APROXIMACIÓN AL METABOLISMO DEL DINUCLEÓTIDO DE NICOTINAMIDA Y ADENINA (NAD+) EN LEISHMANIA.

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Aurora Villalba Duarte
hace 6 años
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1 APROXIMACIÓN AL METABOLISMO DEL DINUCLEÓTIDO DE NICOTINAMIDA Y ADENINA (NAD+) EN LEISHMANIA. APPROACH TO THE NICOTINAMIDE ADENINE DINUCLEOTIDE (NAD+) METABOLISM IN LEISHMANIA Luis E. Contreras R 1* RESUMEN Leishmania L. braziliensis, L. major y L. amazonensis Escherichia coli - Leishmania. Palabras clave: Leishmania - 97

2 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas ABSTRACT Leishmania - braziliensis, L. major and L. amazonensis Escherichia col Leishmania Keywords: Leishmania INTRODUCCIÓN - en Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans y Drosophila melanogaster (13). 98 de novo de novo

3 Figura1. Biosintesis del NAD de novo 2) Leishmania braziliensis, L. infantum y L. major Leishmania Leishmania PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Búsqueda de Candidatos y Diseño de Primers. Leishmania - Análisis Filogenéticos. Leishmania - 99

4 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Parásitos y Condiciones de Cultivo. L. (L) amazonensis, L. (L) braziliensis y L. (V) major Extracción de ARN y Síntesis de ADN complementario. - LbNMNAT, LmNMNAT y LaNMNAT. LbNMNAT LmNMNAT y LaNMNAT Clonación del producto LbNMNAT. LbNMNAT Escherichia coli Extracción del Plásmido Recombinante pet100/d- Topo-LbNMNAT. Expresión e Inducción de la Proteína Recombinante LbNMNAT. E. coli 100

5 Análisis de la Inducción por SDS-PAGE. Análisis de la Proteína Recombinante LbNMNAT mediante Western Blot. - Determinación de la Solubilidad de la Proteína Recombinante LbNMNAT. nantes. Ensayo Enzimático Acoplado. + a NADH, RESULTADOS La NMNAT es Altamente Conservada dentro del Genero Leishmania. L. braziliensis, L. infantum y 101

6 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas L. major Tabla 1. Similaridad entre las secuencias-candidato para la NMNAT de Leishmania. L.major L.infantum L.braziliensis - - Especie No Acceso Tipo de Secuencia Porcentaje de Identidad L.braziliensis L. infantum L.major L.infantum L.major L.braziliensis L.major L.braziliensis L.infantum Homo sapiens, Leishmania Figura 2. La NMNAT es altamente conservada dentro del género Leishmania - H. sapiens, HsNM

7 Leishmania melanogaster Leishmania Trypanosoma Leishmania in silico S. cerevisiae G. lambia Leishmania. NMNAT de los parásitos. L. braziliensis y L.major Leishmania L. braziliensis, L. major y L. Infantum Viannia y Leishmania eishmaniasis 103

8 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Las - Especie Primer Sentido Primer Antisentido L. braziliensis L. major Leishmania sp. Figura 4. Expresión de la NMNAT en Leishmanía L. (V) amazonensis L. major. LaNMNAT NMNAT en L. amazonensis - MNAT. - - Expresión de la Proteína Recombinante LbNMNAT. Leishmania L. braziliensis LbNMNAT, 104

9 - Figura 7. Determinación de concentración optima de IPTG Figura 6. Expresión de la proteína Recombinante LbN- MNAT. - - Figura 8. Inducción de la proteína recombinante LbNM- NAT a distintos tiempos

10 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Figura 9. Inducción de la proteína Recombinante LbN- MNAT durante cortos intervalos de tiempo - Detección de la Proteína Recombinante LbNMNAT mediante Western Blot. 106 Figura 10. Inducción de la proteína Recombinante LbN- MNAT mediante Western Blot E. coli Evaluación de la solubilidad de la Proteína Recombinante LbNMNAT.

11 Actividad Enzimatica de la Proteína Recombinante LbNMNAT. + Figura 11. Evaluación de la solubilidad de la Proteína Recombinante LbNMNAT. - - E. coli NAD T [ - DISCUSION + 107

12 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas + de novo Leishmania L. braziliensis + in silico rea- Leishmania LaNMNAT, LbNMNAT LmNMNAT NAD + in Vitro Leishmania + Leishmania 108 in vivo + entre Leishmania Leishmania Leishmania. Leishmania

13 - - Leishmania para la LaNMNAT L. major L. amazonensis Leishmania E. coli - E. coli rne131 E. coli lacuv5 - lac. laci laco lac lacuv

14 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Leishmania + BIBLIOGRAFÍA 1. Trends in Biochemical Sciences 2. - Current Opinion in Cell Biology 3. Annu. Rev. Biochem Annu. Rev. Microbiol 5. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol Trends Biochem. Sci et al Trends Pharma. et al - Science et al et alpnas 12. Annu. Rev. Biochem 13. Current Opinion in Cell Biology et al Cellular and Molecular Life Sciences 15. et al se. BBRC et al et al - 110

15 et al - Leishmania J Clin Microbiol alud en las Américas 2007: Volumen II - Países. Sección 5: Colombia, Costa Rica, Cuba trees. Mol. Biol. Evol 23. Leishmania amazonensis Experimental Parasitology et al Analytical Biochemistry et al - FEBS et al. Nature Genetics et al Gene Tupperwara, N., et al Leishmania Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 31. et al Leishmania Acta Tropica 32. Das, A, et al Nucleic acids research 33. Leishmania major Molecular Microbiology - J. Biol. Chem 35. J. Biol. Chem - Annu. Rev. Genet et alescherichia coli in vivo. Mol. Microbiol E. coli - E. coli cytosol ournal of Biotechnology Natalini, P, et al 111

16 Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Biochemistry FEBS et al Protein Expr Purif et al J Bacteriol et al et al FEBS J Bacteriol Plant J 51. et al. - Analytical Biochemistry 52. et al. Expert Opin. Ther. Targets 112

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