguiente fórmula: Donde: V D+1 +V D V D+n E = 100 V T E = Eficacia V D+n = varroas contabilizadas durante el tratamiento V T = varroas contabilizadas en total. RESULTADOS Timol Todos los ácaros caídos durante el tratamiento aparecen reflejados en el tabla 1. La cantidad media alcanza una cifra de 4.232,3 con un mínimo de (colmena T- 1) y un máximo de (colmena T-4). (Figura 1).

4 504 J. LLORENTE, M. HIGES & M. SUAREZ Figura 1. Ensayo sobre la eficacia del timol en el control de la varroosis de Apis mellifera Tabla 1. Ensayo sobre la eficacia del timol en el control de la varroosis de Apis mellifera Nº de Controles Nº de Varroas Nº de Varroas en Nº Total Eficacia Colmena D+7 D+14 D+21 D+28 en Controles Control Final de Varroas % T ,1 T ,2 T ,1 T ,3 Máximo ,3 Mínimo ,1 Media 2121,5 1247,3 694,5 139,8 4232,3 34,3 4266,5 99,2 Desv. Típica 1335,8 929,2 715,8 125,1 2307,7 16,2 2323,4 0,1 Testigo , , , ,02 Finalizado el ensayo y después del tratamiento con Apistan y Perizin fueron recogidos 34,3 ácaros, de media con un mínimo de 11 en la colmena T-1 y un máximo de 48 en la colmena T-4. (Tabla 1). La eficacia obtenida con el timol en el control de la varroosis, en este ensayo, fue de 99,2 por ciento; 99,1 por ciento en las colmenas T-1 y T-3, como valor mínimo y 99,3 por ciento en la colmena T-4 como valor máximo. (Tabla 1).

5 TRATAMIENTOS CON PRODUCTOS NATURALES CONTRA VARROA JACOBSONI 505 Figura 2. Ensayo sobre la eficacia del mentol en el control de la varroosis de Apis mellifera Tabla 2. Ensayo sobre la eficacia del mentol en el control de la varroosis de Apis mellifera Nº de Controles Nº de Varroas Nº de Varroas en Nº Total Eficacia Colmena D+7 D+14 D+21 D+28 en Controles Control Final de Varroas % M ,4 M ,4 M ,5 M ,3 Máximo ,4 Mínimo ,4 Media 68,3 40,3 62,0 101,3 259,3 834,5 1106,3 19,1 Desv Típica 77,2 53,3 106,7 112,3 348,8 780,7 1122,9 7,4 Testigo , , , ,02 Mentol En los cuatro controles que se llevaron a cabo después del tratamiento se recogió una media de 259,3 ácaros, con un rango de (colmenas M-2 y M-1 respectivamente). (Tabla 2 y Figura 2). Después de los tratamientos con Apistan y Perizin se recogió una media de 834,5 ácaros (229 en la colmena M-4 y en la colmena M-1). (Tabla 2).

6 506 J. LLORENTE, M. HIGES & M. SUAREZ Figura 3. Ensayo sobre la eficacia del alcanforl en el control de la varroosis de Apis mellifera Tabla 3. Ensayo sobre la eficacia del alcanfor en el control de la varroosis de Apis mellifera Nº de Controles Nº de Varroas Nº de Varroas en Nº Total Eficacia Colmena D+7 D+14 D+21 D+28 en Controles Control Final de Varroas % A ,0 A ,8 A ,6 A ,1 Máximo ,0 Mínimo ,6 Media 688,5 189,8 68,0 60,8 1019,8 330,8 1350,5 72,1 Desv Típica 549,0 238,8 40,4 62,0 661,5 96,6 753,0 8,4 Testigo , , , ,02 La eficacia obtenida, en este ensayo, con el mentol fue de 19,1 por ciento (11,4 por ciento en la colmena M-2 y 28,4 por ciento en la colmena M-1). (Tabla 2). Alcanfor En los controles realizados en este ensayo después de aplicado el mentol se recogió una media de 1.019,8 ácaros con un rango de (colmenas A-2 y A-1 respectivamente). (Tabla 3 y Figura 3).

7 TRATAMIENTOS CON PRODUCTOS NATURALES CONTRA VARROA JACOBSONI 507 Aplicados los tratamientos de control se obtuvo una media de 330,8 varroas (216 en la colmena A-2 y 417 en la colmena A-1). (Tabla 3). La eficacia obtenida, en este ensayo con el alcanfor, fue de 72,1 por ciento, con un rango de 62,6-81,0 (colmenas A-3 y A-1). (Tabla 3). Colmenas testigo En las colmenas 14, 15, 16 y 17 se recogieron 49, 57, 53 y 188 ácaros respectivamente en el total de los controles. (Tablas 1, 2, y 3 y Figuras 1, 2 y 3). En el control final se recogieron 406, 157, 434 y 1064 ácaros respectivamente. (Tablas 1,2 y 3). La relación porcentual entre las varroas recogidas en los controles y las afectadas por los tratamientos acaricidas fue de 10,8, 26,6, 10,9 y 15,0 por ciento (colmenas 14, y 17 respectivamente). DISCUSIÓN En las condiciones experimentales de estos ensayos, el timol ha demostrado ser el producto más eficaz, con una media superior al 99 por ciento. Estos resultados son comparables a los obtenidos, en nuestro país, con diferentes piretroides como el fluvalinato o el flumethrin, (Llorente et al., 1989; Ferrer-Dufol et al., 1991; Higes et al., 1996). Nuestros resultados coinciden con los de Imdorf et al., (1995), en los que se demuestra un mayor poder acaricida del timol, en comparación con el mentol y el alcanfor. En los trabajos realizados utilizando timol como único acaricida, los resultados obtenidos son muy variables, dependiendo de la dosis aplicada, número de tratamientos, presencia de cría y época del año. Marchetti & Barbattini (1984), obtienen una eficacia media del 68,6 por ciento, aplicando cuatro tratamientos con 15 g de timol por colmena introducidos en paquetes de gasa. Chiesa (1991), obtiene eficacias del 96,8 por ciento con cuatro aplicaciones de timol (0,5 g por cuadro con abejas con dos días de intervalo con poca o nada presencia de cría, Greatti (1991), indica eficacias próximas al 99 por ciento, con cuatro tratamientos a 0,5 g por abejas, y eficacias próximas al 95 por ciento, con cuatro tratamientos a un g por colonia, cada cuatro o cinco días. Gal et al. (1992) obtienen eficacias del 84,8 por ciento con dos cartones absorbentes con el 10 por ciento de timol disueltos en parafina realizando dos tratamientos con intervalo de 14 días. En esta investigación se han obtenido eficacias muy altas con dosis superiores a las indicadas por estos autores, pero que guardaban relación con la población normal de las colonias en la época otoñal (seis-ocho cuadros con abejas y con poca o nada

8 508 J. LLORENTE, M. HIGES & M. SUAREZ presencia de cría) con una duración del tratamiento de 28 días. No coincidimos con lo indicado por Chiesa (1991), pues aplicando una dosis única según nuestro método, hemos conseguido en todos los casos una alta eficacia y hemos facilitado los tratamientos, evitando los problemas de dosificación por parte del apicultor apuntados por Greatti (1991). CONCLUSIONES La alta eficacia demostrada por el timol en nuestro trabajo, unido a la baja toxicidad para las abejas y el hombre, se presenta como el producto alternativo con mejor futuro para la lucha integral contra V. jacobsoni. La posibilidad de aparición de cría durante el período de tratamiento con este producto, aconseja cubrir al menos dos ciclos enteros de cría operculada (24 días) para asegurar una alta eficacia del timol. El alcanfor puede utilizarse para el control de la varroosis complementando el tratamiento con otros productos. El timol no es la mejor solución para el control de esta enfermedad. REFERENCIAS Colin, M. E., Essential oils of labiatae for controlling honey bee varroosis. J. Appl. Ent. 110, Chiesa, F., 1991 Efective control of varroatosis using powdered thymol. Apidologie 22, Ferrer Dufol, M., Martínez-Viñuelas, Al. & Sánchez-Acedo, C., Comparative tests of fluvalinate and flumethrin to control Varroa jacobsoni Oudemans. J. Apic. Res., 30, Gal, H., Slabezki, Y. & Lensky, Y., A preliminary repor on the effect of origanum oil and thymol applications in honey bee (Apis mellifera L) colonies in a subtropical climate on population levels of Varroa jacobsoni. Bee Science, 4, Greatti, M., Aggiornamento dei metodi di lotta contro Varroa jacobsoni ed efficacia di diversi acaricidi. L Informatore Agrario, 20, Higes, M., Suárez, M. & Llorente, J., Ensayo de la eficacia del Bayvarol (flumethrin) contra la varroosis de la abeja melífera (Apis mellifera) en presencia de cría. Vida Apícola, (in press). Hoppe, H., & Ritter, W., Comparative examinations for the control of varroatosis by means of ethereal oils. En Present Status of Varroatosis in Europe an Progress in the Varroa Mite Control. Proc Meet EC Experts Group, Udine 1988 (Cavalloro, E. Ed,.) Commission of European Communities, Luxembourg,

9 TRATAMIENTOS CON PRODUCTOS NATURALES CONTRA VARROA JACOBSONI 509 Imdorf, A., Kilchenmann, V., Bogdanov, S., Bachofen, B. & Beretta, C., 1995 Toxizität von thymol, campher, menthol und eucalyptol auf Varroa jacobsoni Oud. und Apis mellifera L in labortest. Apidologie, 26, Kraus, B., Koeninger, N. & Fuchs, S., Screening of substances for their effect on Varroa jacobsoni: attractiveness, repellency, toxicity an masking effects of ethereal oils. J. Api. Res., 33, Llorente, J., Robles, E. & Salvachúa, J. C., Trials of effectiveness of fluvalinate (Apistan) against varroatosis of honey bee sealed brood being present. Cuadernos de Apicultura, 6, Llorente, J., Robles, E. & Salvachúa, J. C., Investigaciones sobre procedimientos de lucha química contra Varroa jacobsoni Oud. Consejería de Agricultura de la Junta de Comunidades de Castilla-La Mancha ed.. Toledo. 72 pp. Marchetti, S. &. Barbattini, R., Comparative effectiveness of treatments used to control Varroa jacobsoni Oud. Apidologie, 15, Mladan, V., Erski-Biljic, M., Jakic, D. & Simic, M., Use of some preparations (Folbex VA, thymol, Apiakaridin, Varikol, Varitan and phenotiazine) in the control of Varroa. I. Vet. Glas, 39,