PATRONES DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES DETECTADOS POR INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA EN PACIENTES YUCATECOS

Transcripción

1 PATRONES DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES DETECTADOS POR INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA EN PACIENTES YUCATECOS QFB Erik José Cuevas Sánchez Departamento de Inmunología BIOMÉDICOS DE MÉRIDA

2 CONCEPTOS GENERALES Lupus Eritematoso Sistémico (LES): Enfermedad inflamatoria crónica de naturaleza autoinmune y de etiología desconocida, caracterizada por afectación de múltiples órganos y sistemas y por la presencia de anticuerpos antinucleares (ANA). Afecta fundamentalmente a mujeres jóvenes (relación mujeres:hombres de 9:1) desde la adolescencia hasta la quinta década de la vida, pero puede aparecer a cualquier edad (durante la infancia o durante la tercera edad). Anticuerpos Antinucleares (ANA): Son inmunoglobulinas que reaccionan contra diferentes componentes autólogos nucleares y citoplásmicos. Los métodos empleados para su detección en los laboratorios clínicos son inmunoensayos en fase sólida y la inmunofluorescencia indirecta que diferencia una serie de patrones, cada uno de ellos relacionado con la presencia de determinados anticuerpos Inmunofluorescencia Indirecta: Técnica que se basa en el reconocimiento de los anticuerpos que reconocen estructuras antigénicas celulares nativas. La interacción se evidencia por medio de un anticuerpo antiinmunoglobulina humana dirigido contra las fracciones constantes (Fc) de las inmunoglobulinas IgG, IgA y/o IgM. Este anticuerpo antiinmunoglobulina humano está conjugado a un fluoróforo (generalmente isotiocianato de fluoresceína [FITC]). 1. Fenger, M., A. Wiik, et al. (2004). Detection of antinuclear antibodies by solid-phase immunoassays and immunofluorescence analysis. Clin Chem 50(11): K. Op. De Beeck et al. (2011). Detection of antinuclear by indirect immunofluorescence and by solid phase assay. Autoimmunity reviews 10: Gómez-P, J.A; Cervera, R. (2008) Lupus eritematoso sistémico. Medicina & Laboratorio, Volumen 14, Números

3 Criterios Clínicos para la clasificación del LES según SLICC (Systemic Lupus International Collaborating Clinics) 2012 Clínicos 1. Lupus cutáneo agudo 7. Renal. 2. Lupus cutáneo crónico: 3. Úlceras orales: 4. Alopecia sin cicatriz Neurológico. Anemia hemolítica 10. Leucopenia (<4000/mm3 al menos una vez) Sinovitis: Serositis: 11. Trombocitopenia (<100 mil/mm3 al menos una vez) 1. Petri, M. [Et. Al.]. Derivation and validation of the Systemic Lupus International Collaborating Clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus Arthritis Rheum August ; 64(8):

4 Criterios Inmunológicos para la clasificación del LES según SLICC Inmunológicos 1. ANA por encima del rango de referencia. 2. AntiDNA de doble cadena por encima del rango de referencia, excepto el que sea tomado por el método ELISA: dos veces por encima del rango de referencia del laboratorio. 3. Anti Sm 4. Anticuerpos anti fosfolípido: cualquiera de los siguientes. * Anticoagulante lúpico * VDRL falsamente positivo * Anticardiolipinas a títulos intermedios o altos (IgA, IgG o IgM) * Anti B2 glicoproteína I (IgA, IgG o IgM) 5. Hipocomplementemia 6. Coombs Directo Positivo en ausencia de anemia hemolítica 1. Petri, M. [Et. Al.]. Derivation and validation of the Systemic Lupus International Collaborating Clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus Arthritis Rheum August ; 64(8):

5 CLASIFICACIÓN DE LOS ANA 1. Cabiedes, J.; Núñez-Álvarez, C.A.Anticuerpos antinucleares / Reumatol Clin. México 2010;6(4):

6 Nucleares PATRONES DE ANA MEDIANTE IFI (Sustrato: Células Hep-2) Citoplasmáticos Mixtos

7 PATRONES NUCLEARES Patrón Nuclear Homogéneo: Fluorescencia homogénea, uniforme y difusa en todo el nucleoplasma de las células Hep-2. Se observa fluorescencia fuerte en las células mitóticas. -Entidad Antigénica: Componentes cromosómicos como DNA, Histonas, nucleosomas.

8 Patrón Moteado Grueso: Se observa tinción en forma de granulado o manchas gruesas fluorescentes en el nucleoplasma de las células Hep 2. Los Los nucleólos son negativos. -Entidad antigénica: Debida a los antígenos U1RNP y Sm. -Asociación Patológica: Enfermedad Mixta del Tejido Conectivo (RNP) y Lupus Lupus (Sm y RNP sólo en un 30-40%).

9 Patrón Moteado Fino: Marcaje moteado fino de distribución uniforme, a veces muy denso con apariencia casi homogénea. Los nucleólos pueden ser positivos (especialmente en SSB-La) o negativos. -Entidad antigénica: SSB-La y SSA-Ro. -Asociación Patológica: Síndrome de Sjogren y Lupus.

10 Patrón Centromérico: Puntos discretos bastante uniformes localizados en todo el núcleo. Se alínean con los cromosomas en metafase. -Entidad antigénica: Existen 3 antígenos polipeptídicos mayoritarios reconocidos por los anticuerpos anticentrómero designados como CENP-A (19kD), CENP-B (80 kd), CENP-C C (140 kd). -Asociación Patológica: Esclerosis sistémica, especialmente en la forma cutánea y limitada de la de la enfermedad. Se observan también en pacientes con Síndrome de CREST (Calcinosis, (Calcinosis, fenómeno de Raynaud, compromiso Esofágico, esclerodactilia, Telangiectasia).

11 Patrón Granulado tipo Scl-70: Marcaje granulado fino y uniforme del nucleoplasma, a menudo los nucleólos son positivos. -Entidad antigénica: Topoisomerasa I o Scl-70, enzima que cataliza la ruptura y reensamblaje del DNA de cadena simple. -Asociación Patológica: Indicativo de Esclerodermia, estos anticuerpos se encuentran en en un 20-40% de los pacientes con esta enfermedad. En general los pacientes con estos anticuerpos tienen peor pronóstico y menor supervivencia que los pacientes con anticuerpos anticentrómero.

12 Patrón Nucleolar Homogéneo: Tinción homogénea de los nucleólos. A menudo puede estar acompañada de una tinción débil y uniforme en el nucleoplasma. -Entidad antigénica: Los nucleólos contienen nucleolina, nucleofosmina B23 y PM-Scl. -Asociación Patológica: Este patrón se encuentra en 50-70% de los pacientes con Síndrome de De superposición Dermatomiositis/Escleroderma, Fenómeno de Raynaud, Enfermedad Pulmonar Intersticial y Artritis.

13 PATRONES CITOPLASMÁTICOS Patrón Citoplasmático Difuso: Patrón granular denso a homogéneo, dando una apariencia de tinción densa en el citoplasma. No se observa tinción nuclear pero los nucleólos pueden mostrar una tinción moteada fina. -Entidad antigénica: Fosfoproteínas del ribosoma P. -Asociación Patológica: Anticuerpos anti ribosomales P, se encuentran en el 10-20% de los pacientes con LES. Se ha asociado, también, con enfermedades psiquiátricas.

14 Patrón Tipo Mitocondrial: Gránulos gruesos e irregulares en el citoplasma de las células Hep-2. Esta tinción se arregla a manera de filamentos alrededor del núcleo y y en todo el citoplasma a manera de una red reticular. -Entidad antigénica: Anticuerpos contra estructuras mitocondriales M1 a M9, M2 es es el más común. -Asociación Patológica: La presencia de anticuerpos antimitocondriales es común en en cirrosis biliar primaria (95% de los pacientes) y esclerodermia (40%).

15 PATRÓN MIXTO: Homogéneo + Nucleolar

16 DATOS EPIDEMIOLÓGICOS DEL LUPUS Mundial La prevalencia en la población general dependiendo de la zona se encuentra entre 4 y 250 casos por cada habitantes. EE.UU La prevalencia en Estados Unidos se ha reportado de 14.6 a 50.8 casos por habitantes. México Un estudio en México reportó una prevalencia de 0.06%. La incidencia se ha estimado de 1.8 a 7.6 casos por habitantes/año Nucamendi, C. G. [Et. al.]. Boletín Epidemiológico: Qué es el Lupus eritematoso? Vigilancia Epidemiológica Semana 30, 2013 [En línea] Consultado

17 ANÁLISIS DE LA FRECUENCIA DE PATRONES DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES DETECTADOS POR INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA. Erik José Cuevas-Sánchez, 1 Diana Melissa Contreras-Zapata, 1 Lorena Aurora Ek-Macías. 1 Igrid García-González 2 1 Departamento de Inmunología, Biomédicos de Mérida; Mérida, Yucatán, México 2 Departamento de Biología Molecular, Biomédicos de Mérida; Mérida, Yucatán, México

18 OBJETIVO Determinar la frecuencia del marcaje fluorescente de anticuerpos antinucleares en pacientes yucatecos con sospecha de enfermedad reumática autoinmune. METODOLOGÍA N=1137 muestras de suero (1 de enero de diciembre 2016) Edad: 42 ± 17 años Consentimiento informado. Tamizaje: ELISA + QUIMIOLUMINSCENCIA Confirmación mediante IFI en células Hep-2 de positivos y dudosos a una dilución inicial de 1:80, reporte del patrón fluorescente y título de positividad. Análisis estadístico: Conteo directo expresado en porcentaje y Test exacto de Fisher (p<0.05)

19 RESULTADOS Casos No Mujeres % Hombres % Total Positivos Negativos Total Mujeres Hombres Positivos Negativos Porcentaje de casos positivos y negativos a anticuerpos antinucleares (n=1137) Positivos Negativos

20 RESULTADOS Distribución (%) por sexo de pacientes con anticuerpos antinucleares positivos (p<0.05) Positivos Negativos Mujeres Hombres Positivos Negativos

21 RESULTADOS Pirámide de población por edad de ANA positivos en la población de Yucatán ( )

22 Patrones RESULTADOS Distribución (%) de los patrones de fluorescencia de anticuerpos antinucleares Centriolar Granulado Nucleolar Mixto Citoplasmático difuso 7.22 Centromérico Moteado fino Homogéneo Moteado grueso Porcentaje

23 CONCLUSIONES La prevalencia de ANA positivos en la población estudiada es del 16%. Las mujeres entre 20 y 59 años fueron el grupo etario con mayor prevalencia de ANA positivos. Los patrones más frecuentes fueron: Moteado grueso, Homogéneo y moteado fino. Las técnicas de ELISA y quimioluminiscencia son pruebas idóneas para el tamizaje de la población propensa a enfermades autoinmunes. IFI debe considerarse como técnica confirmatoria.

24 Contacto: