PRINCIPIO DE LA PRUEBA: USO PREVISTO:

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1 ESPECIFICACIONES DEL KIT: Cat. No Cantidad Reactivo Almacenamiento ADRT x 20 PRUEBAS 1 x 3 ml Diluente USO PREVISTO: HIV 2-30 C El HIV-1/2 Plus Combo Rapid Test es un inmunoensayo de flujo lateral para la detección y diferenciación simultánea de anticuerpos anti-hiv-1 y Anti HIV-2 (IgG, IgM, IgA) en suero humano, plasma o sangre completa. Su uso está previsto como un test de cribado y como ayuda en el diagnóstico de infección de HIV. Cualquier muestra reactiva con el HIV-1/2 Ab Plus Combo Rapid Test debe ser confirmada con un método alternativo como ELISA o PCR. RESUMEN Y EXPLICACION: El Virus de Inmunodeficiencia I y II (HIV-1 y HIV-2) es un virus envuelto dotado de una cadena simple de ARN. La relación causal entre HIV-1 y HIV-2 y el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha sido establecida desde hace décadas. HIV-1 ha sido aislado de pacientes con SIDA y de individuos sanos con alto riesgo de desarrollar SIDA. HIV-2 ha sido aislado de pacientes con SIDA del oeste de África y de individuos seropositivos asintomáticos. Los dos tipos de HIV tienen una significante variación en su secuencia. HIV-1 ha sido divido en 3 grupos: grupo M (para el principal) que incluye al menos 10 subtipos (A hasta J); grupo O (para atípicos); y grupo N (ni M, ni O). De manera similar, el HIV-2 ha sido clasificado en al menos 5 subtipos (A hasta E). Algunas variantes del HIV- 1 muestran un poco más de 50% de homología en sus genes de la envoltura con la secuencia de las cadenas de los prototipos más comunes. HIV-1 y HIV-2 pueden provocar una fuerte respuesta inmune, incluyendo la producción de anticuerpos. La presencia de la anticuerpos anti HIV-1 y HIV-2 en sangre, suero y plasma indica la exposición de un individuo al virus de HIV-1 o HIV-2, siendo de gran valor para el diagnóstico clínico. PRINCIPIO DE LA PRUEBA: El HIV-1/2 Plus Combo Rapid Test es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral. El test consiste de: 1) un almohadilla coloreada que contiene el antígeno HIV-1 recombinante conjugado con oro coloidal (HIV-1 Conjugado), Antígeno HIV-2 conjugado con oro coloidal (HIV-2 Conjugado) e IgG de conejo-oro conjugado, 3) una membrana de nitrocelulosa que contiene dos bandas de prueba (Bandas 1 y 2) y una banda control (Banda C). La banda 1 esta pre-cubierta con antígeno para la detección de anticuerpos anti-hiv 1. La banda 2 esta pre-cubierta con antígeno para la detección de anticuerpos anti-hiv 2 y la banda C esta pre-revestida de anticuerpo de cabra anti IgG de conejo. Cuando un adecuado volumen de muestra es dispensado en la ventana de muestra del cassette, la muestra migra por capilaridad a través de del cassette. Si los anticuerpos anti-hiv 1 están presentes en la muestra, entonces migrarán a través de la almohadilla conjugada donde se unirán al HIV-1 conjugado. El inmunocomplejo será capturado en la membrada por el antígeno pre-cubierto formando una banda de color rojo en la región 1 indicando un resultado reactivo o positivo. La ausencia de esta banda en la región del test sugiere un resultado no reactivo o negativo. Si los anticuerpos anti-hiv 2 están presentes en la muestra, entonces migrarán a través de la almohadilla conjugada donde se unirán al HIV-2 conjugado. El i

2 nmunocomplejo será capturado en la membrada por el antígeno pre-cubierto formando una banda de color rojo en la región 2 indicando un resultado reactivo o positivo. La ausencia de esta banda en la región del test sugiere un resultado no reactivo o negativo. La prueba contiene un control, interno (Banda C) la cual debe exhibir un color rojo del inmunocomplejo de IgG de cabra anti-ratón/conjugado IgG de ratón anti humano. De otra manera, el resultado de la prueba seria inválido y la muestra debe ser repetida haciendo uso de otro dispositivo. REACTIVOS Y MATERIALES REQUERIDOS: 1. Cada kit contiene 20 cassettes, sellado en una bolsa de aluminio con los siguientes artículos dentro: a. Un cassette b. Un gotero plástico c. Un desecante 2. Diluente de muestra (1 botella x 3 ml) 3. Un inserto (Instrucciones de uso) 4. Control Positivo (disponible previa solicitud) 5. Control Negativo (disponible previa solicitud) 6. Reloj (No provisto) 7. Dispositivo de punción para sangre completa (no provista) ADVERTENCIA PRECAUCIONES: Para Diagnóstico in Vitro 1. Este inserto debe ser leído completamente antes de ejecutar la prueba. Fallas al seguir las instrucciones causará resultados no confiables. 2. No abrir el empaque a menos que esté capacitado para ejecutar el ensayo. 3. No use dispositivos expirados. 4. Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente (15-30 C) antes de usarlos. 5. No use los componentes de otros kits como sustituto de componentes en este kit. 6. No use muestras hemolizadas. 7. Use ropa adecuada y guantes durante la manipulación del kit y muestras. Deber lavarse las manos después de ejecutar la prueba. 8. Los usuarios de este kit deben seguir las precauciones universales US CDC para la prevención de la transmisión de HIV, HBV y otro patógenos. 9. No debe fumar, beber o comer en áreas donde las muestras y kits son manipulados. 10. Descarte todas las muestras y materiales usados para la realización de la prueba en contenedores para material biológico. 11. Manipule el control positivo y negativo de la misma manera que las muestras de pacientes. 12. Los resultados deben ser leídos dentro de los 15 minutos después de haber dispensado la muestra en el cassette. La lectura de los resultados pasados los 15 minutos puede ocasionar una incorrecta interpretación. 13. No realice la prueba en cuartos con un flujo de aire muy fuerte. PREPARACION DEL REACTIVO Y ESTABILIDAD: Todos los reactivos están listos para su uso. Almacene los kits no usados a 2-30 C. El control positivo y negativo deben ser almacenados a 2-8 C. Asegúrese de que el dispositivo alcance la temperatura ambientes antes de abrirlo. El kit es estable hasta la fecha de expiración impresa en el empaque. No congele el kit ni lo exponga a temperatura mayor de 30 C. TIPO DE MUESTRAS: Considere cualquier material de origen humano como infeccioso y manipule el mismo usando procedimientos estándares de bioseguridad. Plasma: 1. Obtenga la muestra en tubo de color lavanda, azul o verde (contentivo de EDTA, citrato o heparina en Vacutainer respectivamente) por venipunción. 2. Separe el plasma por centrifugación 3. Cuidadosamente retire el plasma y dispénselo en un tubo pre-rotulado. Suero: 1. Obtenga la muestra en tubo de color rojo (Vacutainer sin anticoagulante) por venipunción. 2. Permita la coagulación de la sangre. 3. Separe el suero por centrifugación. 4. Cuidadosamente retire el suero y dispénselo en un tubo pre-rotulado. Ejecute la prueba tan pronto como sea posible después de su obtención. Si la prueba no puede ser realizada inmediatamente, las muestras deben ser almacenadas a 2-8 C hasta 5 días. Las muestras deben ser congeladas a -20 C para un almacenamiento más prolongado. Evite múltiple ciclos de congelación/descongelación. Antes de realizar la prueba, descongele las muestras a Temperatura ambiente, mezcle lentamente. Las

3 muestras contentivas de partículas deben ser aclaradas por centrifugación antes de ejecutar la prueba. Sangre Completa: 1. Gotas de sangre completa pueden ser obtenidas en tubos con anticoagulante (EDTA, Citrato o Heparina) por punción del dedo o venipunción. NO use muestras hemolizadas para realizar la prueba. 2. Muestras de sangre completa deben ser refrigeradas (2-8 C) si la prueba no se va a realizar inmediatamente. Las muestras deben ser analizadas dentro de las 24 horas de obtención. PROCEDIMIENTO: Paso 1: Las muestras y el kit debe estar a temperatura ambiente si están refrigerados o congelados. Mezcle las muestras bien antes de realizar el ensayo una vez que se descongelen. Paso 2: Cuando esté listo para realizar la prueba, abra la bolsa contentiva del cassette por la muesca y retire el dispositivo. Coloque el cassette en una superficie plana y limpia. Paso 3: Asegúrese de colocar el ID de paciente en el cassette. Paso 4: Para Sangre Completa -Dispense 1 gota (aprox µl) de sangre completa en el circulo indicativo de MUESTRA -Dispense 1 gota (aprox µl) de diluente de muestra inmediatamente. Paso 5: Active el cronómetro Paso 6: Los resultados pueden ser leídos en 15 minutos. Resultados positivos pueden ser visibles en menos de 1 minuto. No lea los resultados después de los 15 minutos. Para evitar confusión, descarte el cassette después de interpretar el resultado. CONTROL DE CALIDAD: Utilizando casetes HIV / Sífilis Ab Combo Ensayo Rápido como se describe en el procedimiento anterior, ejecute 1 control positivo y 1 control negativo (proporcionado a pedido si los controles de calidad externos no están disponibles en el laboratorio) en las siguientes circunstancias para supervisar el rendimiento de pruebas: 1. Un nuevo operador utiliza el kit, antes de realizar las pruebas. 2. Se utiliza un nuevo dispositivo de prueba. 3. Se utiliza un nuevo envío de kits. 4. La temperatura de almacenamiento del kit esta fuera de 2-30 C 5. La temperatura de la zona de ensayo está fuera de C RESULTADOS ESPERADOS: 1. NO REACTIVO/NEGATIVO: Si solo la banda C está presente, la ausencia de cualquiera de las bandas (HIV 1/HIV-2) indica que no se detectaron anticuerpos en la muestra. El resultado es NO REACTIVO. Para Suero/Plasma -Llene el gotero con la muestra. Mantenga el gotero verticalmente y dispense 1 gota (aprox µl) en el circulo indicativo de MUESTRA, asegurándose de que no queden burbujas. -Agregue 1 gota (aprox µl) de diluente de muestra inmediatamente. 2. RESULTADO POSITIVO: 2.1 Adicional a la presencia de la banda C, si la banda 1 se desarrolla, la prueba indica la presencia de anticuerpos para HIV-1. El resultado es HIV-1 REACTIVO.

4 Negativo Total Adicional a la presencia de la banda C, si la banda 2 se desarrolla, la prueba indica la presencia de anticuerpos para HIV-1. El resultado es HIV-2 REACTIVO. 2.3 Adicional a la presencia de la banda C, si las bandas 1 y 2 se desarrollan, el resultado también REACTIVO. Para diferenciar el tipo de infección por HIV, diluya la muestra con diluente de muestra 1:50 o 1:100. Luego ejecute la prueba haciendo uso de un nuevo cassette (Vea limitaciones de la prueba -#5) Sensibilidad Relativa: 100%, Especificidad Relativa: 100%, Acuerdo Global: 100% 2. Rendimiento Clínico para la Prueba HIV-2 Ab Un total de 195 muestras provenientes de sujeto susceptibles se analizaron con el HIV ½ Ab Plus Como Rapid Test y por la Administración de Drogas del Estado Chino (SDA) EIA. La comparación para todos los sujetos se muestra en la siguiente tabla: HIV-1/2 Ab Combo Rapid Test EIA Positivo Negativo Total Positivo Negativo Total Sensibilidad Relativa: 100%, Especificidad Relativa: 100%, Acuerdo Global: 100% Las muestras que resulten REACTIVAS o POSITIVAS deben ser confirmadas con un método alternativo como ELISA o PCR y los hallazgos clínicos antes de cualquier diagnóstico 3. RESULTADO INVALIDO: Si no hay banda C, la prueba es inválida aun y cuando aparezca la banda 1 o 2. En este caso, repita la prueba con un nuevo cassette. LIMITACIONES DE LA PRUEBA: 1. El Procedimiento del ensayo y la interpretación del resultado deber se seguido muy de cerca cuando determine la presencia de anticuerpos anti HIV en el suero, plasma o sangre completa de los sujetos. 2. El HIV-1/2 Ab Plus Como Rapid Test está limitado a la detección cualitativa de anticuerpos anti HIV-1 y anti HIV-2 en suero humano, plasma y sangre completa. La intensidad de la banda no se correlaciona con el titulo de anticuerpos presente en la muestra. CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO: 1. Rendimiento Clínico para la Prueba HIV-1 Ab Un total de 1000 muestras provenientes de sujeto susceptibles se analizaron con el HIV ½ Ab Plus Como Rapid Test y por la Administración de Drogas del Estado Chino (SDA) EIA. HIV-1/2 Ab Combo Rapid Test EIA Positivo Negativo Total Positivo Un resultado NO REACTIVO para un individuo indica ausencia detectable de anticuerpos HIV-1 o HIV-2. Sin embargo, un resultado no reactivo no excluye la posibilidad de exposición o infección con HIV-1 o HIV Un resultado NO REACTIVO puede ocurrir si la cantidad de anticuerpos presentes en la muestra está por debajo del límite de detección del ensayo o los anticuerpos no son no están presentes durante la fase de la enfermedad en la cual se obtuvo la muestra.

5 5. Tal y como se ilustra en INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DEL ENSAYO-2,3 las 3 bandas (1,2 y C) pueden desarrollarse cuando se analizan muestras que contienen altos títulos de anticuerpos anti HIV-1. Para diferencia la reactividad cruzada: diluya la muestra con diluente de muestra 1:50 o 1:100, luego haga otra corrida empleando un nuevo cassette. Solo las bandas 1 y C aparecen cuando la infección por HIV-1 está presente. Si las bandas 1,2 y C la prueba indica exposición al virus HIV-1 y HIV Si la sintomatología persiste mientras el resultado de la prueba HIV1/2 Ab Plus Combo Rapid Test es NO REACTIVO, es recomendable obtener una nueva muestra en pocos días o usar un método alternativo- 7. Algunas muestras contienen inusualmente altos títulos de de anticuerpos heterófilos o factor reumatoide que pueden afectar los resultados esperados. 8. Los resultados obtenidos con esta prueba solo deben ser interpretados en conjunto con otros procedimientos diagnósticos o hallazgos clínicos. BIBLIOGRAFIA:

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