EL BANCO DE SANGRE Y EL TRASPLANTE DE CELULAS HEMATOPOYETICAS. Dr David Gómez Almaguer Hematología, HU, UANL, Monterrey, México

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1 EL BANCO DE SANGRE Y EL TRASPLANTE DE CELULAS HEMATOPOYETICAS Dr David Gómez Almaguer Hematología, HU, UANL, Monterrey, México

2 PARA INICIAR UN PROGRAMA DE TRASPLANTES SE REQUIERE CONTAR CON EXPERIENCIA Y CAPACIDAD EN AFERESIS LA CUANTIFICACION DE CELULAS HEMATOPOYETICAS (CD34) ES INDISPENSABLE Y PARA ELLO ES NECESARIO CITOMETRIA DE FLUJO Y PERSONAL CAPACITADO

3 ES LA CELULA MADRE, TALLO, PROGENITORA CELULA HEMATOPOYETICA INDISPENSABLE EN EL TRASPLANTE SE ENCUENTRA EN MEDULA OSEA Y PUEDE SER ESTIMULADA PARA DIVIDIRSE Y CIRCULAR EN SANGRE PERIFERICA EN GRANDES CANTIDADES

4 OBTENER CELULAS CD34 ELIMINAR AL MAXIMO CELULAS DEL ENFERMO CON QUIMIOTERAPIA INFUSION DE CELULAS CD34 POR VENA RECUPERACION HEMATOLOGICA CURACION DE LA ENFERMEDAD

5 Obtención: Células Madre de MO

6 Proceso de obtención:

7 Menos Inmunogenicas Cada vez más creciente su uso. Criopreservadas en bancos especializados

8

9 Otras fuentes de CM hematopoyéticas?: Sangre venosa: actualmente la más usada en Trasplantes Se usan Factores estimulante

10 Las diferentes densidades de las células facilitan la separación

11

12 Si el color es muy claro incrementar la velocidad de la bomba de plasma Si el color es muy oscuro disminuir la velocidad de la bomba de plasma Cambios pequeños (~0.5 a 1 ml/min) cuando la interfase se establece

13

14 Donador inadecuado Control de la Interfase deficiente Bajo volumen procesado Pre-cuentas CD34 bajas

15 AFERESIS Donadores estimulados Ambulatorio Tiempo de proceso de 3 a 4 horas Volumen procesado 3 a 4 volemias

16 Movilización del paciente FEC-G 10 microgramos /Kg/día Recolectar 5º a 6º día Trasplante Alogénico 8 a 20 CD34+ / microlitro Trasplante Autólogo 10 CD34+ por microlitro

17 Se han realizado 489 recolecciones 317Autólogos 145 Alogénicos 27 Haploidénticos Unidades Criopreservadas Autólogos 65% Alogénicos 15%

18 Autólogos 69% 1 Recolección 25% 2 Recolecciones 5% Tres 1% Más de tres Alogénicos 91% 1 Recolección 9% 2 Recolecciones

19

20 332 Recolecciónes Sexo Femenino 138 Masculino 166 Edad 38 (2 años 84 años) Niños 28 Peso paciente Media 71 kg (10 kg a 124kg)

21 PROGRAMA DE MONONUCLEARES VOLEMIA 4367 ml ( ) LEUCOCITOS 22, µl ( ) MONONUCLEARES 15% ( 6.2 % a 60%) HTO 38 % (22% a 52%) TIEMPO 227 minutos (80 a 380 ) VOLUMEN 19,846 ml (4100 ml a 30,000 ml)

22 ACD Utilizado 887 ml (106 ml 1500 ml ) Volumen del producto 191 ml (18 ml a 373 ml) CD 34 µl total cosecha 1976 (1490 3,899 ) CD45 µl total cosecha 170X10 3 (67X X10 3 ) CD34 X10 6 /Kg 6.62 X 10 6 ( ) Catéter 85% Punción 15 %

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27 M2 M2 M2

28 DIAGNOSTICOS LNH 49% MM 24% LLA 9% LMA 9% Cancer 3% Esclerodermia 2% Diabetes Linfoma celulas B Depranocitisis Plasmicitoma Lupus Traumatismo craneoencefalico

29 3, 2% 3, 2% 3, 2% LLA 10, 8% 7, 5% 27, 21% LMA LNH 14, 11% 15, 11% 18, 14% Anemia Aplasica LH LGC 15, 11% 17, 13% SMD OTROS Diagnósticos Depranocitosis Anemia Arregenerativa HPN

30 135 Recolecciónes Sexo Femenino 76 Masculino 59 Edad 33 Años (1 años 69 años) Niños 20 Peso paciente Media 66 kg (14 kg a 154kg)

31 Cobe spectra V6.1 Programa de MNC Volemia 3532 ml ( ) Leucocitos 36,088 µl (24,000-80,000) Mononucleares 19% (9% a 42%) HTO 41 % (24% a 53%) Tiempo 210 minutos (111 a 379 ) Volumen 13,350 ml (5000 ml a 34,000 ml

32 ACD Utilizado 402 ml (198 ml 1500 ml ) Volumen del producto 146 ml (100 ml a 420 ml) CD 34 µl total cosecha 2816 ( ,803 ) CD45 µl total cosecha 636X10 3 (219X X10 3 ) CD34 X10 6 /Kg X 10 6 ( ) Cateter 58% Punción 42 %

33

34 Ø CELULAS MADRE (Stem Cells) Ø OBTENCIÓN Ø SEPARACION CELULAR Ø APLICACIONES CLINICAS

35 Micro perlas partículas magnéticas (magnetizables) Acopladas a anticuerpos monoclonales específicos contra moléculas de superficie Se usan para marcar la población de interés (CD34+, CD133+, CD3+, NK, etc.) Son biodegradables y no toxicas

36 Tamaño de las microperlas nm diametro Nucleo de oxido/hidroxido de hierro cubierta por una capa de dextran hidratado. Moleculas de anticuerpo por microperlas Microperlas por célula 1,000-20,000 Estabilidad de 4 8 C

37 200 veces mas pequeñas que una célula Conserva la función célular

38 Selección celular esteril Automatizada y reproducible Pureza 90-95% Eficacia 75-90%

39 Unidad de aféresis marcada para separación celular Area de separación celular (imán) Columnas de poliestireno rellenas de esferas de acero

40 Unidad de células poterior a separación celular

41 Células Madre de MO Identificación fenotípica de CM hematopoyética: Marcadores membrana: CD34+, CD133+ ( Algunas CD34 negativas tienen características de CM) YOLANDA GUAJARDO GAMEZ.001 YOLANDA GUAJARDO GAMEZ.001 R1 R6 R2 R CD45 FITC CD34 PE Determinación de CD34 por citometría de flujo.

42

43

44 Ø CELULAS MADRE (Stem Cells) Ø OBTENCIÓN Ø SEPARACION CELULAR Ø APLICACIONES CLINICAS

45 Las células progenitoras hematopoyéticas tienen la capacidad de diferenciarse a células endoteliales. Las células progenitoras endoteliales pueden migrar y contribuir en la neovascularización en tejido lesionado. El uso de factor estimulante de colonias de granulocitos, filgrastim (G-CSF), aumenta el número de células progenitoras y las moviliza hacia la sangre periférica.

46 LA RUTA DE LA STEM CELL

47 Lesión CM endógenas (células ovales) Hígado Piel Lesión Hepatocitos Lesión CM hematopoyéticas CM endógenas (células de cripta) Intestino

48 Vías de Implante de las Células Madre Vía Intracoronaria Vía Endovenosa Vía Intramiocardica

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51 Admnistración de células progenitoras vía IM en zona afectada (músculos gemelos).

52 Pretrasplante Postrasplante

53

54 ACV Diabetes Alzheimer Retinitis pigmentosa Enfermedad Parkinson Esclerosis múltiple Trastorno medular traumático y no traumático

55 EL BANCO DE SANGRE ES EL EJE DE UN PROGRAMA DE TRASPLANTES A PARTIR DE AFERESIS PARTICIPA EN LA PROCURACION DE CELULAS TALLO Y EN LA TERAPIA DE APOYO LA CRIOPRESERVACION ES OTRA AREA DE APOYO PARA EL CAMPO DEL TRASPLANTE

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