Técnicas para medir Inmunidad Celular

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1 Técnicas para medir Inmunidad Celular Inmunología Aplicada 1065 Semestre Grupo 03 Carolina Hernández Martínez Subprograma 121 Formación de profesores Revisado por MD Lastra

2 HEMOGRAMA Número total de eritrocitos, plaquetas, linfocitos, monocitos y granulocitos Población linfocitaria: Linfocitos B: CD19, CD20 Linfocitos T: CD3, CD4, CD8 Células NK: CD56, CD16

3 Función de las células T Pruebas cutáneas de hipersensibilidad retardada Estudios funcionales in vitro Respuesta linfoproliferativa Cultivo mixto de linfocitos Produción de mediadores:citocinas Citotoxicidad T CD8+ Citotoxicidad NK

4 Test de hipersensibilidad retardada

5 Respuesta a diferentes antígenos. El método de la blastogénesis consiste en cultivar los linfocitos evaluando su respuesta a antígenos específicos o con varios mitógenos que provocan mitosis (inmunoproliferación por estímulos no específicos). La transformación blástica específica se mide por la capacidad que tiene el antígeno de inducir inmunoproliferación.

6

7 Rosetas con los eritrocitos Los linfocitos T presentan la característica de formar rosetas cuando se unen a los eritrocitos de carnero. Se pueden cuantificar los linfocitos T incubándolos con eritrocitos de carnero (reconocimiento de moléculas CD2+ y CD58+); posteriormente se observan al microscopio, cuantificando las rosetas (se considera normal entre 70 y 80% positivas).

8

9 LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE LOS LINFOCITOS T (CD 8+) La actividad citotóxica de los linfocitos T CD 8+ frente a una célula blanco (diana) se puede estudiar, midiendo la capacidad citocida, que los linfocitos T tienen para destruir un determinado número de células diana, al estar ambas poblaciones en contacto. Se puede medir mediante la liberación de Cr 51 por las células blanco (diana) previamente marcadas.

10 Cr 51 Cr 51

11 Citotoxicidad NK En esta prueba se mide la capacidad de estas células para matar células blanco especiales (K562). La citotoxicidad suele determinarse mediante el uso de Cr 51. Por citometría de flujo se determina la actividad de estas células utilizando los marcadores específicos.

12 Subpoblaciones de T Mediante anticuerpos monoclonales marcados con fluorocromos (fluoresceína, rodamina, etc) se pueden marcar las diferentes poblaciones linfocitarias y cuantificarlas usando un citometro de flujo: Linfocitos Th: : CD4+ Linfocitos Tc: CD8+ Las mediciones obtenidas se indican en porcentajes de cada población.

13

14 Evaluación de la Fagocitosis

15 Prueba del NBT Es posible observar la reducción del nitroazul de tetrazolio (NBT) debido a que éste acepta un protón, cambiando su típica coloración amarilla transparente por un azul intenso,

16 Test de la reducción de dihidrorodamina (DHR). Los fagocitos reducen la DHR a un compuesto fluorescente en individuos sanos. La ausencias de fluorescencia nos indicaría que puede tratarse de Enfermedad Granulomatosa Crónica ligada al X.

17 Índice Fagocítico. Determina la capacidad de fagocitar de los leucocitos, pero no el poder para digerir las partículas fagocitadas. Actividad bactericida. Complementa la prueba anterior y determina si las bacterias fagocitadas son o no destruidas por las enzimas de los fagosomas de los leucocitos.

18

19 Eritrosedimentación. Indice inespecífico, un valor normal descarta una infección bacteriana. Quimiotaxia. Se basan en medir la locomoción direccional de los neutrófilos hacia diversos estímulos quimiotácticos: por ejemplo la cámarac de Boyden.

20 Ventana cutánea de Rebuck Normalmente se presenta un acúmulo de PMN en las primeras 6 horas, después es sustituido por uno de linfocitos.

21 Quimioluminiscencia Los neutrófilos emiten pequeñas cantidades de radiación electromagnética después de la ingestión de microorganismos. Durante la explosión respiratoria se genera oxígeno molecular (inestable y muy reactivo) que se combina con bacterias u otros elementos intralisosómicos formando grupos carboxilo de inestabilidad electrónica. Cuando estos grupos regresan a su estado basal, emiten energía lumínica

22

23 Pruebas para células B Proteínas (Electroforésis) IgA, IgE Isohematoaglutininas AB (IgM) Anticuerpos Antitoxoide Tetánico (Función IgM) Anticuerpos Antitoxoide Diftérico (Función IgG) Anticuerpos Anti Candida Anticuerpos Anti Neumococo * Antígeno CD20 (Función de células B) Subclases de IgG (IDR) *Si estos anticuerpos se administran pre y post vacunación pueden ser evaluados como una prueba funcional

24 En la actualidad estas técnicas son de gran utilidad para conocer las poblaciones celulares afectadas en diferentes enfermedades

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