IMMULITE. Osteocalcin. English. Principle of the Procedure. Specimen Collection. Summary and Explanation. Warnings and Precautions

Transcripción

1 Osteocalcin

2 IMMULITE Osteocalcin English Intended Use: For in vitro use with the IMMULITE Analyzer for the quantitative measurement of osteocalcin in heparinized plasma, as an aid in monitoring mineral and bone metabolism. Catalog Number: LKOC1 (100 tests) Test Code: OST Color: Dark Gray Summary and Explanation Osteocalcin is a vitamin K dependent protein with a molecular mass of approximately 5800 alton. The protein has been implicated as a bone GLA protein (BGP) due to the 3 gamma carboxyglutamic acid (GLA) residues in its primary structure involved in calcium and hydroxyapatite binding. 1 Osteocalcin is one of the most abundant noncollagenous proteins of the bone, constituting up to 3% of total bone protein. Bone tissue is perpetuated through a dynamic process of bone formation and elimination. Osteocalcin is thought to function in bone tissue formation as it is produced by osteoblasts, 2 cells necessary in this process. In addition, osteocalcin is directly influenced by calcium regulating hormones (calcitonin, 3 parathyroid hormone, vitamin D 4-6 ) required in normal bone mineralization. Osteocalcin has been extensively discussed as a prognostic indicator of bone disease progression. Elevated osteocalcin levels may occur in different diseases including osteomalacia, 7 Paget's disease of the bone, 8 hyperthyroidism, 9 primary hyperparathyroidism and renal osteodystrophy. 10 In addition, osteocalcin levels can also be elevated in postmenopausal osteoporosis due to increased or decreased bone turnover. Depressed levels of osteocalcin have been reported in hypoparathyroidism 11,12 and during long-term corticosteroid therapy. 13 The IMMULITE Osteocalcin assay measures only the intact osteocalcin molecule and does not detect fragmented forms. 16 Principle of the Procedure Immunometric Assay. Incubation Cycles: 1? 30 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Collect blood by venipuncture 14 (avoiding hemolysis) into iced heparinized tubes, noting the time of collection. The tubes should be immersed in an ice bath following collection. Separate the plasma from the cells by centrifugation in a refrigerated centrifuge, then aliquot and freeze immediately in plastic tubes. Volume Required: 25 µl heparinized plasma. (Sample cup must contain at least 100 µl more than the total volume required.) Storage: 2 hours at 2 8 C or 30 days at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro use only. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. 2 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

3 Materials Supplied Components are a matched set. The barcode labels are needed for the assay. Osteocalcin Test Units (LOC1) Each barcode-labeled unit contains one bead coated with monoclonal murine antiosteocalcin antibody, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. LKOC1: 100 units. Allow the Test Unit bags to come to room temperature before opening. Open by cutting along the top edge, leaving the ziplock ridge intact. Reseal the bags to protect from moisture. Osteocalcin Reagent Wedge (LOC2) With barcode. 6.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to to rabbit polyclonal antiosteocalcin, with preservative. Store capped and refrigerated: stable at 2 8 C until expiration date. Recommended usage is within 30 days after opening when stored as indicated. LKOC1: 1 wedge. Osteocalcin Adjustors (LOCL, LOCH) Two vials (Low and High) of lyophilized osteocalcin in a protein-based matrix, with preservative. Reconstitute each vial with 2.0 ml distilled or deionized water, placing Adjustors on ice immediately after making this addition. Use volumetric pipets and mix by gentle, intermittent swirling until the lyophilized material is fully dissolved. Aliquot and freeze. Stable at 20 C for 30 days after reconstitution. It is important to keep the Adjustors cold throughout this process. LKOC1: 1 set. Kit Components Supplied Separately LSUBX: Chemiluminescent Substrate LPWS2: Probe Wash Module LKPM : Probe Cleaning Kit LCHx-y: Sample Cup Holders (barcoded) LSCP: Sample Cups (disposable) LSCC: Sample Cup Caps (optional) LOCCM : Bi-level control containing osteocalcin (protein-based). Also Required Sample transfer pipets, distilled or deionized water, controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE Operator's Manual. See the IMMULITE Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Visually inspect each Test Unit for the presence of a bead before loading it onto the system. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of osteocalcin. Expected Values A reference range study for IMMULITE Osteocalcin was performed on 40 apparently healthy adults yielding a central 95% reference range of: ng/ml. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitation Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay s performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 3

4 otherwise noted, all were generated on heparinized plasma samples.) Calibration Range: Up to 100 ng/ml Analytical Sensitivity: 0.1 ng/ml High-dose Hook Effect: None up to 25,000 ng/ml. Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three osteocalcin solutions (60, 260 and 1500 ng/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for intact osteocalcin. 16 (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 381 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglicerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 28 volunteers into plain, heparinized, and EDTA tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of osteocalcin, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE Osteocalcin procedure. (Serum) = 0.98 (Heparin) ng/ml r = (EDTA) = 0.94 (Heparin) ng/ml r = Means: ng/ml (Heparin) ng/ml (Serum) ng/ml (EDTA) Method Comparison: The assay was compared to a commercially available immunoradiometric assay (Kit A) on 74 serum and plasma samples (patients and spiked). (Concentration range: approximately 1.5 to 56 ng/ml. See graph.) By linear regression: (IML) = 1.2 (Kit A) 0.38 ng/ml r = Means: 19 ng/ml (IMMULITE) 16 ng/ml (Kit A) References 1) Poser JW, Esch FS, Ling NC, Price PA. Isolation and sequence of the vitamin K- dependent protein from human bone. J Biol Chem 1980;255: ) Price PA, Williamson MK, Lothringer JW. Origin of the vitamin K-dependent bone protein found in the plasma and its clearance by kidney and bone. J Biol Chem 1981;256: ) Civitelli R, Gonnelli S, Zacchei F, Bigazzi S, Vattimo A, Avioli LV, Gennari C. Bone turnover in postmenopausal osteoporosis: effect of calcitonin treatment. J Clin Invest 1988;82: ) Caniggia A, Nuti R, Galli M, Loré F, Turchetti V, Righi GA. Effect of long-term treatment with 1,25-dihydroxyvitamin D 3 on osteocalcin in postmenopausal osteoporosis. Calcified Tissue Int 1986;38: ) Zerwekh JE, Sakhaee K, Pak CYC. Short-term 1,25- dihydroxyvitamin D 3 administration raises serum osteocalcin in patients with postmenopausal osteoporosis. J Clin Endocrinol Metab 1985;60: ) Kerner SA, Scott RA, Pike JW. Sequence elements in the human osteocalcin gene cofer basal activation and inducible response to hormonal vitamin D 3. Proc Nat Acad Sci USA 1989;86: ) Demiaux B, Arlot ME, Chapuy MC, Meunier PJ, Delmas PD. Serum osteocalcin is increased in patients with osteomalacia: correlations with biochemical and histomorphometric findings. J Clin Endocrinol Metab 1992;74: ) Merle B, Delmas PD. Normal carboxylation of circulating osteocalcin (bone Gla-protein) in Paget's disease of bone. Bone Miner 1990;11: ) Lukert BP, Higgins JC, Stoskopf MM. Serum osteocalcin is increased in patients with hyperthyroidism and decreased in patients receiving glucocorticoids. J Clin Endocrinol Metab 1986;62: ) Charhon SA, Delmas PD, Malaval L, Chavassieux PM, Arlot M, Chapuy MC, Meunier PJ. Serum bone Gla-protein in renal osteodystrophy: comparison with bone histomorphometry. J Clin Endocrinol Metab 1986;63: ) Duda RJ, O'Brien JF, Katzmann JA, Peterson JM, Mann KG, Riggs BL. Concurrent assays of circulating bone Glaprotein and bone alkaline phosphatase: effects of sex, age, and metabolic bone disease. J Clin Endocrinol Metab 1988;66: ) Kruse K, Kracht U, Wohlfart K, Kruse U. Biochemical markers of bone turnover, intact serum parathyroid hormone and renal calcium excretion in patients with 4 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

5 pseudohypoparathyroidism and hypoparathyroidism before and during vitamin D treatment. Eur J Pediat 1989;148: ) Ekenstam EA, Ljunghall S, Hällgren R. Serum osteocalcin in rheumatoid arthritis and other inflammatory arthritides: relation between inflammatory activity and the effect of glucocorticoids and remission inducing drugs. Ann Rheum Dis 1986;45: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, ) Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, ) Fassbender WJ, Steinhauer B, Stracke H, Schumm-Draeger P-M, Usadel K-H. Validation of a new automated immunoassay for measurement of intact osteocalcin. Clin Lab 2002;48:31 8. Technical Assistance In the United States, available for research use only. contact DPC's Technical Services department. Tel: or Fax: Outside the United States, contact your National Distributor. The Quality System of Diagnostic Products Corporation is registered to ISO 9001:1994. Tables and Graphs Precision (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % % % Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 4 in % 2 in % 1 in % 2 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 3 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 4 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % 5 16 in in % 4 in % 2 in % 1 in % IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 5

6 Recovery (ng/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E A % B % C % A % B % C % A % B % C % Specificity Compound 1 Osteocalcin fragment 1-43 A % B % C % Amount Added 2 % Crossreactivity 3 1,000 ng/ml ND HSA 3,000 ng/ml ND Transferrin 4.0 mg/ml ND Ferritin 100 µg/ml ND higg 100 µg/ml ND AFP 400 IU/mL ND ND: not detectable. 4 Method Comparison Deutsch. Precision: 1 Intra-Assay, 2 Gesamt, 3 Mittelwert, 4 SD (Standardabweichung), 5 CV (Variationskoeffizient). Linearity: 1 Verdünnung, 2 Beobachtet (B), 3 Erwartet (E), 4 % B/E, 5 16 in 16. Recovery: 1 Probe, 2 Beobachtet (B), 3 Erwartet (E), 4 % B/E. Specificity: 1 Verbindung, 2 zugesetzte Menge, 3 % Kreuzreaktivität, 4 NN: Nicht nachweisbar. Method Comparison: Osteocalcin: Osteocalcin. Español. Precision: 1 Intraensayo, 2 Total, 3 Media, 4 DS, 5 CV. Linearity: 1 Dilución, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E, 5 16 en 16. Recovery: 1 Solución, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E. Specificity: 1 Compuesto, 2 Cantidad añadida, 3 % Reacción cruzada, 4 ND: no detectable. Method Comparison: Osteocalcin: Osteocalcina. Français. Precision: 1 Intraessai, 2 Total, 3 Moyenne, 4 SD, 5 CV. Linearity: 1 Dilution, 2 Observé (O), 3 Attendu (A), 4 %O/A, 5 16 dans 16. Recovery: 1 Solution, 2 Observé (O), 3 Attendu (A), 4 %O/A. Specificity: 1 Composé, 2 ajouté, 3 Réaction croisée %. 4 ND: non détectable. Method Comparison: Osteocalcin: Ostéocalcine. Italiano. Precision: 1 Intra-serie, 2 Totale, 3 Media, 4 SD (Deviazione Standard), 5 CV (Coefficiente di Variazione). Linearity: 1 Diluizione, 2 Osservato (O), 3 Atteso (A), 4 %O/A, 5 16 in 16. Recovery: 1 Soluzione, 2 Osservato (O), 3 Atteso (A), 4 %O/A. Specificity: 1 Composto, 2 quantità aggiunta, 3 Percentuale di Crossreattività, 4 ND: non determinabile. Method Comparison: Osteocalcin: Osteocalcina. Português. Precision: 1 Entre-ensaios, 2 Total, 3 Média, 4 Desvio padrão, 5 Coeficiente de variação. Linearity: 1 Diluição, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E, 5 16 em 16. Recovery: 1 Solução, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E. Specificity: 1 Composto, 2 Quantidade adicionada, 3 Percentagem de reacção cruzada, 4 ND: não detectável. Method Comparison: Osteocalcin: Osteocalcina. Deutsch (IML) = 1.2 (Kit A) 0.38 ng/ml r = Osteocalcin Verwendungszweck: Für in-vitro Tests mit dem Analysegerät IMMULITE zur quantitativen Messung von intaktem Osteocalcin im Heparin-Plasma, als Hilfe beim Monitoring des Mineral- und Knochenstoffwechsels. Artikelnummern: LKOC1 (100 Tests) Testcode: OST Farbe: dunkelgrau 6 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

7 Klinische Relevanz Osteocalcin ist ein Vitamin K abhängiges Protein mit einem Molekulargewicht von ungefähr Dalton. Es wird auch als GLA Protein (BGP) bezeichnet, da es in seiner Primärstruktur drei?-carboxyglutaminsäurereste (GLA) zeigt, die Calcium und Hydroxyapatit binden. Mit einem Anteil von ca. 3% ist Osteocalcin das in höchster Konzentration vorkommende Nichtkollagenprotein des Knochens. Knochengewebe ist dem ständigen dynamischen Prozessen des Knochenauf- und abbaus unterworfen. Osteocalcin wird entsprechend seiner Funktion im Knochenaufbau von den Osteoblasten produziert. Gleichzeitig wird die Osteocalcin-Konzentration direkt von Calciumregulierenden Hormonen (Calcitonin, Parathormon, Vitamin D) beeinflusst. Osteocalcin wird als prognostischer Faktor für Knochenerkrankungen diskutiert. Erhöhte Osteocalcin-Konzentrationen werden bei verschiedenen Erkrankungen wie Osteomalazie, Morbus Paget, Hyperthyreoidismus, primärer Hyperparathyreoidismus und renaler Osteodystrophie gefunden. Zusätzlich können erhöhte Osteocalcin- Konzentrationen auch bei postmenopausaler Osteoporose aufgrund des erhöhten Knochenumsatzes beobachtet werden. Erniedrigte Osteocalcin-Konzentrationen wurden bei Hypoparathyreoidismus und unter lang andauernder Cortikosteroid Therapie gefunden. Der IMMULITE Osteocalcin Assay erfasst nur das intakte Osteocalcin-Molekül und weist keine Kreuzreaktionen zu fragmentierten Formen auf. 16 Methodik Immunometrischer Assay. Inkubationszyklen: 1 30 min. Probengewinnung Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klärung von lipämischen Proben empfohlen. Bei hämolysierten Proben besteht die Möglichkeit einer unsachgemäßen Handhabung vor Eintreffen im Labor, daher sind die Ergebnisse zurückhaltend zu interpretieren. Die Blutentnahme soll in gekühlte Heparin-Röhrchen erfolgen (Hämolyse ist zu vermeiden), die anschließende Lagerung der Röhrchen im Eisbad. Zur Trennung von Plasma und Zellen eine Kühlzentrifuge verwenden. Das Plasma aliquotieren und in Plastik-Glasgefäßen tieffrieren. Erforderliche Menge: 25 µl Heparin- Plasma. (Inhalt der Probenschale muss mindestens 100 µl über der erforderlichen Gesamtmenge liegen.) Lagerung: 2 Stunden bei 2 8 C oder 30 Tage bei 20 C. Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Ausschließlich in vitro zu verwenden. Reagenzien: Bei 2 8 C lagern. Unter Einhaltung der geltenden gesetzlichen Vorschriften entsorgen. Die generell geltenden Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektiös zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflächenantigen und Hepatitis-C-Antikörper untersucht und negativ befundet. Bestimmten Komponenten wurde Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um die Bildung von explosiven Metallaziden in Blei- und Kupferrohren zu verhindern, sollten die Reagenzien nur zusammen mit großen Wassermengen in die Kanalisation gespült werden. Chemilumineszenz-Substrat: Kontamination und direkte Sonneneinstrahlung vermeiden. Siehe Packungsbeilage. Wasser: Destilliertes oder deionisiertes Wasser verwenden. Im Lieferumfang enthalten Die Komponenten sind aufeinander abgestimmt. Die Barcode-Etiketten werden für den Assay benötigt. Osteocalcin Teströhrchen (LOC1) Jede mit Barcode-Etikette versehene Einheit enthält eine mit monoklonalem Anti-Osteocalcin-Mausantikörper IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 7

8 beschichtete Kugel, mit Konservierungsmittel. Bei 2 8 C bis zum Ablaufdatum haltbar. LKOC1: 100 Teströhrchen. Verpackte Teströhrchen vor dem Öffnen stehen lassen, bis sie Zimmertemperatur erreicht haben. Oben entlang der Kante aufschneiden, ohne den Plastikverschluss zu beschädigen. Verpackungen wieder dicht verschließen, damit der Inhalt trocken bleibt. Osteocalcin- Reagenzbehälter (LOC2) Mit Barcode. 6,5 ml mit alkalischer Phosphatase (Rinderkalbsdarm) konjugiertes polyklonales anti-shbg (Hase), mit Konservierungsmittel. Verschlossen und gekühlt aufbewahren: Bei 2 8 C bis zum Ablaufdatum haltbar. Bei entsprechender Lagerung beträgt die empfohlene Aufbrauchsfrist nach dem Öffnen 30 Tage. LKOC1: 1 Behälter. Osteocalcin- Kalibratoren (LOCL, LOCH) Zwei Fläschchen (Low und High) mit lyophilisiertem Osteocalcin in einer Protein-/Puffermatrix (mit Konservierungsmittel). Fläschchen mit je 2,0 ml destilliertem oder deionisiertem Wasser rekonstituieren. Nach Zugabe des Wassers die Kalibratoren sofort ins Eis stellen. Zum Mischen leicht schwenken oder umdrehen, bis das lyophilisierte Material vollständig aufgelöst ist. Aliquotieren und einfrieren. Nach Rekonstituierung 30 Tage bei 20 C haltbar. Es ist wichtig, die Kalibratoren während des gesamten Vorgangs kühl zu halten. LKOC1: 1 Set. Separat erhältliche Testsystem- Komponenten LSUBX: Chemilumineszenz-Substrat LPWS2: Pipettenwaschlösung LKPM: Pipettenreinigungsset LCHx-y: Halterungen für die Probenschalen (mit Barcodierung) LSCP: Probenschalen (Einwegartikel) LSCC: Verschlüsse für die Probenschalen (optional) LOCCM : Osteocalcin-Kontrollmodul (2 Konzentrationen). Ebenfalls benötigt: Transferpipetten für die Proben; destilliertes bzw. deionisiertes Wasser; Kontrollen. Testdurchführung Für eine optimale Funktion des Gerätes ist unbedingt zu beachten, dass die Wartungen, wie im IMMULITE-Handbuch beschrieben, regelmäßig durchgeführt werden. Hinweise zur Vorbereitung, täglichen Inbetriebnahme des Systems, der Kalibrierung sowie Verfahren zur Testund Qualitätskontrolle entnehmen Sie bitte dem IMMULITE-Handbuch. Überprüfen Sie jedes Teströhrchen auf das Vorhandensein der Polystyrol-Kugel vor dem Einsetzen in das Gerät. Empfohlenes Kalibrationsintervall: 2 Wochen. Proben zur Qualitätskontrolle: Kontrollen oder Poolseren mit Osteocalcin in mindestens zwei Konzentrationen (niedrig und hoch) verwenden. Referenzwerte Eine mit dem IMMULITE -Testsystem zur Bestimmung von Osteocalcin durchgeführte Studie zur Ermittlung des Referenzbereichs mit Proben von 40 für gesund befundenen Erwachsenen ergab einen zentralen 95%-Bereich von: 3,1-13,7 ng/ml. Diese Grenzwerte sind lediglich als Richtlinien aufzufassen. Jedes Labor sollte seine eigenen Referenzbereiche etablieren. Grenzen der Methode Heterophile Antikörper in Humanseren können mit Immunglobulinen aus den Assaykomponenten reagieren und Interferenzerscheinungen innerhalb des in vitro Immunoassays verursachen. (Clin. Chem. 1988:34:27-33) Proben von Patienten, die häufig mit Tier- bzw. Tierserumprodukten zu tun haben, können die erwähnten Interferenzen verursachen und zu anomalen Resultaten führen. Die verwendeten Reagenzien sind so konzipiert, dass das Risiko einer Interferenz mit den zu messenden Proben minimiert ist. Dennoch können potentiell 8 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

9 Interaktionen zwischen seltenen Seren und den Testkomponenten auftreten. Zu diagnostischen Zwecken sollten die mit dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer in Kombination mit der klinischen Untersuchung, der Patientenanamnese und anderen Befunden gesehen werden. Leistungsdaten Siehe Tabellen und Grafiken mit repräsentativen Daten für den Assay. Die Ergebnisse sind als ng/ml ausgedrückt. (Sofern nicht anders angegeben wurden alle Ergebnisse mit Heparin- Plasmaproben bestimmt.) Messbereich: Bis 100 ng/ml Analytische Sensitivität: 0,1 ng/ml High-Dose-Hook-Effekt: Keiner bis zu ng/ml. Präzision: Proben wurden innerhalb von 20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen in Doppelbestimmung gemessen (insgesamt 40 Bestimmungen und 80 Einzelmessungen; siehe Tabelle Präzision ). Linearität: Proben wurden in verschiedenen Verdünnungen getestet. (Repräsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle Linearität.) Wiederfindung: Die getesteten Proben waren mit drei Osteocalcin -Lösungen (60, 260 und ng/ml) 1:19 versetzt. (Repräsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle Recovery.) Spezifität: Der Assay ist hochspezifisch für Osteocalcin Intakt. 16 (Siehe Tabelle Specificity.) Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationen bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Hämolyse: Hämoglobin hat in Konzentrationen bis zu 381 mg/dl keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Lipämie: Triglyceride hat in Konzentrationen bis zu mg/dl keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Alternative Probenarten: Um die Auswirkungen von verschiedenen Probenarten zu untersuchen, wurde Blut von 28 Freiwilligen in Röhrchen ohne Additiva, in Heparin-, und EDTA-Rörchen gesammelt. Gleiche Volumina der jeweiligen Proben wurden mit verschiedenen Konzentratonen an Osteocalcin versetzt, um Werte im gesamten Kalibrationsbereich zu erhalten, und die Proben anschließend mit dem IMMULITE Assay für Osteocalcin gemessen. (Serum) = 0,98 (Heparin) + 0,35 ng/ml r = 0,992 (EDTA) = 0,94 (Heparin) + 0,94 ng/ml r = 0,990 Mittelwerte: 19,45 ng/ml (Heparin) 19,38 ng/ml (Serum) 19,31 ng/ml (EDTA) Methodenvergleich: Der Assay wurde auf der Basis von 74 Serum- und Plasmaproben mit einem kommerziell erhältlichen immunoradiometrischen Assay (Kit A) verglichen (Patientenproben und mit Osteocalcin versetzte Proben). (Konzentrationsbereich: ca. 1,5 bis 56 ng/ml. Siehe Grafik.) Durch lineare Regression: (IML) = 1,2 (Kit A) 0,38 ng/ml r = 0,990 Mittelwerte: 19 ng/ml (IMMULITE) 16 ng/ml (Kit A) Anwendungsberatung Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an Ihre DPC Niederlassung. Das Qualitätssystem der Diagnostic Products Corporation ist nach ISO 9001:1994 registriert. Español Osteocalcina Utilidad del análisis: Para uso in vitro con el Analizador IMMULITE para la medición cuantitativa de osteocalcina en plasma heparinizado, como una ayuda para monitorear el metabolismo mineral y óseo. Números de Catálogo: LKOC1 (100 tests) Código del Test: OST Color: Gris oscuro IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 9

10 Resumen y Explicación del Test La osteocalcina es una proteína dependiente de la vitamina K con un peso molecular de aproximadamente Daltons. La proteína ha sido implicada como una proteína GLA ósea (BGP) debido a los tres residuos gama ácido carboxiglutámico (GLA) de su estructura primaria que están implicados en la unión de calcio e hidroxiapatita. 1 La osteocalcina es una de las proteínas no colágenas más abundantes del hueso y constituyen hasta el 3% de la proteína ósea total. El tejido óseo se perpetúa continuamente mediante un proceso dinámico de formación y eliminación de hueso. Se piensa que la osteocalcina funciona en la formación del tejido óseo a medida que es producida por los osteoblastos, 2 las células necesarias para este proceso. Además, la osteocalcina está directamente influenciada por las hormonas reguladoras del calcio (calcitonina, 3 hormona paratiroidea, vitamina D 4-6 ) que son necesarias en la mineralización normal del hueso. La osteocalcina ha sido extensamente discutida como un indicador para pronosticar la progresión de la enfermedad ósea. Los niveles de osteocalcina pueden encontrarse elevados en distintas enfermedades, incluyendo la osteomalacia, 7 la enfermedad ósea de Paget, 8 el hipertiroidismo, 9 el hiperparatiroidismo primario y la osteodistrofia renal. 10 Además, los niveles de osteocalcina también pueden estar elevados en la osteoporosis postmenopáusica debido a un incremento o disminución del metabolismo óseo. Se han informado niveles deprimidos de osteocalcina en el hipoparatiroidismo 11,12 y durante el tratamiento prolongado con corticosteroides. 13 El ensayo Osteocalcina IMMULITE sólo mide la molécula de osteocalcina intacta y no detecta las fromas fragmentadas. 16 Principio del análisis Inmunométrico. Ciclos de incubación: 1? 30 minutos. Recogida de la muestra Se recomienda el uso de una ultracentrífuga para aclarar las muestras lipémicas. Las muestras hemolizadas podrían indicar una mala manipulación de la muestra antes de ser recibida por el laboratorio; en este caso, los resultados deben interpretarse con precaución. Recoger sangre por venipunción 14 (evitando la hemólisis) en tubos heparinizados colocados en hielo e indicar la hora de la toma. Después de tomar las muestras, sumergir los tubos en un baño de hielo. Separar el plasma de las células por centrifugación en una centrífuga refrigerada, luego alicuotar y congelar inmediatamente en tubos plásticos. Volumen requerido: 25 µl plasma heparinizado. (El recipiente de la muestre debe contener, como mínimo, 100 µl más que el volumen total requerido). Conservación: 2 horas a 2 8 C, o 30 meses a 20 C. Advertencias y Precauciones Sólo para uso in vitro. Reactivos: Mantener a 2 8 C. Desechar de acuerdo con las normas aplicables. Siga las precauciones universales y manipule todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de sangre humana han sido analizados y son negativos para sífilis; para anticuerpos frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C. Se ha usado Azida sodica, en concentraciones menores de 0,1 g/dl, como conservante. Para su eliminacion, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la constitucion de residuos de azidas metalicas, potencialmente explosivas, en las canerias de cobre y plomo. Sustrato quimioluminiscente: evite la contaminación y exposición a la luz directa del sol. (Ver el prospecto.) Agua: Use agua destilada o desionizada. 10 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

11 Materiales Suministrados Los componentes representan un juego completo. Las etiquetas incluidas en la caja son necesarias para el ensayo. Unidades de análisis de Osteocalcina (LOC1) Cada unidad etiquetada con código de barras contiene una bola recubierta de anticuerpo monoclonal murino antiosteocalcina, con conservante. Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad. LKOC1: 100 unidades. Espere a que las bolsas de las unidades de análisis alcancen la temperatura ambiente antes de abrirlas. Ábralas cortando por el extremo superior, dejando el borde del cierre de cremallera intacto. Vuelva a cerrar las bolsas herméticamente para protegerlas de la humedad. Vial de reactivo de Osteocalcina (LOC2) Con códigos de barras. 6,5 ml de fosfatasa alcalina (intestino de ternera) conjugada con un anticuerpo policlonal de conejo anti-osteocalcina, con conservante. Guardar tapado y refrigerado: estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad. Se recomienda utilizarlo antes de que pasen 30 días después de abrirlo cuando se guarda según lo indicado. LKOC1: 1 vial. Ajustadores de Osteocalcina (LOCL, LOCH) Dos viales (bajo y alto) de osteocalcina liofilizada en una matriz proteica en solución tampón, con conservante. Reconstituir cada vial con 2,0 ml de agua destilada o desionizada, colocando los Ajustadores en hielo inmediatamente después de hacer esta adición. Usar pipetas volumétricas y mezclar suavemente con agitación intermitente hasta que el material liofilizado esté completamente disuelto. Alicuotar y congelar. Estable a 20º C durante 30 días después de reconstituirlo. Es importante mantener los Ajustadores fríos durante todo el procedimiento. LKOC1: 1 juego. Componentes del kit que se suministran por separado LSUBX: Substrato quimioluminiscente LPWS2: Lavado de sonda LKPM: Kit de limpieza de sonda LCHx-y: Soportes de recipientes de muestras (con códigos de barras) LSCP: Recipientes de muestras (desechables) LSCC: Tapas para los recipientes de muestras (opcionales) LOCCM : Control con osteocalcina (base proteica) de dos niveles. También necesario Pipetas de transferencia de muestras; agua destilada o desionizada; controles. Ensayo Aviso: para obtener el funcionamiento óptimo, es importante realizar todos los procedimientos del mantenimiento general según lo definido en el manual del operador de IMMULITE. Consulte el Manual del operador de IMMULITE para: la preparación, instalación, ajuste, ensayo y procedimientos de control de calidad. Inspeccionar visulamente cada unidad de rección para asegurarse de que hay una bola antes de introducirla en el Sistema. Intervalo de ajuste recomendado: 2 semanas. Muestras de Control de Calidad: Utilizar controles o pooles de sueros con al menos dos niveles diferentes de osteocalcina (bajo y alto). Valores Esperados Se realizó un estudio del intervalo de referencia para IMMULITE en 40 adultos aparentemente sanos el cual dio un intervalo de referencia 95% central de: 3,1 13,7 ng/ml. Estos límites han de considerarse sólo como una guía. Cada Laboratorio deberá establecer sus propios rangos de referencia. Limitación Los anticuerpos heterofílicos en el suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los componentes del IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 11

12 ensayo provocando interferencias con los inmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Las muestras de los pacientes que frecuentemente están expuestos a animales o a productos séricos animales pueden presentar este tipo de interferencia que potencialmente ocasione un resultado anómalo. Estos reactivos han sido formulados para minimizar el riesgo de interferencia, no obstante, pueden darse interacciones anómalas entre sueros conflictivos y los componentes del ensayo. Con fines de diagnóstico, los resultados obtenidos con este ensayo siempre deben ser usados en combinación con el examen clínico, la historia médica del paciente y cualquier otro dato clínico relevante. Características Analíticas Para ver resultados representativos de las cualidades del ensayo ver las tablas y los gráficos. Los resultados se expresan en ng/ml. (A menos que se especifique lo contrario, todos los resultados se generaron sobre muestras de plasma heparinizado). Rango de Calibración: Hasta 100 ng/ml Sensibilidad: 0,1 ng/ml Efecto de gancho a altas dosis: Ninguno hasta ng/ml. Precisión: Las muestras fueron analizadas por duplicado durante 20 días, en dos tandas de trabajo por día, para un total de 40 tandas y 80 replicados. (Ver la tabla de Precision.) Linealidad: Las muestras fueron analizadas en varias diluciones. (Ver la tabla de Linearity para resultados representativos.) Recuperación: Se analizaron muestras sobrecargadas 1 en 19 con tres soluciones de osteocalcina (60, 260 y ng/ml). (Ver la tabla de Recovery para resultados representativos.) Especificidad: El ensayo es altamente específico para osteocalcina intacta 16 (Ver la tabla de Specificity ). Bilirrubina: La presencia de bilirrubina, en concentraciones hasta 200 mg/l, no tienen ningún efecto sobre los resultados en términos de precisión. Hemolisis: La presencia de hemoglobina, en concentraciones hasta 381 mg/dl,no tienen ningún efecto sobre los resultados en términos de precisión. Lipemia: La presencia de triglicéridos en concentraciones hasta mg/dl no tiene efecto alguno en los resultados, en lo correspondiente a la precisión del ensayo. Tipo alternativo de muestra: para evaluar el efecto de los diferentes tipos de muestras alternativos, se recogió sangre de 28 voluntarios en tubos normales, tubos heparinizado, y tubos con EDTA. Volúmenes iguales de las diferentes muestras fueron sobrecargadas con diferentes concentraciones de osteocalcina, con la finalidad de cubrir todo el rango de calibración del ensayo, y procesadas con el procedimiento IMMULITE Osteocalcina. (Suero) = 0,98 (Heparina) + 0,35 ng/ml r = 0,992 (EDTA) = 0,94 (Heparina) + 0,94 ng/ml r = 0,990 Medias: 19,45 ng/ml (Heparina) 19,38 ng/ml (Suero) 19,31 ng/ml (EDTA) Comparación del Método: Se comparó el ensayo con un ensayo inmunoradiométrico comercialmente disponible (Kit A) en 74 muestras de suero y plasma (de pacientes y pulsadas) (Rango de Concentración: aproximadamente 1,5 a 56 ng/ml. Véase el gráfico.) Por regresión lineal: (IML) = 1,2 (Kit A) 0,38 ng/ml r = 0,990 Medias: 19 ng/ml (IMMULITE) 16 ng/ml (Kit A) Asistencia técnica Contáctese con su Distribuidor Nacional. El Sistema de Calidad de Diagnostic Products Corporation está registrado para la ISO 9001: IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

13 Français IMMULITE Ostéocalcine Domaine d utilisation : Dosage quantitatif de l ostéocalcine dans le plasma hépariné. Ce test est réservé à un usage in vitro avec l'analyseur IMMULITE et constitue une aide dans le suivi du métabolisme minéral et osseux. Référence catalogue : LKOC1 (100 tests) Code produit : OST. Code couleur : gris foncé. Introduction L ostéocalcine est une protéine vitamine K dépendante d une masse moléculaire d environ Daltons. La protéine a été désignée comme une protéine osseuse GLA (BGP) du fait des résidus d acide 3?- carboxyglutamique (GLA) de sa structure primaire impliqués dans la fixation du calcium ou de l hydroxyapatite. 1 L ostéocalcine est l une des protéines non-collagènes de l os les plus abondantes, constituant jusqu à 3 % des protéines osseuses totales. Le tissu osseux est régénéré par un processus dynamique de formation et élimination osseuses. L ostéocalcine est soupçonnée d agir sur la formation du tissu osseux lors de sa production par les ostéoblastes, 2 cellules nécessaires à ce processus. De plus, l ostéocalcine est directement influencée par les hormones régulatrices du calcium (calcitonine, 3 hormone parathyroïde, vitamine D 4-6 ) nécessaires à la minéralisation normale de l os. L ostéocalcine a été très discutée comme indicateur pronostique de la progression de pathologies osseuses. Des taux élevés d ostéocalcine peuvent apparaître lors de diverses pathologies telles que l ostéomalacie, 7 la maladie osseuse de Paget, l hyperthyroïdisme, l hyperparathyroïdisme primaire et l ostéodystrophie rénale. 10 De plus, les taux d ostéocalcine peuvent augmenter en cas d ostéoporose lors de la ménopause à cause d un renouvellement osseux accru ou diminué. Des taux faibles d ostéocalcine ont été rencontrés en cas d hypoparathyroïdisme 11,12 et lors de thérapie de longue durée aux corticostéroïdes. 13 Le test Immulite Ostéocalcine mesure uniquement les molécules intactes d'ostéocalcine et ne détecte pas les formes fragmentées. 16 Principe du test Test Immunométrique. Cycles d'incubation : 1? 30 minutes. Recueil des échantillons Il est recommandé de clarifier les échantillons hyperlipémiques par ultracentrifugation. Des échantillons hémolysés peuvent être révélateurs d une préparation inadéquate du prélèvement avant son envoi au laboratoire ; il faudra donc interpréter les résultats avec prudence. Prélever par ponction veineuse 14 sur tubes héparinés glacés en évitant l'hémolyse et noter l'heure du prélèvement. Les tubes doivent être immergés dans un bain glacé après prélèvement. Séparer le plasma des cellules par centrifugation dans une centrifugeuse réfrigérée, puis aliquoter et congeler immédiatement dans des tubes en plastique. Volume nécessaire : 25 µl de plasma hépariné. (L unité-échantillon doit contenir au moins 100 µl de plus que le volume total nécessaire.) Conditions de conservation : 2 heures à +2 C/+8 C ou 30 jours à 20 C. Précautions d emploi Réservé à un usage in vitro. Réactifs : conserver les réactifs à +2/ +8 C. Eliminer les déchets conformément à la réglementation en vigueur. Respecter les précautions d emploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les réactifs dérivés de produits humains et utilisés dans ce coffret ont subi un test sérologique pour la Syphilis et des tests de dépistage pour les anticorps anti- VIH1 et 2, anti-hcv et pour l antigène de surface de l hépatite B, qui se sont tous avérés négatifs. De l'azide de sodium a été ajouté comme conservateur ; lors de l'élimination, l'évacuer avec de grandes quantités d'eau pour éviter une accumulation d'azides IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 13

14 métalliques explosifs dans les canalisations. Substrat chimiluminescent : éviter les contaminations et l exposition directe à la lumière solaire (voir la fiche technique). Eau : utiliser uniquement de l eau distillée ou désionisée. Matériel fourni Les composants de la trousse ne peuvent être utilisés que conjointement. Les étiquettes à l intérieur du coffret sont nécessaires au dosage. Tests unitaires Ostéocalcine (LOC1) Avec code-barre. Chaque unité-test contient une bille revêtue d un anticorps monoclonal murin anti-ostéocalcine avec conservateur. Stable à +2 C/+8 C jusqu à la date de péremption. LKOC1: 100 unités. Porter les sachets à température ambiante avant d ouvrir. Ouvrir le sachet avec des ciseaux en préservant le dispositif de fermeture. Refermer les sachets pour les protéger de l humidité. Cartouche Ostéocalcine (LOC2) Avec code-barres. 6,5 ml d anticorps polyclonal de lapin anti-ostéocalcine marqué à la phosphatase alcaline (intestins de veau) avec conservateur. Conserver bouché et réfrigéré : stable à +2 C/+8 C jusqu à la date de péremption. A utiliser de préférence dans les 30 jours qui suivent l ouverture, si les recommandations de stockage sont respectées. LKOC1: 1 cartouche. Ajusteurs Ostéocalcine (LOCL, LOCH) 2 flacons d ajusteurs («haut» et «bas») lyophilisés contenant d ostéocalcine dans une matrice tampon/ protéines, avec conservateur. Reconstituer chaque flacon avec 2,0 ml d eau distillée ou désionisée, puis déposer les ajusteurs sur de la glace immédiatement. Mélanger doucement jusqu à complète dissolution du produit lyophilisé. Aliquoter et congeler. Stable à 20 C pendant 30 jours après reconstitution. Il est important de conserver les Ajusteurs froids durant tout ce processus. LKOC1: 1 jeu. Composants du coffret fournis séparément LSUBX : Substrat chimiluminescent LPWSM : Solution de lavage LKPM : Coffret de décontamination de l aiguille de prélèvement LCHx-y : Supports pour godets échantillons (avec code-barre) LSCP : Godets échantillons (à usage unique) LSCC : Bouchons pour godets échantillons (optionnel) LOCCM : Contrôle à deux niveaux contenant de l ostéocalcine (à base de protéines). Egalement requis Pipettes pour le transfert des échantillons ; eau distillée ou désionisée ; contrôles. Protocole de dosag Noter que pour des performances optimales, il est important de réaliser toutes les procédures de maintenance de routine selon les instructions du Manuel d'utilisation IMMULITE. Se reporter au manuel d utilisation de l IMMULITE pour : la préparation, le démarrage du système, les ajustements, le dosage et les procédures de contrôle de qualité. Vérifier visuellement que chaque Unité- Test contient bien une bille avant de la charger dans l'automate. Intervalle d'ajustement recommandé : 2 semaines. Echantillons pour le contrôle de qualité : Utiliser des contrôles ou des pools de sérums avec au moins deux niveaux de concentration (faible ou élevé) d ostéocalcine. Valeurs de référence Une étude des valeurs de référence, réalisée avec le test IMMULITE Ostéocalcine sur 40 adultes apparemment en bonne santé, a donné les résultats suivants un domaine centré à 95 % 3,1 13,7 ng/ml. Utiliser ces valeurs à titre indicatif uniquement. Chaque laboratoire devrait établir ses propres valeurs de référence. 14 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

15 Limites Les anticorps hétérophiles du sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines faisant partie des composants du coffret et interférer avec les immunodosages in vitro. [Voir Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Les échantillons provenant de patients fréquemment exposés aux animaux ou aux produits sériques d'origine animale peuvent présenter ce type d'interférence pouvant potentiellement donner un résultat anormal. Ces réactifs ont été mis au point afin de minimiser le risque d'interférence, cependant des interactions potentielles entre des sérums rares et les composants du test peuvent se produire. Dans un but diagnostique, les résultats obtenus avec ce dosage doivent toujours être utilisés en association avec un examen clinique, l'histoire médicale du patient et d'autres résultats. Performances du test Consulter les tableaux et graphiques pour obtenir les données représentatives des performances du test. Les résultats sont donnés en ng/ml. (En l absence de précision supplémentaire, tous les résultats ont été obtenus sur des échantillons de plasma hépariné.) Domaine de mesure : jusqu à 100 ng/ml Sensibilité analytique : 0,1 ng/ml Effet-crochet : aucun jusqu'à ng/ml. Précision : les valeurs ont été établies à partir de doublets dosés dans deux séries différentes chaque jour pendant 20 jours soit au total 40 séries et 80 doublets. (Voir le tableau Precision.) Linéarité : les échantillons ont été testés avec des taux de dilution variés. (Voir le tableau Linearity pour des données représentatives.) Récupération: les échantillons testés ont été chargés dans un rapport de 1 à 19 avec trois solutions ostéocalcine (60, 260 et ng/ml). (Voir le tableau Recovery pour des données représentatives.) Spécificité : le test est hautement spécifique de l ostéocalcine intacte. 16 (Voir le tableau Specificity.) Bilirubine : La présence de bilirubine ne présente aucun effet sur les résultats ni sur la précision du dosage si la concentration ne dépasse pas 200 mg/l. Hémolyse : La présence d'hémoglobine ne présente aucun effet sur les résultats ni sur la précision du dosage si la concentration ne dépasse pas 381 mg/dl. Lipémie : La présence de triglycérides jusqu'à une concentration de mg/dl n'interfère ni sur la précision du dosage, ni sur les résultats. Utilisation de différents types d'échantillons : pour estimer l'effet de l'utilisation de différents type d'échantillons, 28 volontaires ont été prélevés sur tubes secs, héparinés, et EDTA. Des volumes égaux de ces différents échantillons ont été mélangés avec plusieurs concentrations d' ostéocalcine pour obtenir des valeurs à l'intérieur du domaine de mesure du test puis dosés avec le protocole l'immulite Ostéocalcine. (Sérum) = 0,98 (Héparine) + 0,35 ng/ml r = 0,992 (EDTA) = 0,94 (Héparine) + 0,94 ng/ml r = 0,990 Moyennes: 19,45 ng/ml (Héparine) 19,38 ng/ml (Sérum) 19,31 ng/ml (EDTA) Comparaison de méthodes : Le test a été comparé à un dosage immunoradiométrique disponible dans le commerce (coffret A) sur 74 échantillons de sérum et de plasma (patients et surcharges) (dont les concentrations allaient d environ 1,5 à 56 ng/ml. Voir graphique.) Par régression linéaire : (IML) = 1,2 (Coffret A) 0,38 ng/ml r = 0,990 Moyennes : 19 ng/ml (IMMULITE) 16 ng/ml (Coffret A ) Assistance technique En France distribué par DPC France 90 bd National La Garenne-Colombes Le système d assurance qualité de DPC est certifié ISO 9001 (1994). IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 15

16 Italiano Osteocalcina Uso progettato: Per prove in vitro con l analizzatore IMMULITE per la misurazione quantitativa dell Osteocalcina nel sangue eparinizzato quale ausilio nel monitoraggio del metabolismo minerale ed osseo. Codice: LKOC1 (100 test) Codice del Test: OST Colore: grigio scuro Riassunto e spiegazione del Test L Osteocalcina è una vitamina dipendente dalla proteina K con una massa molecolare di circa Dalton. La proteina presenta delle implicazioni come proteina ossea GLA (BGP) a causa dei residui dell acido 3 gamma carbossiglutamico (GLA) nella sua struttura primaria coinvolta nel legame del calcio e dell idrossiapatite. L Osteocalcina è una della proteine delle ossa più abbondanti prive di collagene. Costituisce fino al 3% delle proteine ossee totali. Il tessuto osseo viene perpetuato attraverso il processo dinamico di formazione ed eliminazione dell osso. Si pensa che l Osteocalcina abbia una funzione nella formazione del tessuto osseo poichè viene prodotta dagli osteoblasti 2 necessari in questo processo. Inoltre, l Osteocalcina è direttamente influenzata dagli ormoni che regolano la produzione di calcio (calcitonina, 3 ormoni paratiroidei, vitamina D 4-6 ) richiesti nel normale processo di mineralizzazione delle ossa. L Osteocalcina è stata esclusivamente presa in considerazione come indicatore prognostico della progressione della malattia ossea. Livelli elevati di osteocalcina possono verificarsi in malattie diverse incluse l osteomalacia 7, la malattia ossea di Paget, 8 l Ipertiroidismo, 9 l Iperparatiroidismo primario e l Osteodistrofia renale. 10 Inoltre, l Osteocalcina può anche essere elevata nell osteoporosi postmenopausa a causa del turnover osseo aumentato o diminuito. Sono stati rilevati livelli soppressi di Osteocalcina nell ipoparatiroidismo 11,12 e durante la terapia a lungo termine con corticosteroidi. 13 Il dosaggio IMMULITE Osteocalcina misura solo la molecola di PTH Intatto e non riconosce le forme frammentate. 16 Principio del Metodo Dosaggio Immunometrico. Cicli d incubazione: 1? 30 minuti. Raccolta del Campione Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga per schiarire i campioni lipemici. I campioni emolizzati posson indicare il trattamento non idoneo del campione prima dell arrivo al laboratorio; per questo motivo, i risultati devono essere interpretati con prudenza. Effettuare prelievo di sangue. 14 (evitando l emolisi) in provette ghiacciate ed eparinizzate, annotando il momento del prelievo. Le provette devono essere immerse in un bagnetto ghiacciato subito dopo il prelievo. Separare il plasma dalle cellule attraverso centrifugazione in una centrifuga refrigerata, quindi aliquotare e congelare immediatamente le provette di plastica. Volume richiesto: 25 µl di plasma eparinizzato. (Il porta campioni deve contenere almeno 100 µl più del volume totale richiesto). Conservazione: 2 ore 2 8 C o 30 giorni a 20 C. Avvertenze e Precauzioni Ad uso in vitro soltanto. Reagenti: Conservare a 2 8 C. Scartare in conformità alle leggi applicabili. Seguire le precauzioni generali e manipolare tutti i componenti come se fossero potenzialmente infetti. I materiali derivati dal sangue umano sono stati testati con esito negativo per la sifilide, gli anticorpi anti-hiv 1 e 2, l'antigene di Superficie dell'epatite B e gli anticorpi Anti-Epatite C. E' stata aggiunta Sodio Azide a concentrazioni inferiori a 0,1 g/dl come conservante. Al momento dell'eliminazione, irrorare con molta acqua per evitare la formazione di azidi 16 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

17 metalliche potenzialmente esplosive nelle tubature di piombo e di rame. Sottostrato chemiluminescente: Evitare la contaminazione e l esposizione alla luce del sole diretta. (Vedere l inserimento). Acqua: Utilizzare acqua distillata o deionizzata. Materiali Forniti I componenti sono un gruppo accoppiato. Le etichette del codice a barra sono necessarie per la prova. Test Unit Osteocalcina (LOC1) Ogni unità con codice a barra contiene una sferetta coattata con un anticorpo monoclonale murino anti-osteocalcina con conservanti. Stabile a 2 8 C fino alla data di scadenza. LKOC1: 100 unità. Le buste delle unità di prova devono essere a temperatura ambientale prima di aprire. Aprire tagliando lungo il bordo superiore, lasciando intatto la chiusura ermetica. Risigillare le buste per proteggere contro umidità. Porta Reagente Osteocalcina (LOC2) Con codice a barre. 6,5 ml di fosfatasi alcalina (intestino di vitello) coniugata con un anticorpo policlonale di coniglio antiosteocalcina, con conservanti. Conservare chiuso nel frigorifero: stabile a 2 8 C fino alla data di scadenza. Si consiglia di utilizzare il prodotto entro 30 giorni dall apertura se conservato nella maniera indicata. LKOC1: 1 cuneo. Aggiustatori Osteocalcina (LOCL, LOCH) Due fiale (bassa ed alta) di Osteocalcina liofilizzato in una matrice di proteina/tampone, con conservanti. Ricostituire ogni flacone con 2,0 ml di acqua distillata o deionizzata, collocando i Calibratori nel ghiaccio immediatamente dopo aver effettuato la ricostituzione. Utilizzare pipette volumetriche e mescolare delicatamente in agitazione intermittente fino a che il materiale liofilo sia completamente dissolto. Aliquotare e congelare. Stabile a 20 C per 30 giorni dopo la ricostituzione. E importante mantenere i calibratori refrigerati durante l intero processo. LKOC1: 1 set. Componenti del kit forniti separatamente LSUBX: Substrato Chemiluminescente LPWS2: Tampone di lavaggio dell Ago LKPM: Kit di Pulizia dell'ago LCHx-y: Tubi per porta campioni (con codice a barre) LSCP: Porta campioni (monouso) LSCC: Coperchi per porta campioni (opzionali) LOCCM : Controllo a due livelli contenente osteocalcina (su base proteica). Materiali richiesti Pipette per la dispensazione dei campioni; acqua distillata o deionizzata; controlli. Procedimento per l esecuzione della prova Attenzione: per avere prestazioni ottimali, è importante effettuare le procedure di manutenzione di routine cosiccome definito nel Manuale dell'operatore dell'immulite. Vedere il manuale dell operatore IMMULITE per: la preparazione, la messa a punto, la regolazione, la prova ed i procedimenti per il controllo della qualità. Controllate ogni test unit verificando la presenza della sferetta prima di caricarla sullo strumento. Intervallo di Calibrazione Consigliato: 2 settimane. Controllo di Qualità: Utilizzare controlli o pool di sieri con almeno due livelli (alto e basso) di osteocalcina. Valori Attesi E stato effettuato uno studio sui range di riferimento per l Osteocalcina IMMULITE su 40 pazienti adulti apparentemente in buona salute ottenendo un range di riferimento centrale del 95% di: 3,1 13,7 ng/ml Detti valori dovrebbero essere considerati solo come suggerimento. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire i propri range di riferimento. IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 17

18 Limiti Gli anticorpi eterofili presenti nel siero umano possono reagire con le immunoglobuline presenti nelle componenti del dosaggio provocando un'interferenza con i dosaggi in vitro. [Vedi Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamente esposti agli animali o a prodotti derivati da siero di animali possono presentare questo tipo di interferenza causa potenziale di risultati anomali. Questi reagenti sono stati formulati per minimizzare il rischio di interferenze, tuttavia, possono verificarsi interazioni potenziali tra sieri rari e componenti del test. A scopo diagnostico, i risultati ottenuti da questo dosaggio devono sempre essere utilizzati unitamente all'esame clinico, all'anamnesi del paziente e ad altre indagini di laboratorio. Dati sulle prestazioni Vedere le tabelle e le grafiche per i dati rappresentativi delle prestazioni della prova. I risultati sono espressi in ng/ml. (Se non è notato altrimenti, tutti i risultati sono stati generati nei campioni di plasma eparinizzato.) Range di calibrazione: Fino a 100 ng/ml Sensibilità analitica: 0,1 ng/ml Effetto Gancio per Dosi Elevate: Nessuno fino a ng/ml. Precisione: Sono stati dosati campioni in doppio in 20 giorni, due sedute al giorno, per un totale di 40 sedute ed 80 replicati. (Vedi la Tabella Precision.) Linearità: Sono stati dosati campioni in varie forme diluite. (Vedi la Tabella "Linearity" per dati rappresentantivi.) Recupero: Sono stati dosati campioni 1:19 ai quali sono state aggiunte tre soluzioni di osteocalcina (60, 260 e ng/ml). (Vedi la Tabella "Recovery" per dati rappresentantivi.) Specificità: Il dosaggio è estremamente specifico per l Osteocalcina intatto 16 (Vedi la Tabella "Specificity".) Bilirubina: La presenza di bilirubina in concentrazioni fino a 200 mg/l non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Emolisi: La presenza di emoglobina in concentrazioni fino a 381 mg/dl non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Lipemia: La presenza di trigliceridi in concentrazioni fino a mg/dl non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Tipo di Campione Alternativo: Per determinare l'effetto di campioni alternativi, è stato prelevato del sangue da 28 volontari in provette semplici, eparinizzate, e EDTA. Ad ugual volumi di campioni misti sono state aggiunte varie concentrazioni di Osteocalcina per ottenere valori lungo l'intero range di calibrazione del dosaggio e quindi dosati con il kit IMMULITE Osteocalcina. (Siero) = 0,98 (Eparina) + 0,35 ng/ml r = 0,992 (EDTA) = 0,94 (Eparina) + 0,94 ng/ml r = 0,990 Valore medio: 19,45 ng/ml (Eparina) 19,38 ng/ml (Siero) 19,31 ng/ml (EDTA) Confronto di Metodi: Il dosaggio è stato comparato ad un dosaggio immunoradiometrico disponibile in commercio (Kit A) su 74 campioni di siero e plasma (pazienti e spiked). (Range di concentrazione: da 1,5 fino a 56 ng/ml. Vedi grafico.) Con regressione lineare: (IML) = 1,2 (Kit A) 0,38 ng/ml r = 0,990 Valore medio: 19 ng/ml (IMMULITE) 16 ng/ml (Kit A) Assistenza Tecnica All'estero: Si prega di contattare il proprio Distributore DPC Nazionale. Il sistema di qualità della Diagnostic Products Corporation è certificato secondo le Norme ISO 9001:1994. Português Osteocalcina Utilização: Doseamento quantitativo do osteocalcina em plasma heparinizado, em conjunto com o analisador IMMULITE, 18 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )

19 como ajuda na monitorização do metabolismo ósseo e mineral. Números de catálogo: LKOC1 (100 testes) Código do teste: OST. Cor: Cinzento escuro Sumário e explicação do teste A osteocalcina é uma proteína dependente da vitamina K com uma massa molecular de aproximadamente daltons. A proteína está definida como proteína GLA (BGP) óssea devido aos resíduos 3 gama do ácido carboxyglutamico (GLA) na sua estrutura primária,envolvida na ligação do cálcio e hydroxyapatite. 1 A osteocalcina é uma das proteínas não colagénias mais abundantes do osso, constituindo até 3% da proteína total do osso. O tecido ósseo é perpetuado através de um processo dinâmico de formação e eliminação óssea. Pensa-se que a Osteocalcina actua na formação do tecido ósseo porque é produzida pelos osteoblastos, 2 células necessárias neste processo.a osteocalcina também é directamente influenciada pelas hormonas reguladoras do cálcio (calcitonina, 3 paratorhormona, vitamina D 4-6 ) necessárias na normal mineralização óssea. A osteocalcina tem sido extensivamente discutida como indicador prognóstico da progressão da doença óssea. Níveis elevados de Osteocalcina podem ocorrer em diferentes doenças incluindo osteomalacia, 7 doença de Paget do osso, 8 hipertiroidismo, hiperparatiroidismo primário 9 e osteodistrofia renal. 10 Para além disso níveis elevados de osteocalcina podem ocorrer na osteoporose postmenopausa devido ao aumento ou diminuição da formação óssea. Decréscimo nos níveis de osteocalcina têm sido referidos no hiperparatiroidismo 11,12 e durante a terapia de longa duração com corticosteroides. 13 O ensaio da osteocalcina IMMULITE doseia somente a molecula intacta da osteocalcina não detectando o fragmento. 16 Princípio do Procedimento Doseamento imunométrico. Ciclos de Incubação: 1? 30 minutos. Colheita Recomenda-se o uso de uma ultra centrífuga para clarear amostras lipémicas. Amostras hemolisadas podem indicar tratamento incorrecto de uma amostra antes do envio para o laboratório; portanto os resultados devem ser interpretados com cuidado. Colha o sangue por venopunção 14 (evitando hemólise) para tubos heparinizados gelados, anotando oa hora de colheita. Os tubos devem ser imersos em banho de gelo a seguir à colheita. Separar o plasma das células por centrifugação numa centrifuga refrigerada e aliquote e congele imediatamente em tubos de plástico. Volume de amostra: 25 µl de plasma heparinizado. (Cuvete de amostra deve conter um mínimo de 100 µl a mais que o volume total exigido.) Estabilidade: 2 horas a 2 8 C, ou 30 dias a 20?C. Precauções Apenas para uso in vitro. Reagentes: Manter a 2 8 C. Elimine de acordo com as normas aplicadas. Manipule com as devidas precauções todos os materiais capazes de transmitir doenças infecciosas. As matérias primas obtidas de soro humano foram testadas, dando resultados negativos para a sífilis, para os anticorpos do vírus da imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2; para o antigénio de superfície da hepatite B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus da hepatite C. Azida de sódio, com concentrações menores que 0,1 g/dl, foi adicionada a certos componentes como conservante. Ao eliminar, dilua com grandes volumes de água para evitar a acumulação de azidas metálicas explosivas em canalizações de chumbo e cobre. Substrato quimioluminescente: Evite contaminação e exposição à luz directa (ver bula do substrato). Água: Use água destilada ou deionizada. IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, ) 19

20 Materiais fornecidos Os componentes formam um conjunto uno e indivisível. Os códigos de barras no interior das caixas são necessários para o ensaio. Unidades de Teste de Osteocalcina (LOC1) Cada unidade identificada com código de barras contém uma pérola revestida com anticorpo monoclonal murino antiosteocalcina, com conservante. Estável até a data de validade a 2 8 C. LKOC1: 100 unidades. Antes de abrir as saquetas com Unidades de Teste, deixe que estas atinjam a temperatura ambiente. Corte as saquetas pela borda superior, mantendo o fecho intacto. Feche novamente as saquetas para proteger contra a humidade. Embalagem de reagentes de Osteocalcina (LOC2) Com código de barras. Contém 6,5 ml defosfatase alcalina (de intestino de vitela) conjugada a anticorpo policlonal de coelho anti-osteocalcina com conservante. Armazene tapado e refrigerado: Estável até à data de validade a 2 8 C. Recomenda-se a utilização até 30 dias após aberto quando armazenado de acordo com as indicações. LKOC1: 1 embalagem. Ajustes Osteocalcina (LOCL, LOCH) Dois fracos (nível alto e baixo) de osteocalcina liofilizada numa matriz de soro não humano, proteica e tamponizada, com conservante. Reconstitua cada frasco com 2,0 ml de água destilada ou desionizada,colocando os ajustes imediatamente no gelo. Use pipetas volumétricas e agite suavemente até que o material liofilizado se dissolva completamente. Aliquote e congele. Estável a 20 C por 30 dias após reconstituição. È importante manter os ajustes gelados durante este processo. LKOC1: 1 conjunto. Componentes do kit fornecidos separadamente LSUBX: Substrato quimiolumnescente LPWS2: Solução de lavagem LKPM: Kit de limpeza do pipetador LCHx-y: Suportes de cuvetes de amostra (com código de barras) LSCP: Cuvetes de amostra (descartáveis) LSCC: Tampa de cuvetes de amostra (opcional) LOCCM : Control com dois níveis contendo osteocalcina em base proteica. Também necessário : Pipetas de transferência de amostra; água destilada ou desionizada; controlos. Procedimento de doseamento Têr em atenção que para obter um desempenho óptimo, é importante efectuar todos os procedimentos de manutenção de rotina conforme definido no Manual de Operador do IMMULITE. Consulte o Manual do Operador de IMMULITE para para instruções sobre preparação, ajuste, doseamento e procedimentos de controlo de qualidade. Confirme a presença da esfera em cada Unidade de Teste antes de a colocar no sistema. Intervalo entre ajustes aconselhável: 2 semanas. Amostras de controlo de qualidade: utilize controlos ou "pools" com, pelo menos, dois níveis (alto e baixo) de osteocalcina. Valores de Referência Um estudo de referência para a Osteocalcina IMMULITE foi efectuado em 40 adultos aparentemente saudáveis obtendo-se valores em 95% de: 3,1 13,7 ng/ml. Estes valores devem ser considerados apenas como directrizes. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores. Limitações Os anticorpos heterófilicos no soro humano podem reagir com as imunoglobulinas presentes no ensaio, causando interferência com os imunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Amostras de doentes expostas em rotina a produtos ou soros de animais podem demonstrar este tipo de interferência, potencial causador de 20 IMMULITE Osteocalcin (PILKOC-6, )