PRECIPITACIÓN EN BREVE. Francisco José Guerra Millán

Transcripción

1 PRECIPITACIÓN EN BREVE Francisco José Guerra Millán

2 BREVE DESCRIPCIÓN La precipitación consiste en la separación química de los componentes de una disolución. Esta separación se realiza de forma rápida al añadir a la disolución algún compuesto que forme con el ya existente una sustancia sólida que se separa y va al fondo.

3 PRECIPITADO Sólido producido por una reacción química Sustancia insoluble en disolución sobresaturada En general cae al fondo de la disolución (densidad)

4 APLICACIONES Industriales y científicas Sólidos recogidos por diversos métodos: Filtración Decantación Centrifugación

5 SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS Similitudes y diferencias de las proteínas Similitudes: separación de no-proteínas Diferencias: separación de otras proteínas Procura retener actividad biológica Desnaturalización

6 ESTRATEGIA GENERAL DE PURIFICACIÓN Varios métodos (diferente para cada proteína) Primero un paso general y después más finos Cada paso causa una pérdida de producto Elección de métodos de purificación depende de las características de la proteína, su fuente y la escala

7 OBJETIVOS Máxima recuperación de la proteína Mínima pérdida de actividad biológica Máxima remoción de contaminantes Mínimo costo económico

8 DESNATURALIZACIÓN Cambio estructural de proteínas o ácidos nucleicos Pérdida de estructura tridimensional y funcionamiento

9 DESNATURALIZACIÓN II Función: por forma Forma: estructura primaria (secuencia AA) Secuencia AA: secuencia nucleótidos ADN

10 DESNATURALIZACIÓN III Función (salvo comida) depende de estructura 3D Enlaces peptídicos y estructura primaria permanecen inalterados

11 DESNATURALIZACIÓN IV Estructura cuaternaria: subunidades se separan o su posición espacial se corrompe Estructura terciaria: interrupción de enlaces covalentes (S- S entre CIS), enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas polares de AA, enlaces dipolo inducidos por vdw entre cadenas no polares Estructura secundaria: pierden los patrones de repetición regulares (hélices alfa) Estructura primaria: secuencia de AA no se interrumpe

12 AGENTES DESNATURALIZANTES Químicos polaridad disolvente fuerza iónica ph, sales Físicos temperatura

13 EFECTOS: POLARDAD Polaridad del disolvente disminuye cuando se agregan sustancias menos polares (etanol o acetona) Disminuye la hidratación de los grupos iónicos provocando la agregación y precipitación Disolventes orgánicos (detergentes) interaccionan con el interior hidrófobo y desorganizan la estructura terciaria

14 EFECTOS: FUERZA IÓNICA Aumento de la fuerza iónica del medio ((NH4)2SO4, urea) provoca una disminución en el grado de hidratación Solutos compiten por el agua y rompen los puentes de hidrógeno o las interacciones electrostáticas En muchos casos es reversible (diálisis) Disminución en la fuerza iónica provoca precipitación

15 EFECTOS: PH Iones H + y OH - del agua afectan a la carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos Elimina las interacciones electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria y precipitan Solubilidad mínima en su punto isoeléctrico, ya que su carga neta es cero

16 EFECTOS: TEMPERATURA Altas temperaturas aumentan la energía cinética de las moléculas Se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas Destruye las interacciones débiles y desorganiza la estructura de la proteína, Interior hidrófobo interacciona con el medio acuoso y se produce la agregación y precipitación

17 Video EN ACCIÓN

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19 CLARA DE HUEVO En gran parte albúminas en agua Clara transparente y líquida Al cocinarse se vuelve opaca y blanca Masa sólida insoluble en agua

20 REVERSIBILIDAD En algunos casos es reversible Recupera estructura (toda la información en la proteína) Es posible precipitar proteínas de manera selectiva

21 BIBLIOGRAFÍA McKee, Trudy, Bioquímica La Base Molecular de la Vida, McGraw- Hill,3a Edición, Madrid, Los, Katia, Protein Purification, PPT Presentation. %20OKActividades%20y%20medios%20OK/B.2%20En%20el %20laboratorio/B.2.2precipitacion.htm DenaturingProtein.html

22 PREGUNTAS? MUCHAS GRACIAS!