Daniela Nieves Hernández Unidad de Metrología Soluciones Integrales y Metrología Aplicada

Transcripción

1 Daniela Nieves Hernández Unidad de Metrología Soluciones Integrales y Metrología Aplicada

2 Tipos de Micropipetas Micropipeta de Pistón con Cojín de Aire: Micropipeta de desplazamiento positivo:

3 Micropipetas con Cojín de Aire Este tipo de micropipetas se utilizan comúnmente para fluidos con densidades parecidas o muy próximas a la del agua. Antes de su uso la puntas deben ser pre humedecidas por lo menos tres veces la primera punta y una vez las siguientes y las puntas deben ser desechadas por cada muestra que manejen.

4 MICROPIPETA DE PISTON CON COJIN DE AIRE

5 Fuente de las imágenes: Simposio de metrología VARIACIÓN DE LOS RESULTADOS DE MEDICIÓN DE VOLUMEN EN LAS PIPETAS DE PISTÓN RESPECTO DE LAS CONDICIONES DE USO DE LA PUNTA DESECHABLE Y LA HUMEDAD DEL AMBIENTE

6 MICROPIPETAS DE DESPLAZAMIENTO POSITIVO Este tipo de micropipetas son utilizadas principalmente para densidades altas o para líquidos volátiles Pistón Muestra Utilizan puntas capilares con pistón interno y puntas desechables y evitan en su Capilar totalidad la contaminación del instrumento así como la contaminación cruzada. Son altamente repetibles para fluidos de difícil manejo y de alta viscosidad. Aceites, liquidos volatiles, Sangre, etc.

7 FACTORES QUE IMPACTAN EN EL PIPETEO Ciclo de pipeteo Especificaciones Técnicas básicas de pipeteo Para minimizar el impacto de los errores. Para evitar la contaminación del instrumento.

8 CICLO DE PIPETEO DIRECTO No incluye inserción de punta

9 ESPECIFICACIONES TÍPICAS DE LAS MICROPIPETAS Exactitud: ± 1% del valor nominal Precisión: 0.25 % al 0.33% No es preciso Ni exacto Preciso Pero no exacto Exacto y preciso

10 TÉCNICAS DE PIPETEO: Factores críticos para un buen pipeteo Optimización del rango de la micropipeta. Ángulo de inmersión de la punta. Profundidad a cual se sumerge la punta Tiempo de inmersión. Pre-enjuague de la punta. Técnica de dispensación Velocidad de aspiración Efectos del cansancio de la mano.

11 OPTIMIZACIÓN DEL RANGO DE LA MICROPIPETA Rango Típico: 10 al 100% del valor nominal del instrumento. Utilizar el instrumento al 10% de su valor nominal requiere excelentes técnicas de pipeteo Optimización del Rango. Se debe usar típicamente el instrumento en el 30% al 100% del volumen nominal. No depende en mayor parte de la técnica de pipeteo. Permite una mayor repetibilidad en las mediciones.

12 ÁNGULO DE INMERSIÓN DE LA PUNTA El correcto ángulo de toma de muestra mejora la exactitud en un 0,5% INCORRECTO CORRECTO

13 PROFUNDIDAD A LA CUAL SE SUMERGE LA PUNTA Sumergir la punta a la profundidad adecuada mejora la exactitud en un 5% Profundidad Volumen de pipeteo Distancia de inmersión 2 a 10 µl 1 mm 20 a 100 µl 2-3 mm 200 a 1000 µl 3-6 mm 5000 µl a 10 ml 6-10 mm

14 TIEMPO DE INMERSIÓN Mantener la punta por lo menos un segundo dentro de la muestra (para densidades próximas al agua). Introducir y retirar lentamente la punta de la muestra. Esto es de mayor cuidado en pipetas de mayor volumen (para volúmenes altos y densidades altas esperar alrededor de 5 segundos o más).

15 PRE- ENJUAGUE DE LA PUNTA O PRE-HUMEDECIMIENTO Pre humedecer la punta por lo menos tres veces antes de pipetear con la misma muestra. Aspire la muestra y depositela Beneficios: Volumen Normalizado (%) No. de Pre-enjuagues 10μ 200μ 1000 μ P-10 P-200 P-1000

16 RITMO DE PIPETEO: Mantener un suave y controlado ritmo de pipeteo. Un pipeteo rápido provoca: Manchar las paredes del porta puntas así como el pistón con la muestra y por lo tanto contaminar la micropipeta, además de dañar los sellos del instrumento. Formar aerosoles. Introducir contaminación cruzada. Un pipeteo consistente mejora la exactitud en 5%

17 TRES TÉCNICAS DE DISPENSACIÓN: A lo largo de la pared Sobre la muestra y el contenedor Directamente en la muestra

18 EFECTOS DEL CANSANCIO Normalized volume P-1000 (PVDF Handle) Leading Brand 1000uL (Polypropylene Handle) 00:00 02:32 04:57 07:34 10:06 12:43 15:19 Elapsed time (mins.) 17:49 20:14 Un uso prolongado del instrumento sin cambio de usuario provoca una disminución en la consistencia de la normalización del volumen, introduce errores superiores al 0,5% del volumen nominal.

19 RESUMEN DE LA TÉCNICA BÁSICA DE PIPETEO Optimización del rango de la micropipeta. Ángulo de inmersión de la punta. Profundidad a cual se sumerge la punta Tiempo de inmersión (Para macro volumen ó densidades altas) Pre-enjuague de la punta. Velocidad de aspiración (Lenta y consistente). Técnica de dispensación. Efectos del cansancio de la mano.

20 ERRORES EN EL PIPETEO Influencia del error Pequeño Medio Grande Error tipico % Arriba del 0,5% Arriba del 1,0% Arriba del 5,0% De no considerar las técnicas siguientes: pre- humedecer las puntas Cansancio al pipetear Optimización del rango del instrumento Técnica de dispensación Consistencia Angulo de inmersión de la punta Profundidad y tiempo de inmersión de la punta Velocidad de aspiración.

21 ACCIONES BÁSICAS PARA UN BUEN PIPETEO Colocar las punta de forma adecuada Correcto Incorrecto

22 Protección personal al pipetear Siempre use bata Use guantes Use lentes de protección Use cubre boca Mantenga en orden su área de trabajo Trabaje siempre con escudos para radioactividad con material de esta naturaleza No toque las puntas utilizadas Utilice puntas y puntas capilares de buena calidad y nuevas.

23 Tipos de contaminación y como prevenirla. De la micropipeta a la muestra: Causa: Puntas o pipetas contaminadas siempre contaminan la muestra. Prevención: Use puntas esterilizadas y nuevas, así como esterilizar las partes de la micropipeta que sean posible de someter a este proceso ( por lo general siempre se puede meter el porta puntas y expulsor).

24 Tipos de contaminación y como prevenirla. De la muestra a la pipeta: Causa: La contaminación de la micropipeta sucede cuando se esta utilizando una mala técnica de pipeteo al formar aerosoles o la muestra es altamente volátil lo cual contamina internamente el instrumento. Se almacena inadecuado. Prevención: Utilice puntas con filtro, agite de forma vigorosa su instrumento, mejore la técnica de pipeteo y siempre! Almacene su instrumento de forma vertical.

25 Punta Estándar Punta con Filtro Punta Capilar Espacio Protegido Aerosol Barrera contra aerosol Riesgo de Contaminación Por Aerosol Sin riesgo de Contaminación Por Aerosol

26 Tipos de contaminación y como prevenirla. De muestra a muestra: La contaminación de muestra a muestra siempre sucede cuando se pipetea de diferentes muestras utilizando la misma punta, siempre en las puntas quedan rastros de la muestra pipeteada. Prevención: Siempre cambie la punta por cada tipo de muestra.

27 Rastros de la Muestra A Contaminación de la Muestra B con la Muestra A

28 FIN