TP Nº4:Talasemias. Explicación TP. Dra. Silvia Varas.
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- Purificación Lagos Reyes
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1 TP Nº4:Talasemias Explicación TP Dra. Silvia Varas
2 Esquema de la Molécula de Hemoglobina
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4 Ontogenia cadenas de globina ζ, α ε, γ, δ, β
5 ζ, α zeta ζ Hemoglobinas normales: variantes Cadenas tipo α: 16 p 13.3 α α Portland Gower I II F A2 A ε G γ A γ δ β Bart (γ4 γ4) H (β4) Cadenas tipo b: 11 p 15.5 ε, γ, δ, β
6 Hemoglobinas Fetal ESTADO Embrionario HEMOGLOBINA Portland Gower I Gower II Fetal FORMULA ζ2 γ2 ζ2 ε2 α2 ε2 α2 γ2 Adulto A1 A2 α2 β2 α2 δ2
7 Síntesis de cadenas de globina % en embrión, feto y lactante
8 HEMOGLOBINOPATÍAS AS ALTERACIONES CUALITATIVAS Hemoglobinopatías as estructurales ALTERACIONES CUANTITATIVAS Síndromes Talasémicos
9 Caso 1 Beta - talasemia: herencia Talasemia menor Talasemia menor Talasemia menor Caso 2 Talasemia mayor
10 BETA TALASEMIAS Dos grandes tipos clínicos Beta Talasemias: Beta-talasemia mayor (major). Beta-talasemia menor (minor). Correspondencia genética de las entidades clínicas: B-Talasemia mayor: Los dos cromosomas 11 tienen el gen de la beta globina con mutación. Homocigóticos o heterocigóticos compuestos. B-Talasemia menor: Solo 1 cromosoma 11 contiene el gen de la beta globina con mutación.
11 BETA TALASEMIAS Tipos de cromosomas 11 con mutaciones que producen beta-talasemia: Beta +: La mutación no impide que el gen sintetice algo de globinas beta. Beta 0: La mutación impide totalmente la síntesis de globinas beta, bien porque no se produce RNAm o bien porque se produzca pero no sea traducible.
12 Índices Hematimétricos RBC (M/ul) Recuento de glóbulos rojos HGB (g/dl) Hb HCT (%) Ht VCM (fl) Volumen corpuscular media MCH (pg) Hb corpuscular media MCHC (g/dl) Concentración de Hb corpuscular media RDW (%) Ancho de Distribución de Eritrocitos
13 Hemograma Ferropénico
14 Hemograma β-talasémico
15 Resultados obtenidos por la cátedra:
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19 Sindromes talasémicos Estudio de laboratorio 1) Electroforesis de Hb en acetato de celulosa buffer Tris Glicina, ph 8.6 coloración: Amidoschwarz. 2) Cuantificación de Hb A 2. 3) Cuantificación de Hb F. 4) Perfil de hierro (para descartar anemia ferropénica). 5) Estudio molecular de los genes de globina para identificación de la mutación.
20 Electroforesis de Hb: Lisis: Sacar con pipeta Pasteur 1 p H2O 0,4 p Tolueno 1- Cuantificar Hb 2- Hacer una dilución 5% para sembrar en las tiras de celulosa HEMOLIZADO
21 1. Pasar la capa rojo brillante a otro tubo eppendorf 2. Cuantificar Hb 3. Hacer una dilución 5% para sembrar en las tiras de celulosa Tolueno Restos de Membranas CAPA ROJA BRILLANTE Sedimento
22 B T M Sacar las cuentas de la [Hb] del hemolizado Preparar dilución al 5%
23 Hb A Hb F Hb A2
24 Tubo B (3ml) Tubo A (9ml)
25 β-talasemia Heterocigota Laboratorio -Anemia moderada - VCM disminuído: MICROCITOSIS -RDW ligeramente aumentada - Morfología eritrocitaria: - Anisocitosis con poiquilocitosis - Hipocromía - Células target - Punteado basófilo - Ferremia normal -Ferritina normal -- Hemoglobina A2 aumentada - Hemoglobina Fetal normal o lig. aumentada
26 Microfotografías de Sangre Perisferica Pacientes de PRSL- Complejo Sanitario San Luis
27 Extendido de sangre periférica de un individuo normal. Se observan eritrocitos de tamaño, forma y coloración homogéneos.
28 Extendido de paciente con beta-talasemia menor Se oberva hipocromemia ( ), células en blanco de tiro ( ), punteado basófilo ( ), anisocitosis.
29 Observación de punteado basófilo en pacientes con beta talasemia.
30 Punteado basófilo en una célula target o célula en blanco de tiro
31 β- Talasemias Diagnóstico molecular
32 BETA TALASEMIAS * β + βο β + β ο β ο β ο β ο β ο * Muy frecuente en el área mediterránea Beta 0 alelo nulo o amorfo Beta + alelo hipomorfo Mange y Mange.- Genetics. Human Aspects
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43 Bibliografía: Alvarez SM, Varas SM, Meloni AM, Giménez AI y Giménez MS Incidencia de la beta -talasemia en San Luis, Argentina. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana: 35 (1) Alvarez, Silvina M. (1999). Trabajo Final de Tesina en Biología Molecular Rastreo de pacientes β- talasémicos: estudio bioquímico y molecular. UNSL. Biblioteca Central. Weatherall DJ y col. Chapter 93: The hemoglobinopathies. Book II. The metabolic and molecular basis of inherited disease. Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS & Valle D. 7º Edition New York Mc Graw-Hill. Fundación Argentina de Talasemia "FUNDATAL" Ronald J A Trent. Diagnosis of the Haemoglobinopathies. Clin. Biochem. Rev. Vol 27 February 2006
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