Fase inicial de agregación Fase de sedimentación rápida Fase final de concentración

Transcripción

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2 1.- Introducción: La membrana de los glóbulos rojos tiene una membrana electrostática negativa que da lugar a fuerzas de repulsión entre los hematíes que hacen que los eritrocitos tiendan a permanecer en suspensión.

3 Sin embargo, con el tiempo, los glóbulos rojos acaban depositándose debido a la fuerza de la gravedad en el fondo del recipiente que los contiene en tres fases: Fase inicial de agregación: En ella comienza el apilamiento de los eritrocitos y se produce una sedimentación lenta de los mismos. Dura unos 10 minutos. Fase de sedimentación rápida: En ella el apilamiento y la sedimentación de los glóbulos rojos se produce a una velocidad alta y constante. Dura unos cuarenta minutos. Fase final de concentración: En ella la sedimentación se enlentece. Dura hasta el final de la segunda hora.

4 Fases de la Velocidad de Sedimentación Globular:

5 2.- Fundamento de la determinación: Para la medición de la VSG, se coloca la sangre problema en el interior de un tubo dispuesto verticalmente. En estas condiciones los glóbulos rojos de la sangre tienden a ir cayendo, a favor de la fuerza de la gravedad, hacia la parte inferior del tubo. En condiciones normales este proceso es lento, pues la fuerza con la que es atraído cada hematíe hacia el fondo del tubo es casi compensada por la fuerza ascendente creada por el plasma al desplazarse hacia arriba. La VSG equivale a la longitud del recorrido que desciende la columna de eritrocitos, desde la parte superior del tubo hacia abajo, en un intervalo de tiempo.

6 3.- Material necesario: Tradicionalmente se han usado las pipetas y la gradilla de Westergreen. Recientemente se han incorporado al mercado sistemas semiautomáticos que constan de una bomba de succión que aspira la sangre hasta enrasar las pipetas a 0. Sin embargo, son más recomendables otros sistemas, como el Eritrosed, que permiten una aspiración sin riesgos de la sangre y además son de fácil realización y bajo costo. El sistema Eritrosed consta de los siguientes elementos: Pipetas desechables de vidrio. Cada una de ellas tiene un diámetro externo de 2,4 mm y un diámetro interno de 2,1 mm. Están graduadas en mm, con marcas blancas, desde el 0 hasta el 170. En su interior albergan un émbolo de aspiración de plástico blanco. Gradilla especial, con unas perforaciones en su base, para situar los tubos mezcladores, y con otras, en su parte superior y media, que permiten soportar verticalmente las pipetas, al ser atravesadas por éstas. Además, consta de una corredera superior para atrapar las puntas de los émbolos. Tubos mezcladores de propileno con tapones de goma perforable. Reloj avisador.

7 VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR MATERIALES PARA TOMA DE MUESTRA:

8 VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR TOMA DE MUESTRA:

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10 4.- Reactivos a utilizar: Se recomienda el uso de citrato sódico al 3,8% como anticoagulante, pero también se puede utilizar el EDTA. No se debe emplear otros anticoagulantes como la heparina, pues altera la electrorepulsión de los hematíes, ni los oxalatos, pues encogen las células sanguíneas.

11 5.- Muestra: Se recomienda el empleo de sangre venosa anticoagulada con citrato sódico al 3,8% en una proporción de 4 a 1 (al 20%). Lo ideal es recoger la sangre en tubos mezcladores que contienen 0,4 ml de citrato sódico al 3,8%, y al que se añade sangre venosa problema, hasta el nivel de 2 ml marcado en el tubo mezclador. Si sólo se dispone de sangre anticoagulada con EDTA, se puede utilizar una mezcla de 2 ml de esta sangre con 0,5 ml de citrato sódico al 3,8% o con 0,5 ml de cloruro sódico al 0,85%

12 6.- Técnica: Realizar la prueba a temperatura ambiente (20 a 25ºC), pues a mayor temperatura asciende la VSG y a menor temperatura disminuye la VSG debido a que aumenta la viscosidad de la sangre. Realizarla antes de las tres primeras horas transcurridas desde la extracción de la muestra, pues, tras ese tiempo, los hematíes tienden a adoptar una forma esférica y desciende la VSG. Mezclar suavemente la sangre y el anticoagulante contenidos en el tubo mezclador. Situar el tubo mezclador en una de las perforaciones de la base de la gradilla para la VSG. Introducir una pipeta de VSG a través de las perforaciones superior y media de la gradilla que están localizadas sobre el tubo mezclador correspondiente, y presionar con la pipeta sobre el tapón de éste hasta que su punta lo perfore y alcance al fondo del tubo. Desplazar la corredera superior de la gradilla para atrapar la punta Tirar del émbolo hasta el final de su recorrido y romper el mismo por la zona más débil que tiene para este fin. Ajustar el reloj avisador al tiempo de lectura previsto. Dejar reposar la sangre durante este tiempo sin que sea afectada por vibraciones. El diseño de la gradilla para VSG asegura que, una vez colocada en ella la pipeta de VSG, ésta se halla dispuesta con una posición perfectamente vertical, es decir, con su eje longitudinal perpendicular a la base de la gradilla. Esto es importante, ya que una inclinación de la pipeta hace que aumente el resultado de la VSG.

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15 7.- Lectura de los resultados: La lectura se efectúa a la primera hora y a la segunda hora. Con el paso del tiempo se delimita una zona de separación entre la columna de eritrocitos y el plasma. Al final del tiempo de lectura previsto, se mira en la escala graduada de la pipeta, la marca que coincide con el límite de separación entre los hematíes y el plasma. El resultado se puede expresar de dos maneras: Longitud en mm del recorrido descendente de la columna de glóbulos rojos en una hora (VSG de la primera hora) y en dos horas (VSG de la segunda hora). Índice de Katz, que se calcula con la siguiente fórmula: VSG 2ª h. VSG 1ª h Índice de Katz =

16 Los valores normales de VSG son los expuestos a continuación:

17 7.- Interpretación clínica de los resultados obtenidos: Varía fisiológicamente, así pues, es más alta en la mujer, y aumenta en la vejez y a partir del tercer mes de embarazo. El aumento de las proteínas plasmáticas produce una alteración en las propiedades fisicoquímicas del plasma que conlleva un bloqueo de las cargas eléctricas negativas de los hematíes. Este bloqueo acarrea un apilamiento de los eritrocitos y, por tanto, una formación de agregados de glóbulos rojos. Los agregados hemáticos, al ser más pesados y al tener un área superficial más baja (en comparación con su volumen) que los hematíes aislados, descienden más fácilmente mientras el plasma asciende. Debido a lo anterior, la VSG aumenta en alto grado en enfermedades en las que hay una hiperproducción de inmunoglobulinas monoclonales (neoplasias malignas de las células plasmáticas) y, en menor grado, en enfermedades que cursan con un aumento inespecífico de las inmunoglobulinas (por ej. en las enfermedades autoinmunes) o con un ascenso de las proteínas involucradas en la inflamación, es decir, de los reactantes de fase aguda.

18 Por el contrario, la VSG desciende en las hepatopatías graves que conllevan una hipoproducción de fibrinógeno. El número, el tamaño y la forma de los glóbulos rojos también alteran la VSG; en las anemias aumenta la VSG, sin embargo, en las poliglobulias disminuye. En las macrocitosis asciende, mientras que en las microcitosis disminuye. En las proliferaciones de formas anómalas de los glóbulos rojos la formación de apilamientos está dificultada y, por consiguiente, disminuye la VSG. La alteración de la VSG es un indicador altamente inespecífico, ya que sólo señala la presencia de una enfermedad activa, pero no ofrece casi datos acerca del tipo de proceso patológico que la origina ni de la gravedad de éste. Sólo en algunas ocasiones su grado de ascenso es directamente proporcional a la severidad con la que cursa la enfermedad subyacente, por lo que puede ser utilizada para controlar la evolución de algunas enfermedades (artritis reumatoidea, lupus eritematoso diseminado, endocarditis bacteriana aguda, tuberculosis,...)

19 FUENTES DE ERROR Cuando se determina la velocidad de sedimentación globular, los errores que pueden afectar son de diferentes orígenes: La mezcla del anticoagulante con la sangre debe de ser en las proporciones indicadas y exactas. El tubo debe llenarse hasta la marca de cero y sin burbuja. El tubo debe estar limpio, no tener alcohol o éter, para no producir hemólisis. La prueba se debe de realizar dentro de un periodo desde la extracción de la muestra no mayor de seis horas. La posición estrictamente vertical de las pipetas. La temperatura ambiente debe de estar entre los 22 y 27 C La cantidad de eritrocitos puede afectar el resultado de la velocidad de sedimentación globular así, por ejemplo: en policitemia se encuentra retardada, mientras que en anemias se encuentra aumentada

20 Pipetas de Westergreen en analizador automático

21 MÉTODOS AUTOMÁTICOS PARA VSG Determinación automática de la VSG: Para aumentar la seguridad del personal de laboratorio y facilitar su labor se han incorporado dispositivos automáticos para la determinación de la VSG. Estos dispositivos finalizan su determinación en 30 minutos y disminuyan la presencia de errores humanos. Las características esenciales de los tres principales aparecen reflejadas en la siguiente tabla:

22 Las características esenciales de los principales métodos automatizados aparecen reflejadas en la siguiente tabla: VM: Ves-Matic 80 SC: Sediscan, Becton Dickinson SM: Sedimatic 100, Ral Mm/h: Milimetro por hora

23 VES-MATIC CUBE 80 Especificaciones técnicas: Utilización del tubo de hemograma: Es un tubo plástico que contiene en su interior un anticoagulante. Lectura de la sedimentación siguiendo el método Westergren. Carga y descarga de tubos mediante un rack específico (rack clasificador). Las muestras con solicitud de V.S.G. son cargadas en el instrumento. Rack clasificador con capacidad para 112 tubos (8x14): 56 posiciones de carga y 56 posiciones de descarga. Carga continua del rack clasificador para carga y descarga. Cadena continua de ubicación y sedimentación de 89 posiciones. Primer resultado: 23 minutos y a partir de ese instante un resultado cada 38 seg. Rendimiento: 75 muestras/hora en la primera carga de trabajo y 90 muestras/hora en la siguiente. Programa de control de calidad incorporado. Sin manipulación ni consumo de la muestra. Sin generación de desechos biológicos. Sin mantenimiento por parte del usuario.

24 VES-MATIC CUBE 80