UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL CÓRDOBA (IRAC)

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL CÓRDOBA (IRAC) EFECTO DEL MOMENTO DE APLICACIÓN DEL BENZOATO DE ESTRADIOL COMO INDUCTOR DE LA OVULACIÓN EN UN PROTOCOLO DE IATF SOBRE LA TASA DE PREÑEZ EN VACAS DE CARNE. JUAN SALVADOR ANDRADA Para optar al Grado Académico de Especialista en Reproducción Bovina. Córdoba 2015

2 INDICE 1. RESUMEN INTRODUCCIÓN HIPÓTESIS DE TRABAJO OBJETIVO GENERAL OBJETIVOS ESPECÍFICOS MATERIALES Y MÉTODOS ANIMALES Y LUGAR DE TRABAJO TRATAMIENTOS ANÁLISIS DE DATOS RESULTADOS DISCUSIÓN CONCLUSIONES BIBLIOGRAFÍA..13

3 1. RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo comparar las tasas de preñez con la aplicación de Benzoato de Estradiol (EB) a las 24 y 32 horas de retirado el dispositivo intravaginal y del Cipionato de Estradiol (ECP) al momento de retiro del dispositivo. Para ello, se utilizaron 200 vacas de carne con cría con 60 días postparto y una condición corporal (CC) mínima de 2,5 (escala 1:5). Previo al inicio del tratamiento todas las vacas fueron revisadas mediante ultrasonografía (Mindray DP30 Vet) para determinar el porcentaje de ciclicidad. Luego las mismas fueron bloqueadas para su posterior análisis. En el Día 0, todas las vacas recibieron un dispositivo impregnado con progesterona DIB (0,5 gr, Syntex, Argentina) junto con 2 mg de EB (Gonadiol, Syntex ). El Día 8 recibieron una dosis de 500 µg de prostaglandina (PGF, Ciclase, Syntex ) junto con el retiro del dispositivo intravaginal. Las vacas del Grupo ECP recibieron en el Día 8 (junto con la PGF) 1 mg de ECP (Cipiosyn, Syntex ). Las del grupo EB 24, recibieron una dosis de 1 mg de EB 24 horas pos retiro del DIB, mientras que las del Grupo EB 32, recibieron una dosis de 1 mg de EB 32 horas pos retiro del DIB. Todas las vacas fueron inseminadas a tiempo fijo entre las 52 y 56 horas de retirado el DIB. En el mismo momento de la IATF se realizó ecografía para medir el tamaño del folículo preovulatorio. Treinta días después junto con el diagnóstico de gestación se midió el tamaño del cuerpo lúteo mediante ultrasonografía. Los datos fueron evaluados estadísticamente por el Software, Infostat (Universidad Nacional de Córdoba). Palabras clave: Inseminación artificial a tiempo fijo EB ECP - Vacas de carne.

4 2. INTRODUCCIÓN La sincronización de la ovulación en el ganado tiene como objetivo facilitar los programas de inseminación artificial. Por otra parte, la simplicidad y eficiencia en los tratamientos son características esenciales para aplicar esta técnica (Johnson y Jones, 2005). La mayoría de los tratamientos con los que se cuenta en la actualidad son eficientes, obteniéndose porcentajes de preñez de alrededor del 50 % en el caso de los rodeos de carne (Cutaia, 2006). Los factores que afectan los resultados que se pueden obtener luego de implementar una IATF son la condición corporal, nutrición, edad, número de partos, estrés, pérdida de dispositivos y calidad seminal. Progestágenos más estradiol se han utilizado con éxito para inducir y sincronizar celo y ovulación en el ganado. Una de las ventajas de la utilización de progestágenos para el control del estro es la inducción a la ciclicidad en vacas en anestro (Fike et al., 1997). Una desventaja de la utilización de progestágenos es producir la ovulación de ovocitos subfértiles al crear folículos persistentes (Ahmad et al., 1995; Kinder et al., 1996). Sin embargo, los folículos persistentes se pueden evitar mediante la inducción de la atresia del folículo dominante. La combinación de estos produce una regresión del folículo dominante presente en este momento a causa de la disminución de las concentraciones de FSH y LH circulante. Existen distintos esteres de estradiol como lo son el estradiol 17 β, benzoato, valerato o cipionato de estradiol. El ECP (Colazzo et al., 2003) al tener un vida media más larga produce un dispersión en el día de la emergencia de la nueva onda. El EB (Sa Filho et al., 2004) presenta una vida media más corta induciendo eficazmente la emergencia de la nueva onda folicular alrededor de los 3 a 4 días de comenzado el tratamiento tanto en Bos Taurus como Bos Indicus (Bo et al., 1995; Sa Filho et al., 2005) Esto se logra cuando se combina al progestágeno con una inyección intramuscular de estradiol (Burke et al., 1998). En los protocolos de sincronización, el estradiol es normalmente inyectado en el momento de la inserción de un dispositivo de progesterona (Martínez et al., 2000., 2005; Mapletoft et

5 al., 2003), que es eliminado 7 u 8 días más tarde, en el momento de la administración de prostaglandina. En la actualidad el EB se aplica al final del tratamiento, 24 horas de retirado el dispositivo intravaginal para sincronizar la ovulación (Baruselli et al., 2001; Bo et al., 2002) en donde las vacas son inseminadas en un intervalo de 52 a 56 horas de retirado el dispositivo sin afectar las tasas de concepción. Recientemente, diversos estudios han demostrado que la utilización de cipionato de estradiol (ECP) presenta resultados similares que el EB para la sincronización de la ovulación, con la diferencia de que el ECP se aplica en el mismo momento en que se retira el dispositivo, facilitando el manejo, ya que evitamos un encierre en los animales (Colazo et al., 2003; Marquez et al., 2004; Penteado et al., 2005; Ayres et al., 2006). Diferentes trabajos han demostrado que existe una gran correlación entre el tamaño del folículo preovulatorio y la tasa de preñez debido a que mientras más grande es el folículo preovulatorio más grande va a ser el cuerpo lúteo que se va a formar, por lo tanto habrá mayores niveles plasmáticos de progesterona (Kastelic et al., 1990; Battocchio et al., 1999 ; Son et al., 1995). 2.1 HIPOTESIS El retraso de la aplicación del benzoato de estradiol por 8 horas resultaría en un aumento del tamaño del folículo preovulatorio y consecuentemente del tamaño del cuerpo lúteo y un aumento en las tasas de preñez en vacas de carne en IATF. 2.2 OBJETIVO GENERAL El objetivo de este trabajo es evaluar el efecto del retraso de la aplicación del Benzoato de Estradiol en el tamaño del folículo preovulatorio y los porcentajes de preñez en vacas de carne inseminadas a tiempo fijo.

6 2.3 OBJETIVOS ESPECÍFICOS -Evaluar el tamaño del folículo preovulatorio al momento de la inseminación artificial. -Evaluar el tamaño de cuerpo lúteo al momento del diagnóstico de gestación. -Mejorar la tasa de preñez con el retraso de la aplicación del benzoato. -Evaluar una alternativa de manejo con respecto a la aplicación del benzoato. 3. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1 ANIMALES Y LUGAR DE TRABAJO El estudio realizado se llevó a cabo en el establecimiento Don Isidoro ubicado en la provincia de la Rioja-Argentina situada en el centro-oeste del país. El mismo cuenta con una superficie de 3000 hectáreas dividida en potreros para rotación del rodeo; la pastura con la que se maneja el rodeo es principalmente el buffel grass. El clima en la mayor parte del territorio es semiárido continental y árido de montaña, con escasa humedad, debido a que los vientos húmedos provienen del anticiclón del atlántico sur y cuando llegan a esta provincia lo hacen con poca humedad y fuerte radiación solar. En las zonas bajas los veranos son muy calurosos y los inviernos son cortos, con moderadas temperaturas. Las precipitaciones no superan los 400 mm anuales, con excepción de algunos parajes montañosos, donde son algo más importantes. 3.2 DETERMINACIONES O TRATAMIENTOS Para el estudio se utilizaron 200 vacas de carne con cría con 60 días pos parto. Las vacas fueron seleccionadas por ciclicidad (presencia de un cuerpo lúteo) o folículo > a 10

7 mm en sus ovarios por mediante ultrasonografía (Mindray DP30 Vet) y una condición corporal (CC) mínima de 2,5. Luego las mismas fueron divididas aleatoriamente en tres grupos homogéneos para su posterior análisis. En el Día 0, todas las vacas recibieron un dispositivo impregnado con progesterona DIB (0,5 gr, Syntex, Argentina) junto con 2 mg de EB (Gonadiol, Syntex ). El Día 8 recibieron una dosis de 500 µg de prostaglandina (PGF, Ciclase, Syntex ) junto con el retiro del dispositivo intravaginal. Las vacas del Grupo ECP recibieron en el Día 8 (junto con la PGF) 1 mg de ECP (Cipiosyn, Syntex ). Figura 1. Protocolo de sincronización utilizando ECP (cipionato de estradiol) al momento de retiro de dispositivo intravaginal. Las del grupo EB 24, recibieron una dosis de 1 mg de EB 24 horas pos retiro del DIB. Figura 2. Protocolo de sincronización utilizando EB (benzoato de estradiol) a las 24h de retirado el dispositivo intravaginal.

8 Las del Grupo EB 32, recibieron una dosis de 1 mg de EB 32 horas pos retiro del DIB. Figura 3. Protocolo de sincronización utilizando EB (benzoato de estradiol) a las 32h de retirado el dispositivo intravaginal. Todas las vacas fueron inseminadas a tiempo fijo entre las 52 y 56 horas de retirado el DIB. En el mismo momento de la IATF se realizó ecografía para medir el tamaño del folículo preovulatorio. Treinta días después junto con el diagnóstico de gestación se midió el tamaño del cuerpo lúteo mediante ultrasonografía. El trabajo fue realizado en dos réplicas de 100 animales utilizando en la primera aquellas que se encontraban aptas al momento de la revisación y en la segunda las que salieron vacías a la primera inseminación y las que ya estaban aptas para ser utilizadas. Los datos fueron evaluados estadísticamente por el Software, Infostat (Universidad Nacional de Córdoba) 3.3 ANÁLISIS DE DATOS Los datos fueron analizados mediante Chi-cuadrado en caso de preñez y para el tamaño de cuerpo lúteo como de folículo preovulatorio mediante análisis de la varianza utilizando el programa Infostat (Universidad Nacional de Córdoba) 4. RESULTADOS

9 Primer Replica Se utilizaron 87 vacas quedando 13 sin utilizar por no reunir las condiciones establecidas. Los tamaños medios observados de folículo dominante (TFD) al momento de la inseminación fueron de 12,44 mm (EB 32 h), 11,59 mm (EB 24 h) y 11,71 mm (ECP 0h). Los tamaños medios observados de cuerpo lúteo (TCL) al momento del diagnóstico fueron de 20,53 mm (EB 32 h); 18,73 mm (EB 24 h) y 18,77mm (ECP 0 h). En el análisis estadístico no se encontraron diferencias significativas entre los tres grupos (p > 0,05). Tabla 1. Promedio de tamaño de folículo dominante (TFD) al momento de la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) y del tamaño de cuerpo luteo (TCL) al diagnostico de gestación 30 días pos IATF. GRUPOS N TFD N TCL Benzoato de estradiol 32 hs 25 12,44 ± 0, ,53 ± 0,7 Benzoato de estradiol 24 hs 27 11,59 ± 0, ,73 ± 0,7 Cipionato de estradiol 0 hs 26 11,71 ± 0, ,77 ± 0,7 (p >0,05). El porcentaje de preñez obtenido en el grupo de tratamiento con EB 32 hs fue de 52 % mientras que en el de EB a las 24 h fue del 55 %. Por último en las tratadas con ECP 0h se encontró un porcentaje de preñez del 48 %. Si bien en el análisis estadístico no se encontraron diferencias significativas entre los tres grupos de estudio (p > 0,05), se pudo observar una tendencia de diferencia entre el grupo de EB 24 h y de ECP 0 h (p > 0,06) Tabla 2. Porcentajes de preñez obtenidos en vacas de carne con dos inductores de ovulación (EB y ECP) aplicados en distintos momentos. GRUPOS N PREÑADAS % PREÑEZ Benzoato de estradiol 32 hs % ab Benzoato de estradiol 24 hs % b Cipionato de estradiol 0 hs % a Los porcentajes con distinta letra tienden a diferir (p=0,0689).

10 Segunda Réplica Aquí se utilizaron 85 vientres, quedando en esta oportunidad 15 sin utilizar. Los tamaños medios de folículo dominante encontrados (TFD) al momento de la inseminación fueron de 12,62 mm (EB 32 h), 12,33 mm (EB 24 h) y 12,4 mm (ECP 0 h). Los tamaños medios observados de cuerpo lúteo (TCL) al momento del diagnóstico fueron de 17,25mm (EB 32 h); 19,05 mm (EB 24 h) y 17,36 mm (ECP 0 h). En el análisis estadístico no se encontraron diferencias significativas entre los tres grupos (p > 0,05). Tabla 3. Promedio de tamaño de folículo dominante (TFD) al momento de la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) y del tamaño de cuerpo luteo (TCL) al diagnostico de gestación 30 días pos IATF. GRUPOS N TFD N TCL Benzoato de estradiol 32 hs 21 12,62 ± 0, ,25 ± 1,0 Benzoato de estradiol 24 hs 27 12,33 ± 0, ,05± 1,1 Cipionato de estradiol 0 hs 21 12,43± 0, ,36 ± 0,8 (p >0,05). Los porcentajes de preñez obtenidos fueron en el grupo de tratamiento con EB 32 h de 46 %, en el grupo de EB 24 h fue de 69 % y por último en el grupo de ECP 48 h fue de 39 %. En el análisis estadístico no se encontraron diferencias significativas entre los tres grupos de estudio (p > 0,05), sin embargo se pudo observar diferencia significativa entre el grupo de EB 24 h y de ECP 0 h (p = 0,03). Tabla 4. Porcentajes de preñez obtenidos en vacas de carne con dos inductores de ovulación (EB y ECP) aplicados en distintos momentos. GRUPOS N PREÑADAS % PREÑEZ Benzoato de estradiol 32 hs % ab Benzoato de estradiol 24 hs % b Cipionato de estradiol 0 hs % a Los porcentajes con distinta letra tienen diferencia significativa (p=0,0343).

11 General En la sumatoria de las dos replicas se utilizaron 172 vacas encontrándose que los tamaños medios de folículo dominante (TFD) fueron al momento de la inseminación de 12,48 mm (EB 32 h); 11,98 mm (EB 24 h) y 12,03 mm (ECP 0 h). Los tamaños medios observados de cuerpo lúteo (TCL) al momento del diagnóstico fueron de 19,07 mm (EB 32 h); 18,91 mm (EB 24 h) y 18,13mm (ECP 0 h). Tabla 5. Promedio de tamaño de folículo dominante (TFD) al momento de la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) y del tamaño de cuerpo luteo (TCL) al diagnostico de gestación 30 días pos IATF. GRUPOS N TFD N TCL Benzoato de estradiol 32 hs 46 12,48 ± 0, ,07 ± 0,6 Benzoato de estradiol 24 hs 54 11,98 ± 0, ,91 ± 0,6 Cipionato de estradiol 0 hs 47 12,03 ± 0, ,13 ± 0,7 (p >0,05). Los porcentajes de preñez obtenidos fueron en el grupo de tratamiento con EB 32 h de 49 %, en el grupo de EB 24 h fue de 62 % y por último en el grupo de ECP 0 h fue de 44%. En el análisis estadístico no se encontraron diferencias significativas entre los tres grupos de estudio (p > 0,05). Se pudo observar una tendencia de diferencia entre el grupo de EB 24 h y de ECP 0 h (p > 0,06). Tabla 6. Porcentajes de preñez obtenidos en vacas de carne con dos inductores de ovulación (EB y ECP) aplicados en distintos momentos. GRUPOS N PREÑADAS % PREÑEZ Benzoato de estradiol 32 hs % ab Benzoato de estradiol 24 hs % b Cipionato de estradiol 0 hs % a Los porcentajes con distinta letra tienden a diferir (p=0,0625).

12 5. DISCUSIÓN Este ensayo tuvo como objetivo principal comparar distintos momentos de aplicación de dos sales de estradiol tanto como el cipionato y benzoato en cuanto a los tamaños de folículos, cuerpos lúteos y tasa de preñez en vacas de carne. De los 200 vientres con los cuales se pensaba realizar este estudio se tuvieron que descartar 28 por no reunir las condiciones, esto puede haber sido consecuencia de las condiciones climáticas y alimenticias en las cuales se encontraba el rodeo al momento de comenzado el ensayo dado que el mismo se realizó en la provincia de La Rioja en una época en la que se esperaba una mejor oferta forrajera, lo que no fue así. En cuanto a los protocolos usados tradicionalmente como lo son el benzoato de estradiol a las 24 h del retiro del dispositivo y el cipionato de estradiol al momento del retiro del dispositivo no se encuentran diferencias en los resultados entre ambos como lo han demostrado numerosos estudios que se han realizado a los largo de varios años. Aplicar el EB a las 32 h surge como una opción de manejo de los rodeos y de las condiciones externas (clima, mano de obra, instalaciones, etc.) que pudieran llegar a afectar la colocación a las 24 h. También el rango horario para realizar la tarea es mucho más grande, en donde se pueden programar mejor los trabajos, se pueden subdividir los lotes, y trabajar en horarios en los que el clima no afecta tanto. Otra de las opciones que se estudiaron aquí es el aumento que podría llegar a tener el folículo preovulatorio al aplicar más tarde este inductor de la ovulación y en consecuencia tener un mayor diámetro del cuerpo lúteo posterior. Habría que seguir trabajando con esta opción con un mayor número de animales para ver si continúa la igualdad de los resultados en los distintos momentos de aplicación y sobre todo si continúan las diferencias encontradas en las tasas de preñez entre el benzoato aplicado a las 24 h y el cipionato aplicado a las 0 h. 6. CONCLUSIONES En conclusión se puede decir que no hay diferencias en el tamaño del folículo preovulatorio, el tamaño del CL y las tasas de preñez entre los distintos momentos de aplicación del benzoato de estradiol (a las 24 h o a las 32 h), lo cual flexibiliza su

13 aplicación, sin afectar el resultado reproductivo. Tampoco se observan diferencias en cuanto al tamaño del folículo preovulatorio y tamaño de CL en la aplicación del cipionato de estradiol a las 0 h. Sin embargo se encontró una tendencia de diferencia en las tasas de preñez entre el benzoato aplicado a las 24 h y el cipionato a las 0 h en las dos replicas y en el análisis general. 7. BIBLIOGRAFÍA Ahmad N, Schrick FN, Butcher RL, Inskeep EK, Effect of persistent follicles on early embrionic losses in beef cows. Biol Reprod; 52: Ayres H, Torres-Junior JRS, Penteado L, Souza AH, Baruselli PS, Efeito do momento da inseminação e do tratamento com GnRH na IATF sobre a taxa de concepção de vacas de corte lactantes sincronizadas com Norgestomet e Valerato de estradiol. Acta Scienciae Veterinariae 34 p.408. Baruselli P.S.; Madureira E.H.; Marques M.O, Programas de IA a tiempo fijo en Bos indicus. Segunda Parte. Taurus. 13: Battocchio, M., Gabai, G., Mollo, A., Veronesi, M.C., Soldano, F., Bono, G., Cairoli, F, Agreement between ultrasonographic classification of the corpus luteum and plasma progesterone concentration in dairy cows. Theriogenology; 51: Bo Ga, Adams GP, Caccia M, Martinez M, Pierson RA, Mapletoft RJ. 1995b. Ovarian follicular wave emergence after treatment with progesterone and estradiol in cattle. Animal Reproduction Science; 39:

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16 Nelore (Bos indicus) tratadas com dispositivo intravaginal de progesterona. In: Anais VI Simpósio Internacional de Reproducción Animal, CD-ROM, Córdoba-Argentina. Son, C.H., Schwarzenberger, F., Arbeiter, K, Relationship between ultrasonographic assessment of the corpus luteum area and milk progesterone concentration during the estrous cycle in cows. Reprod. Dom. Anim, 30: