Columnas de series ODP2 HP. Mejor retención de sustancias de alta polaridad CUADERNO TÉCNICO. No.6

Transcripción

1 Columnas de series ODP2 HP Mejor retención de sustancias de alta polaridad CUADERNO TÉCNICO No.6

2 Contenido 1. Introducción 1-1. Especificaciones 1-2. Compatibilidad de eluentes de las series ODP2 HP 2. Ventajas de la ODP2 HP 2-1. Alto rendimiento 2-2. Retención de compuestos de alta polaridad 2-3. Análisis simple de sustancias básicas 2-4. Uso con baja concentración de sal 2-. Capacidad para eliar proteínas 2-6. Aplicación para el análisis de drogas en fluidos biológicos 2-7. Durabilidad en condiciones alcalinas 3. Rendimiento de las series ODP2 HP 3-1. Influencia del índice de flujo 3-2. Influencia de las cargas de la muestra 3-3. Influencia del volumen de inyección de la muestra 3-4. Influencia de la temperatura 3-. Influencia de un disolvente orgánico en el eluente 4. Conclusiones

3 1. Introducción Las series Shodex ODP2 HP consisten en una columna basada en polímeros para cromatografía de fase reversa. El rendimiento de las columnas ODP2 HP mejora en la mayoría de las columnas con base de resina y es comparable con las columnas ODS con base de sílice. ODP2 HP tiene una mejor retención de sustancias de alta polaridad, en comparación con las columnas ODS con un propósito más general. Las columnas ODS son sensibles a la absorción de proteínas, lo que resulta en la degradación de la columna. ODP2 HP está diseñada para eliar las proteínas y, así, ODP2 HP se pueden utilizar para el análisis de drogas en muestras biológicas que contienen proteínas sin que haya un rápido deterioro de la columna. Dado que la ODP2 HP se puede utilizar con una baja concentración de sal sin que haya una pérdida de formas de picos, es excelente para el análisis de LC/MS Especificaciones Tabla 1. Especificaciones de las columnas de series ODP2 HP Código de producto Nombre del producto NPT (por columna) Tamaño de la partícula (µm) Diámetro x largo (mm) F76221 ODP2 HP-4B 3. 4,6 x F76222 ODP2 HP-4D 13. 4,6 x 1 F76223 ODP2 HP-4E 17. 4,6 x 2 F67141 ODP2 HPG-4A guarda columna 4,6 x 1 F76224 ODP2 HP-2B 3. 2, x F7622 ODP2 HP-2D 7. 2, x 1 F ODP2 HPG-2A guarda columna 2, x 1 Para todas las columnas Material de relleno : Partículas poli(hidroximetacrilato) macroporos Cubiertas : acero inoxidable tipo 316 Disolvente en columna (inicial) : Agua/acetonitrilo = /4 Rango de ph : 3~12 Temperatura : 2~6 C Compatibilidad de eluentes : consulte la sección Compatibilidad de eluentes de las series ODP2 HP La ODP2 HP se puede utilizar con soluciones de agua, ácido, base y sal acuosa, incluso las soluciones buffer más populares, acetonitrilo, metanol y mezclas de estos componentes. <Ácidos representativos> <Bases representativas> <Soluciones buffer representativas> <Soluciones orgánicas polares> Ácido fosfórico, ácido fórmico, ácido acético y ácido trifluoruroacético. Amoníaco Solución buffer de fosfato, solución buffer de formato, solución buffer de acetato y solución buffer de carbonato. Metanol, acetonitrilo (Precauciones) 1) El eluente debe tener un rango de ph de 3~12. 2) La concentración total de ácido, base y sal debe ser de 1 mm o inferior. Generalmente, se recomienda un rango de 1~ mm. 3) Cuando agregue acetonitrilo o metanol a una solución de sal acuosa, verifique que no haya precipitación de sal antes de usar. 4) No se pueden usar sustancias orgánicas no polares, como hexano o tolueno

4 2. Ventajas de ODP2 HP 2-1. Alto rendimiento La figura 2-1 muestra los cromatogramas de ODP2 HP-4D y ODP-. ODP- 4D es una popular columna con base de polímero para la separación de fase reversa. El número de platos teóricos (NPT) de ODP2 HP-4D, que se mide con naftalina, es casi el doble del de la columna actual, ODP- 4D. ODP2 HP-4D Columna con base de polímero (actual) 123 Muestra: µl 1. Uracilo 3 mg/l 2. Teobroa 7 mg/l 3. Cafeína 13 mg/l 4. Fenol 3 mg/l. Benzoato de metilo 3 mg/l 6. Tolueno 1. mg/l 7. Naftalina 1 mg/l N : N : N : 9. 6 N : Fig. 2-1 Comparación de ODP2 HP y la columna actual Columna : Shodex ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1mm) Eluente : H 2 O/CH 3 CN=/4 Índice de flujo :,6 ml/ Detector : UV (24 nm) Temp. de la columna : 4 C Columna : Shodex Asahipak ODP- 4D (4,6 mm de diámetro x 1mm) Eluente : H 2 O/CH 3 CN=3/6 Índice de flujo :,6 ml/ Detector : UV (24 nm) Temp. de la columna : 4 C 2-2. Retención de compuestos de alta polaridad La figura 2-2 muestra la relación entre el parámetro hidrofóbico (log P) y el rendimiento de la retención (log k ). ODP2 HP mostró una mayor retención de sustancias de alta polaridad en comparación con otras columnas ODS y ODP-. fuerte 1,, ODP2 HP * Cuánto más bajo el valor de log P, más alta la polaridad; cuánto más alto el valor de log k, más alto el rendimiento de la retención. retención log k', Débil -, ODP- ODP2 HP ODS (A) ODS (B) ODP- -1, log P alta polaridad baja Fig. 2-2 Relación entre el parámetro hidrofóbico y la retención Columna : Shodex ODP2 HP-4D, Shodex Asahipak ODP- 4D ODS(A), ODS(B) (4,6 mm de diámetro x 1 mm c/u) Eluente : H 2O/CH 3CN=7/2 Índice de flujo : 1, ml/ Temp. de la columna : 4 C

5 2-3. Análisis simple de sustancias básicas La cromatografía de fase reversa se hace generalmente bajo condiciones de supresión de la disociación de la muestra o con un reactivo de par iónico de una carga opuesta a la de la muestra, agregado a la fase móvil. Esto hace posible la separación sobre la base de la hidrofobicidad. Sin embargo, el análisis mediante el uso de reactivos de par iónico es bastante complejo debido a la aparente participación de dos modos de separación, como se muestra a continuación. Además, una vez que la columna se usa con un reactivo de par iónico, generalmente no se puede volver a utilizar para un análisis diferente porque el reactivo es absorbido por la columna. (1) La muestra iónica y un reactivo de par iónico forman pares iónicos, que mejoran la hidrofobicidad de la muestra y, por lo tanto, la retención. El análisis de sustancias iónicas básicas se puede describir de la siguiente manera: R-NH reactivo de par iónico [ R-NH3 + reactivo de par iónico ] Sustancias básicas par iónico (2) El segmento hidrofóbico de un reactivo de par iónico es absorbido por la columna de fase reversa, que luego se comportará como una columna de intercambio iónico. En el caso del análisis en fase reversa de compuestos básicos, como aas cortas, corresponde el análisis bajo condiciones alcalinas, que evita que las sustancias básicas se disocien. Sin embargo, dado que las columnas con base de sílice generalmente tienen una vida útil muy corta en condiciones alcalinas, los reactivos de par iónico se utilizan para el análisis de compuestos básicos. Por el contrario, ODP2 HP, una columna de fase reversa con base de polímero, es superior en téros de durabilidad en condiciones alcalinas*. En otras palabras, es posible operar con eluentes alcalinos y simplificar la separación de fase reversa de los compuestos básicos mediante la utilización de ODP2 HP. Al eliar la necesidad de reactivos de par iónico se mejora tanto el proceso de separación como el proceso de detección de compuestos básicos. La figura 2-3 muestra ejemplos de análisis básicos de drogas mediante el uso de la columna ODP2 HP y la ODS, ODS (A)**. * Consulte la sección 2-7 sobre durabilidad en condiciones alcalinas de las columnas ODP2 HP. ** ODS(A) tiene una mejor desactivación (end-capping) de los grupos residuales de silanol que ODS(B). ODP2 HP-4D ODS (A) Atropina (pka 9,9) 3 mg/l Sin reactivo de par iónico Con un reactivo de par iónico 1 1 Fig. 2-3 Análisis de sustancias básicas por ODP2 HP y ODS(A) Columna : Shodex ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1mm) Eluente : Solución buffer de fosfato de sodio 1 mm (ph 11) /CH 3 CN=/4 Índice de flujo : 1, ml/ Detector : UV (22 nm) Temp. de la columna : 4 C Columna : ODS(A) (4,6 mm de diámetro x 1 mm) Eluente : Ácido 1-Pentano sulfónico sal sódica,1% /CH 3 CN=/4 Índice de flujo : 1, ml/ Detector : UV (22 nm) Temp. de la columna : 4 C

6 2-4. Uso con baja concentración de sal La relación entre la concentración de acetato de amonio y el rendimiento de la separación se comparó entre la ODP2 HP-4D y dos columnas de ODS, como se muestra en la figura 2-4. Cuando se utilizó 1 mm de solución buffer de acetato de amonio como eluente, cada columna mostró un buen cromatograma. Cuando se disuyó la concentración de acetato de amonio a 1 mm, las dos columnas ODS mostraron picos asimétricos como resultado de la interacción entre la escopolaa y los grupos residuales de silanol en la columna. ODS(A)**, que tiene una mejor desactivación (end-capping) de los grupos residuales de silanol que ODS(B), todavía muestra la influencia de algunos grupos residuales de silanol. Por otro lado, ODP2 HP-4D con base de polímero mostró una absorción no específica de escopolaa en los disolventes, incluso cuando se disuyó la concentración de acetato de amonio. La escopolaa eluye con una pico fino. Dado que el tiempo de elución y las formas de los picos no se ven afectados si se disuye la concentración de sal en el eluente, las columnas ODP2 HP son apropiadas para los métodos ESI (LC/MS), donde la concentración de sal en el eluente afecta la supresión iónica de la muestra. ODP2 HP-4D ODS (A) ODS (B) Escopolaa (pka 7,6) 3 mg/l 1mM 1mM Fig. 2-4 Relación entre la concentración de acetato de amonio y el rendimiento de la separación Columna : Shodex ODP2 HP-4D, ODS(A), ODS(B) (4,6 mm de diámetro x 1mm c/u) Eluente : Solución buffer CH 3 COONH 4 (ph 7,)/CH 3 CN=3/6 Índice de flujo : 1, ml/ Detector : UV (22 nm) Temp. de la columna : 4 C ** ODS(A) tiene una mejor desactivación (end-capping) de los grupos residuales de silanol que ODS(B)

7 2-. Capacidad para eliar proteínas Generalmente, cuando las proteínas se inyectan, estas son absorbidas por las columnas de ODS, y son una causa de la degradación de las columnas. Los disolventes de ODP2 HP tienen una alta polaridad y poros pequeños, que evitan la absorción de proteínas. Las proteínas quedan prácticamente excluidas de la columna y no son absorbidas por la columna. La figura 2- muestra la relación entre la cantidad de inyección de albúa sérica bovina (BSA) y el índice de cambio de la presión. La figura 2-6 muestra el cromatograma de la albúa sérica bovina (BSA). ODS (A) mostró un aumento radical de la presión con repetidas inyecciones de albúa sérica bovina, porque la albúa sérica bovina fue absorbida por el disolvente en la columna. Sin embargo, ODP2 HP-2B mostró una presión estable incluso después de la inyección 14 de albúa sérica bovina, dado que la albúa sérica bovina se eluyó antes, como se muestra en la figura Albúa sérica bovina (BSA) 7, mg/ml Índice de cambio de la presión [%] ODS (A) ODP2 HP-2B Cantidad de inyecciones Columna : Shodex ODP2 HP-2B, ODS(A) (2, mm de diámetro x mm c/u) Eluente : 1 mm CH 3 COONH 4 ac. /CH 3 CN=9/1 Índice de flujo :,2 ml/ Detector : UV (22 nm) Temp. de la columna : 3 C Fig. 2- Relación entre la cantidad de inyecciones de albúa sérica bovina (BSA) y el índice de cambio de la presión Albúa sérica bovina (BSA) 7, mg/ml, 1, 1, 2, Fig. 2-6 Cromatograma de albúa sérica bovina (BSA) Columna : Shodex ODP2 HP-2B (2, mm de diámetro x mm) Eluente : 1 mm CH 3COONH 4 ac. /CH 3CN=9/1 Índice de flujo :,2 ml/ Detector : UV (22 nm) Temp. de la columna : 3 C - -

8 2-6. Aplicación para el análisis de drogas en fluidos biológicos La técnica de LC/MS es una herramienta efectiva para el análisis de alta sensibilidad de drogas. Sin embargo, las proteínas presentes en el MS (detector de masa) pueden contaar el MS o provocar la supresión iónica de la muestra. A menudo, el tratamiento previo no extrae totalmente las proteínas. Resulta difícil realizar un análisis de los fluidos biológicos, ya que las proteínas coeluyen con el componente de interés. Las drogas de análisis reciben supresión iónica por parte de las proteínas, lo que conlleva la aparición de pequeños picos. Como se explicó en la sección 2- Capacidad de eliar proteínas, ODP2 HP logra separar las sustancias de análisis de las proteínas mediante la elución proteica temprana y adecuada. La figura 2-7 muestra el resultado del análisis del barbital (droga) con albúa sérica bovina (BSA) mediante la técnica LC/MS. Con una válvula de conmutación, se introdujo el barbital en el MS después de eluir la albúa sérica bovina y se detectó el barbital sin la influencia de supresión iónica. µau En blanco UV (21 nm) Introducción del barbital en el MS mediante válvula de conmutación Barbital µau con albúa sérica bovina (BSA) Albúa sérica bovina (BSA) Barbital UV (21 nm) Introducción del barbital en el MS mediante válvula de conmutación Barbital µg/l Albúa sérica bovina (BSA) 7, mg/ml Intensidad SIM : m/z=183 Área de picos del barbital: 1% Intensidad SIM : m/z=183 Área de picos del barbital: 99%,, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, Tiempo (),, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, Tiempo () Fig. 2-7 Análisis del barbital en albúa sérica bovina (BSA) (LC/MS) Columna : Shodex ODP2 HP-2B (2, mm de diámetro x mm) Eluente : 1 mm CH 3 COONH 4 ac./ch 3 CN=7/3 Índice de flujo :,2 ml/ Detector : UV (21 nm), ESI-MS (SIM negativo) Temp. de la columna : 3 C - 6 -

9 La figura 2-8 muestra cuatro análisis LC/MS de cromatogramas del barbital; por su parte, la figura 2-9 muestra los índices de recuperación del barbital. Las figuras comparan ODP2 HP-2B con una columna ODS desactivada, ODS (A)**, para la detección de barbital con y sin albúa sérica bovina (BSA). ODP2 HP-2B mostró una buena separación de proteínas y droga, sin mucho efecto de la supresión iónica y un alto índice de recuperación del barbital, incluso después de varias inyecciones. Por otro lado, ODS (A) con albúa sérica bovina mostró picos de barbital menores y un índice de recuperación menor en comparación con ODS (A) sin albúa sérica bovina, debido a la supresión iónica que provocaban las proteínas. Como puede observarse, ODP2 HP es adecuada para el análisis LC/MS de drogas en fluidos biológicos. ** ODS(A) tiene una mejor desactivación (end-capping) de los grupos residuales de silanol que ODS(B). SIM : m/z 183 SIM : m/z 183 Intensidad Intensidad ODP2 HP En blanco Área de picos del barbital: 1% ODP2 HP con albúa sérica bovina (BSA) Área de picos del barbital: 99%,, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, Tiempo () Intensidad Intensidad ODS(A) En blanco Área de picos del barbital: 1% ODS(A) con albúa sérica bovina (BSA) Área de picos del barbital: 71%,, 1, 1, 2, 2, 3, 3, 4, 4, Tiempo () Barbital µg/l Albúa sérica bovina (BSA) 7, mg/ml Fig. 2-8 Índice de recuperación del barbital en albúa sérica bovina (BSA) (LC/MS) 14 Índice de recuperación del barbital [%] ODP2 HP-2B ODS(A) Cantidad de inyecciones Columna : Shodex ODP2 HP-2B, ODS(A) (2, mm de diámetro x mm c/u) Eluente : 1 mm CH 3 COONH 4 ac. /CH 3 CN=7/3 Índice de flujo :,2 ml/ Detector : ESI-MS (TIC) Temp. de la columna : 3 C Fig. 2-9 Índice de recuperación del barbital en albúa sérica bovina (BSA) con inyecciones adicionales - 7 -

10 2-7. Durabilidad en condiciones alcalinas Por lo general, las columnas ODS con base de sílice se degradan rápidamente cuando se emplea un eluente alcalino, pues el sustrato de gel de sílice se disuelve bajo condiciones alcalinas. Se compararon los cromatogramas antes y después de emplear un eluente alcalino para ODP2 HP-4D y ODS(A), como muestra la figura 2-1. Asimismo, la figura 2-11 muestra el número relativo de platos teóricos (NPT) para piridina y la duración del flujo. El número de platos teóricos (NPT) antes del flujo de eluente alcalino es 1% en esta prueba. Para ODS (A), los tiempos de retención de cada muestra disuyeron rápidamente, lo que redujo el número de platos teóricos (NPT) luego de 24 horas de flujo de eluente alcalino, mostrando así degradación de la columna. Por otro lado, los tiempos de retención de cada muestra y el número de platos teóricos (NPT) permanecieron prácticamente estables aún después de horas de flujo de eluente alcalino. Esto demuestra la superioridad de ODP2 HP en la durabilidad en condiciones alcalinas. ODP2 HP-4D 1 ODS(A) 1 1. Piridina 2 mg/l 2. Fenol 43 mg/l 2 2 Antes Antes Después de hs Después de 24 hs 1 1 Fig. 2-1 Comparación de cromatogramas antes y después de la prueba de alcalinidad Número relativo de platos teóricos (NPT) para piridina [%] ODP2 HP-4D ODS(A) Condición de prueba de durabilidad en condiciones alcalinas Columna : Shodex ODP2 HP-4D, ODS(A) (4,6 mm de diámetro x 1 mm c/u) Eluente : 1 mm solución buffer de fosfato(ph12) /CH 3 CN=4/ Índice de flujo :,6 ml/ Temp. de la columna : 3 C Condiciones de análisis Columna : Shodex ODP2 HP-4D, ODS(A) (4,6 mm de diámetro x 1 mm c/u) Eluente : H 2 O/CH 3 OH=7/3 Índice de flujo : 1, ml/ Detector : UV (24 nm) Temp. de la columna : 4 C Tiempo de flujo de la prueba de alcalinidad [horas] Fig.2-11 Relación entre el tiempo de flujo de la prueba de alcalinidad y el número relativo de platos teóricos (NPT) - 8 -

11 3. Rendimiento de las series ODP2 HP 3-1. Influencia del índice de flujo La figura 3-1 muestra la relación entre el número de platos teóricos (NPT) y el índice de flujo para la ODP2 HP. La figura 3-2 muestra la relación entre el tiempo de retención y el índice de tiempo. Los datos se refieren a la columna ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm de largo). Cada muestra mostró el número más alto de platos teóricos (NPT) a un índice de flujo de,4 ml/, mientras que el rendimiento se redujo a,3 ml/ o menos debido a la difusión de la muestra. Además, cada muestra mostró tiempos de retención extremadamente largos a, ml/ o menos. Por tal motivo, para el análisis general se recomienda un índice de flujo de, 1, ml/ con ODP2 HP-4D. Se recomiendan índices de flujo de,1,2 ml/ para ODP2 HP-2D (2 mm de diámetro x 1 mm de largo). Número relativo de platos teóricos (NPT) [%] 13 Fenol Benzoato de metilo Tolueno 1 7 4,, 1, 1, Índice de flujo [ml/] 1. Fenol 3 mg/l 2. Benzoato de metilo 3 mg/l 3. Tolueno 1. mg/l Fig. 3-1 Relación entre rendimiento [número de platos teóricos (NPT)] e índice de flujo 2 Tiempo de retención [] Fenol Benzoato de metilo Tolueno,, 1, 1, Índice de flujo [ml/] Fig. 3-2 Relación entre tiempo de retención e índice de flujo Columna : Shodex ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm) Eluente : H 2 O/CH 3 CN=/4 Detector : UV (24 nm) Temp. de la columna : 4 C - 9 -

12 3-2. Influencia de las cargas de la muestra La figura 3-3 muestra la relación entre las cargas de la muestra y el número de platos teóricos (NPT) para la ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm de largo). Se recomiendan muestras de carga de 1µg o menos con la ODP2 HP-4D para el mejor rendimiento de la columna, y muestras de carga de 2µg o menos para la ODP2 HP-2D (2 mm de diámetro x 1 mm de largo). Número relativo de platos teóricos (NPT) [%] Fenol Benzoato de metilo Cafeína, Cargas de la muestra [ µg/µl ] 1. Fenol 2. Benzoato de metilo 3. Cafeína Fig. 3-3 Relación entre las cargas de la muestra y el número de platos teóricos (NPT) Columna : Shodex ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm) Eluente : H 2 O/CH 3 CN=/4 Índice de flujo : 1, ml/ Detector : UV (24 nm) Fenol, benzoato de metilo UV (3 nm) Cafeína Temp. de la columna : 4 C 3-3. Influencia del volumen de inyección de la muestra La figura 3-4 muestra la relación entre el volumen de inyección de la muestra y el número de platos teóricos (NPT) para la ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm de largo). Se recomienda un volumen de inyección de la muestra de 4µL o menos para la columna ODP2 HP-4D a fin de lograr el máximo rendimiento y un volumen de inyección de 8µL o menos para la ODP2 HP-2D (2 mm de diámetro x 1 mm de largo). Número relativo de platos teóricos (NPT) [%] Fenol Benzoato de metilo Cafeína Volumen de inyección [µl] Muestra:,6 µg c/u 1. Fenol 2. Benzoato de metilo 3. Cafeína Columna : Shodex ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm) Eluente : H 2 O/CH 3 CN=/4 Índice de flujo : 1, ml/ Detector : UV (24 nm) Fenol, benzoato de metilo UV (3 nm) Cafeína Temp. de la columna : 4 C Fig. 3-4 Relación entre el volumen de inyección de la muestra y el número de platos teóricos (NPT) - 1 -

13 3-4. Influencia de la temperatura La figura 3- muestra la relación ente la temperatura de la columna y el tiempo de retención. La figura 3-6 muestra la relación entre la temperatura de la columna y el número de platos teóricos (NPT). Debido a que el tiempo de retención y el número de platos teóricos (NPT) varían con los cambios de temperatura de la columna, se recomienda utilizar un horno de columna para controlar la temperatura Fenol 3 mg/l 2. Benzoato de metilo 3 mg/l 3. Tolueno 1. mg/l Retención [] Fenol Benzoato de metilo Tolueno Temp. de la columna [ C ] Fig. 3- Relación entre la temperatura de la columna y el tiempo de retención Número relativo de platos teóricos (NPT) [%] Fenol Benzoato de metilo Tolueno Temp. de la columna [ C ] Fig. 3-6 Relación entre la temperatura de la columna y el número de platos teóricos (NPT) Columna : Shodex ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm) Eluente : H 2O/CH 3CN=/4 Índice de flujo :, ml/ Detector : UV (24 nm)

14 3-. Influencia de un disolvente orgánico en el eluente La figura 3-7 muestra la relación entre el porcentaje de disolvente orgánico (acetonitrilo) en el eluente y el número de platos teóricos (NPT). Para cada muestra, el rendimiento más alto ocurre cuando el contenido de disolvente orgánico es entre 4% y 4%. La figura 3-8 muestra la relación entre el porcentaje de disolvente orgánico (acetonitrilo) en el eluente y el tiempo de retención de cada muestra. El tiempo de retención de cada muestra aumentó rápidamente cuando el contenido de acetonitrilo era 4% o menos. Se recomienda una fase móvil de 4% de acetonitrilo como punto de partida de los análisis generales. Número relativo de platos teóricos (NPT) [%] Fenol Benzoato de metilo Tolueno 1. Fenol 3 mg/l 2. Benzoato de metilo 3 mg/l 3. Tolueno 1. mg/l Porcentaje [%] de CH 3 CN Fig. 3-7 Relación entre la concentración de acetonitrilo y el número de platos teóricos (NPT) Retención [] Fenol Benzoato de metilo Tolueno 1 Columna : Shodex ODP2 HP-4D (4,6 mm de diámetro x 1 mm) Eluente : H O/CH 3CN Índice de flujo :, ml/ Porcentaje [%] de CH 3 CN Detector : UV (24 nm) Temp. de la columna : 4 C Fig. 3-8 Relación entre la concentración de acetonitrilo y el tiempo de retención 4. Conclusions Las nuevas columnas de series ODP2 HP demuestran importantes ventajas para el análisis de sustancias de alta polaridad. Este cuaderno técnico demuestra el rendimiento de las series ODP2 HP. Los datos de aplicación con series ODP2 HP se presentarán en otro cuaderno técnico

15 Aviso 1. Leer en su totalidad el manual de instrucciones que acompaña el producto antes de utilizar las columnas de series ODP2 HP. 2. Las especificaciones para los productos están sujetas a cambios sin aviso con el propósito de realizar mejoras. 3. No se ofrece garantía acerca de las cifras que aparecen en esta hoja técnica, dichas cifras deben utilizarse solo como referencia. 4. Si bien en este manual no hay advertencias en cuanto a la seguridad o peligro de los reactivos y productos químicos, asegúrese de tomar las precauciones habituales cuando toque los productos.. Los productos que se describen aquí no fueron diseñados para el uso en exámenes clínicos en el área médica.

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