Universidad Interamericana de Puerto Rico Recinto de Bayamón Departamento de Ciencias Naturales y Matemáticas PRONTUARIO

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1 Universidad Interamericana de Puerto Rico Recinto de Bayamón Departamento de Ciencias Naturales y Matemáticas I. INFORMACIÓN GENERAL PRONTUARIO Titulo del Curso : Cultivo de Tejido y Aplicaciones Técnicas Código y Número : BIOT 4620 Créditos : Tres (3) Término Académico : Profesor : Horas de Oficina : Teléfono de la Oficina : Correo Electrónico : II. DESCRIPCIÓN Estudio de la metodología del cultivo de células procedentes de mamíferos, plantas e insectos. Se discutirá las aplicaciones del cultivo celular en la industria de biotecnología y sus implicaciones éticas. Se enfatizarán los requerimientos de cuartos limpios, vestimenta estéril, técnicas asépticas, instrumentación, caracterización de líneas celulares, detección de contaminación y controles de calidad. Se aplicarán las técnicas de cultivo celular y técnicas para la detección de componentes o productos celulares. Requiere 30 horas de conferencia y 45 horas de laboratorio. Requisitos: BIOL III. OBJETIVOS Se espera que al finalizar el curso, el estudiante pueda: 1. Desarrollar y aplicar procedimientos operacionales estándar para los procedimientos rutinarios del cultivo de células 2. Explicar los componentes de la matriz extracelular y su importancia para el crecimiento de células en cultivo 3. Aplicar las técnicas asépticas en los procedimientos de vestimenta estéril y manipulación de células 4. Comprender la importancia de los protocolos de limpieza y monitoreo de cuartos de cultivo 5. Estudiar los requerimientos nutricionales de las células en cultivo y como se proveen los mismos

2 6. Discutir la composición de las diversas formulaciones de medios de cultivos y suplementos y los controles de calidad que deben realizarse a los mismos. 7. Comprender los eventos del ciclo celular y como se relaciona al comportamiento de las células en cultivo 8. Comparar las diversas poblaciones celulares obtenidas mediante cultivo celular primario y cultivo de líneas. 9. Aplicar las técnicas de cuidado y mantenimiento de células en cultivo. 10. Discutir la importancia de la criopreservación para el mantenimiento de líneas celulares. 11. Aplicar las técnicas de criopreservación y resucitación 12. Analizar r el uso de las células en cultivo en la investigación e industria de la biotecnología y discutir las implicaciones éticas. IV. BOSQUEJO DE CONTENIDO A. Cultivo de Tejido 1) Introducción, términos y aspectos históricos 2) Equipos requeridos para establecer el cultivo de células 3) Ventajas y limitaciones del uso del cultivo celular 4) Características físico-químicas de las células en cultivo 5) Requerimientos físico-químicos para células en cultivo 6) Medios 7) Suplementos 8) Antibióticos 9) Nivel de humedad 10) ph B. Aspectos generales de la Biología Celular aplicados a las Células en Cultivo 1) Citoesqueleto: Rol de la molécula de actina 2) Interacciones celulares (célula-célula, célula matriz) 3) Componentes de la matriz extracelular 4) Proteínas adhesivas 5) Regulación del ciclo celular en células eucariotas C. Técnicas generales de cultivo celular 1) Técnicas asépticas 2) Selección de substratos (frascos) adecuado para el cultivo celular 3) Preparación y esterilización de medio 4) Cambios de medio 5) Medidas químicas 6) Amortiguadores

3 D. Líneas celulares contínuas 1) Nomenclatura 2) Caracterización y desarrollo de líneas celulares 3) Subcultivo y propagación 4) Inmortalización 5) Cultivo de células adheridas 6) Cultivo de células en suspensión E. Cultivo primario de células 1) Métodos ésteriles para la disección de tejidos 2) Métodos para la disociación de tejidos 3) Requerimientos para el cultivo primario de células: substrato, suplementos, factores de crecimiento 4) Preparación de linfocitos y transformación F. Control de calidad de líneas celulares 1) Técnicas de descongelación y criopreservación de células 2) Técnicas de conteo y detección de viabilidad celular 3) Disponibilidad y adquisición de líneas 4) Producción de bancos celulares: cuarentena, muestra congelada, banco maestro, banco de trabajo 5) Técnicas de detección de contaminación por virus y sus fuentes de contaminación 6) Técnicas de detección de contaminación por micoplasmas 7) Monitoreo de la estabilidad genética de las líneas 8) Caracterización, diferenciación y transformación de líneas celulares 9) Autenticación de líneas celulares G. Aplicaciones en la industria y la investigación de cultivo de líneas celulares 1) Aspectos regulatorios de las líneas celulares 2) Estrategias de cultivo en la industria Scale-up 3) Biofermentadores 4) Bioreactores H. Sistemas Experimentales 1) Inmunoprecipitación 2) Aglutinación 3) RIA 4) ELISA 5) Inmunoensayo enzimático 6) Western Blot 7) Inmunofluorescencia 8) Citometría de flujo I. Producción de anticuerpos

4 1) Inmunización de animales 2) Producción de anticuerpos policlónicos 3) Affinity purification of policlonal antibodies 4) Preparación de hibridomas 5) Producción de anticuerpos monoclónicos 6) Lectinas 7) Inmunoquímica de ácidos nucleicos 8) Inmunoquímica sustancias farmacológicas, 9) Inmunoquímica agentes bacterianos 10) Inmunoquímica alérgenos. V. ACTIVIDADES 1) Presentaciones orales 2) Avalúo: Pruebas cortas luego de las conferencias VI. EVALUACIÓN El sistema de calificaciones y de anotaciones administrativas será el vigente para el Sistema de la Universidad Interamericana de Puerto Rico. Curva estándar de calificaciones: A B C D 59 0 F Puntuación % de la Nota Final 2 Exámenes parciales 1 Examen de Laboratorio Trabajo Oral y Escrito Examen final VII. NOTAS ESPECIALES Total

5 A. Servicios auxiliares o necesidades especiales Todo estudiante que requiera servicios auxiliares o asistencia especial deberá solicitar los mismos al inicio del curso o tan pronto como adquiera conocimiento de que los necesita, a través del registro correspondiente, en. B. Honradez, fraude y plagio La falta de honradez, el fraude, el plagio y cualquier otro comportamiento inadecuado con relación a la labor académica constituyen infracciones mayores sancionadas por el Reglamento General de Estudiantes. Las infracciones mayores, según dispone el Reglamento General de Estudiantes, pueden tener como consecuencia la suspensión de la Universidad por un tiempo definido mayor de un año o la expulsión permanente de la Universidad, entre otras sanciones. C. Uso de dispositivos electrónicos Se desactivarán los teléfonos celulares y cualquier otro dispositivo electrónico que pudiese interrumpir los procesos de enseñanza y aprendizaje o alterar el ambiente conducente a la excelencia académica. Las situaciones apremiantes serán atendidas, según corresponda. Se prohíbe el manejo de dispositivos electrónicos que permitan acceder, almacenar o enviar datos durante evaluaciones o exámenes. VIII. and RECURSOS EDUCATIVOS Texto: Freshney, I Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique Specilized Application. Wiley & Sons, New Jersey. IX. REFERENCIAS Seidman, L. A Basic laboratory calculations for Biotechnology.Pearson Benjamin Cummings,San Francisco, Ca. and Ninfa, A.J Fundamental laboratory approaches for biochemistry biotechnology. 2nd ed. Wiley & Sons, New Jersey.

6 Harisha, S Biotechnology procedures and experiments handbook. Infinity Science Press, Hingham, Mass. Stewart, C. Jr Plant biotechnology and genetics: principles techniques, and applications. Wiley and Sons, New Jersey. ed. Karp, G Cell and molecular biology: concepts and experiments. 6 th Wiley & Sons, New Jersey. X. REVISTAS CIENTÍFICAS Nature Biotechnology Plant Biotechnology Plant Physiology TRENDS in Biotechnology TRENDS in Plant Science Biotechnology Cytogenetics and Genome Research Cytogenetics and Cell Genetics Journal of Cell Biology Molecular and Cellular Biology

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