Análisis de la Respuesta Inmunitaria a las vacunas

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1 Análisis de la Respuesta Inmunitaria a las vacunas José Ignacio Santos Profesor de Medicina Experimental Jefe de la Subdivisión de Investigación Clínica Facultad de Medicina Universidad Nacional Autónoma de México Lunes 26 de Noviembre, 2012

2 Conflicto de Interés En lo referente a esta presentación, no tengo conflictos de interés que declarar.

3 La primera descripción del estado de resistencia a la infección (Estado inmune), se debe a Tucidides que en la Historia de la guerra del Peloponeso, relata como durante la epidemia de peste, el cuidado de los enfermos se encomendó a ciudadanos que se habían recuperado de la enfermedad ya que no volvían a padecerla.

4 BASES INMUNOLOGICAS DE LAS VACUNAS Los principales mecanismos efectores del sistema inmunitario son tres: producción de anticuerpos, inflamación y citotoxicidad. El antígeno pasa al interior de una célula presentadora de antígenos; ésta expone, en su superficie, fragmentos del mismo asociados con el complejo principal de Histocompatibilidad (MHC) de clase II. Entonces, células T inactivas reconocen el complejo constituido por antígeno y MHC y se multiplican en consecuencia. Las células T activadas median los tres mecanismos efectores a través de la producción de citocinas específicas (anticuerpos, inflamación y citotoxicidad). Las células T ayudan a las células B a producir anticuerpos. La unión del antígeno a inmunoglobulinas de superficie sirve de señal de las células B al mismo tiempo, el antígeno pasa al interior de las células presentadoras de antígeno, que lo degradan en péptidos y estos se asocian con las moléculas del complejo principal de histocompatibilidad de clase II y activan a las células T coadyuvantes inactivas. El antígeno ligado y las señales de las células B comiencen a multiplicarse y a diferenciarse en células plasmáticas secretoras de anticuerpos

5 Respuesta inmune ideal a una vacuna Receptor de Ag Variedad de células B Antígenos Proliferación celular La vacuna es procesada por células presentadoras de antígeno activando células T y B para formar células de memoria genera células Th y Tc a varios epítopes Clona de células plasmáticas Clona de células de memoria Secreción de Acs a la circulación antígeno persiste y contínua el reclutamiento de células B de memoria produciendo aanticuerpos de alta afinidad

6 Analisis de la respuesta inmunitaria de las vacunas La inmunidad generada por las vacunas, es similar a la originada por las enfermedades: la vacunación desencadena una respuesta humoral y celular del organismo, mediante la formación de anticuerpos que van actuar neutralizando o facilitando la fagocitosis de los agentes infecciosos específicos. Podemos evaluar la respuesta humoral en forma cuantitativa mediante estudios serológicos antes y después de su aplicación.

7 Como medimos la protección? La respuesta del organismo a una vacunación o exposición de campo con el agente se puede realizar mediante pruebas serológicas de laboratorio utilizando suero del paciente La respuesta inmune primaria y secundaria o, pueden evaluar en el laboratorio mediante la detección de anticuerpos específicos en el suero, utilizando antígenos conocidos antes y semanas después de la aplicación de la vacuna.

8 Como medimos la protección? La respuesta inmunológica contra la mayoría de las vacunas induce la producción especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antígeno anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunológico. El análisis cualitativo y cuantitativo se realiza mediante el empleo de técnicas inmunológicas basadas en la detección de y evaluación de la respuesta humoral (anticuerpos y complemento) o celular (linfocitos T y fagocitos).

9 Cómo interpretamos la respuesta? Seroconversión: Aumento del título de anticuerpos x 4 o paso de negativo a positivo Título: Máxima dilución a la cual un suero continúa siendo positivo en una prueba serológica determinada

10 Como medimos la protección? La medición de las interacciones antígeno- anticuerpo con fines diagnósticos. Se realizan en 2 vías: Utilización de anticuerpos específicos para detectar el antígeno(diagnostico directo) Utilización de antígenos específicos para detectar anticuerpos (diagnostico indirecto)

11 Evaluación de la respuesta humoral Detección serológica de la titulación de anticuerpos pre y post vacunación, o mediante la detección de anticuerpos IgM. Otras técnicas diagnósticas: Fijación de complemento (CFT); Radioinmunoensayo (RIA); ELISA; Pruebas de inmunoflourescencia (EIA); Aglutinación de partículas de látex; Pruebas de neutralización; Western Blot; Hemolisis radial ; Inmunoblot recombinate (RIBA) etc. El análisis de la especificidad permite evaluar la capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura química entre muchas. También se puede analizar la reactividad cruzada: es decir el anticuerpo reacciona con otro antígeno, cuando este y el antígeno que estimulo la producción del anticuerpo especifico comparten un epítope idéntico o muy similar.

12 Pruebas de Laboratorio Inmunofluorescencia. Radioinmunoanalisis. Pruebas inmunoenzimaticas. ELISA. Aglutinación. Precipitación, Inmunodifusion Inmunoelectroforesis Hemoaglutinacion-Inhibicion de hemoaglutinacion.

13 Log nivel de Acs Respuesta de Acs Respuesta Inmune humoral La respuesta inmune primaria se desarrolla entre una y dos semanas despues de la exposición al antígeno e inicia con anticuerpos IgM seguida por anticuerpos IgG. semanas La memoria específica caracteriza a la inmunidad adaptativa 1er desafío Nuevo desafío With kind permission from Nick Holmes Respuesta a otro antígeno La respuesta inmune secundaria es mas robusta con predominio de Acs IgG. Nick Holmes Tiempo en días

14 Cual es la utilidad de ensayos serológicos? Inmunogenicidad clínica y Efectividad (eficacia inferencial) Ej.- Demostración de la no inferioridad de una respuesta inmune relevante Comparación con los estandares atención Comparación con sueros de estudios de eficacia con correlación clínica comprobada. La no interferencia con otras vacunas aplicadas Determinar si la correlación de protección es aceptable CMC Inmunogenicidad Evaluar cambios en procedimientos de manufacturaa Nuevas instalaciones de manufactura Consistencia de lotes 9

15 Análisis de la calidad de respuesta humoral Con la finalidad de analizar la calidad de la respuesta humoral de una vacuna, se puede evaluar la afinidad y la avidez de los anticuerpos. Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unión, entre un sitio de unión del anticuerpo y el determinante antigénico de la vacuna. Avidez es la fuerza con la que el anticuerpo se une al antígeno.

16 Análisis de la respuesta inmune celular Aunque no es rutinario, para fines de evaluar una vacuna en fase uno se cuenta con varias pruebas clínicas y de laboratorio. La intradermorreacción (prueba cutánea de sensibilidad tardía) permite evaluar la memoria celular al antígeno y por ende a la vacuna. Nuevos métodos de Inmunología Celular La cuantificación de células B (productoras de Acs específicos) y subpoblaciones de linfocito T se pueden realizar mediante citometría de flujo. Para la localización y enumeración de células formadoras de anticuerpo se utiliza marcaje inmuno-fluorescente y placa hemolítica El cultivo celular permite el análisis de interacciones entre las células inmunes.

17 Respuesta linfoproliferativa Consiste en cultivar linfocitos del paciente con el antígeno (vacuna) que se quiere evaluar o estudiar y con varios mitógenos que se utilizan como control de la inmunoproliferación (estimulación no específica). La transformación blástica específica se mide por la capacidad que tiene la vacuna de inducir la proliferación linfocitaria.

18 Caracteristicas deseables en las pruebas de análisis inmunodiagnostico Utilizar pequeñas cantidades de sangre y de reactivos Sensibles y especificas. Estandarizada y validada. Reproducible.(Ínter laboratorios) Antígenos inactivados. Sencilla. Equipo y reactivos accesibles, económicos.

19 Evaluación clínica de una vacuna : Eficacia Se conoce como eficacia de una vacuna a los resultados o beneficios de salud proporcionados a los individuos cuando esa vacuna es aplicada en condiciones ideales. La evaluación de la eficacia protectora deben realizarse mediante ensayos clínicos aleatorizados. La eficacia de una vacuna está en función de su inmunogenicidad: capacidad de generar el tipo apropiado de respuesta inmunitaria (humoral, celular o ambas), del período de duración de la protección conferida, en el lugar adecuado (torrente sanguíneo, mucosas) y frente al antígeno adecuado (antígenos inmunizantes).

20 Evaluación clínica de una vacuna : Efectividad Se considera efectividad de una vacuna a los resultados o beneficios de salud proporcionados por un programa de vacunaciones en la población objeto, cuando las vacunas son administradas en las condiciones reales o habituales de la práctica diaria asistencial o de desarrollo de los programas Una buena eficacia no siempre implica una buena efectividad. La efectividad depende de factores como la aceptación y accesibilidad de la población a la vacuna, la pauta correcta de administración (dosis, vía, lugar, técnica), la conservación y manipulación adecuadas, etc.

21 Análisis costo - beneficio Los costos (del programa de vacunación: costo de la vacunación + costo de los efectos secundarios de la vacunación) y los beneficios(costos directos e indirectos de la enfermedad ) sin el programa de vacunación. Los costos directos e indirectos de la enfermedad con el programa de vacunación se valoran en términos monetarios.

22 Análisis costo - beneficio Este tipo de análisis permite la evaluación económica intrínseca del programa al comparar los beneficios económicos del programa con los costos, así como la comparación entre programas alternativos con objetivos similares. También permite plantear si existe otros programas que puedan proporcionar a la comunidad mayores beneficios e de vacunación o introducción de un nuevo biológico.

23 Evaluación clínica de una vacuna Solamente cuando se ha demostrado la eficacia, tiene sentido la evaluación de la efectividad de una vacuna mediante un ensayo comunitario aleatorizado (o no aleatorizado, como alternativa). La realidad es que por motivos éticos y prácticos, la evaluación experimental de la efectividad de la vacunación en la población rara vez se realiza. Una vez registrada, autorizada y comercializada, se evalúa la efectividad de la vacuna mediante estudios observacionales (cohortes, casos-controles), estudio de las tasas de ataque en brotes Epidémicos y comparaciones de tasas de ataque secundario al ámbito familiar.

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