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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 6 : A61K 38/00 A61K 38/28 A61K 38/08 A61K 38/22 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 k Número de solicitud europea: k Fecha de presentación : k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Uso de amilina o CGRP para el tratamiento de la diabetes mellitus. k Prioridad: GB 8711 k 73 Titular/es: Amylin Pharmaceuticals, Inc Towne Centre Drive, Suite San Diego California 92121, US k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Cooper, Garth James Smith k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: García Cabrerizo, Francisco ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 ES T3 DESCRIPCION Esta invención se refiere a péptidos, a fragmentos de los mismos y a la preparación de composiciones a partir de ellos. La diabetes mellitus de tipo 1 es una enfermedad que afecta a muchas personas y se produce por la destrucción de las células B en el interior los islotes de Langerhans del páncreas. La terapia actual para la diabetes de tipo 1 es la administración parenteral de dosis de reemplazo de insulina. Es deseable que el control diabético sea tal que los niveles de glucosa en sangre se vuelvan casi normales, para evitar las complicaciones a largo plazo de la diabetes. Sin embargo, tal terapia es difícil de controlar, porque a menudo no es fácil evitar la complicación de hipoglucemia, que puede producir morbididad, coma hipoglucémico y casos poco frecuentes de lesión cerebral a largo plazo o muerte. Desde hace mucho tiempo se sabe que, por razones que no se entienden completamente, la hipoglucemia es muy frecuente y provoca efectos secundarios inquietantes de la terapia con insulina. La diabetes mellitus de tipo 2 es aproximadamente de 8 a veces más predominante que la diabetes de Tipo 1, y puede afectar a hasta un 4% de la población adulta en países occidentales. Se caracteriza por (1) una deficiencia, pero no una falta absoluta de secreción de insulina que produce hiperglucemia y, normalmente, también por (2) grados variables de resistencia a las acciones de la insulina. En esta forma de diabetes, a diferencia del Tipo 1, se mantienen células B en los islotes en números normales o sólo ligeramente reducidos. En la mayoría de los casos, también se encuentran amiloides en los islotes (Clark A., Cooper G.J.S. et al., Lancet, 2 de Agosto de 1987). La Patente europea Número , que reivindica una fecha de prioridad del 27 de Abril de 1987 y, por consiguiente, disponible como una pieza de la técnica anterior relevante para los fines de la Patente objeto y bajo ART 4(3) y 4(4) EPC, describe un nuevo péptido que es idéntico o sustancialmente homólogo a la secuencia de aminoácidos: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY o un subfragmento activo de la misma, Cooper et al., Purification and Characterization of a Peptide from Amyloid-Rich Pancreases of Type 2 Diabetic Patients, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 84 (1987). Este péptido puede escribirse alternativamente usando las denominaciones clásicas de tres letras de residuos aminoácidos, como se indica a continuación: 1 1 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe 1 2 Leu Val His Ser Ser Asn Asn Phe GlyAla Ile Leu Ser Ser Thr 31 3 Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr Este nuevo péptido, denominado provisionalmente péptido asociado con la diabetes o DAP y ahora renombrado amilina, se ha aislado y caracterizado a partir de páncreas que contienen amiloides de humanos diabéticos de tipo 2. Se indica que puede observarse que la amilina tiene utilidad clínica, tal como una actividad supresora del apetito y quizás también actividad vasodilatadora, que puede ser una actividad general o específica para el flujo sanguíneo del páncreas o de los islotes. Se ha dicho que se ha secuenciado parcialmente un péptido asociado con tumores, similar en estructura primaria a la amilina, a partir de un insulinoma humano, y que se ha secuenciado incompletamente la parte N-terminal de un péptido similar a partir del páncreas de un gato diabético (P. Westermark et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 84, p a 388, Junio 1987, Medical Sciences). Este péptido se ha denominado insulinoma o polipéptido de amiloides de islotes (IAPP), pero se dice que hay una pequeña duda de que los amiloides de islotes de humano y de gato tengan una naturaleza química esencialmente similar. Las técnicas inmunohistoquímicas que usan una técnica de peroxidasa sugieren que el IAPP se libera localmente a partir de células B de islotes. Aunque se ha indicado que se desconoce el papel 2

3 ES T3 del IAPP en el islote, se dijo que su conservación e identidad parcial con CGRP indica claramente una función reguladora importante. La amilina contiene treinta y siete residuos aminoácidos y es estructuralmente similar al péptido relacionado con el gen de la calcitonina CGRP, que tiene una identidad del 46% con el CGRP-2 humano. La siguiente tabla compara la estructura primaria de 1) amilina, con la de 2) CGRP-2 humano, 3) CGRP- 1 humano y 4) CGRP-1 de rata. La identidad de aminoácidos entre los péptidos está indicada por cajas. Las cajas con líneas de trazos indican áreas de homología desplazada 1 2 Se sabe que CGRP ejerce efectos significativos sobre la presión sanguínea y sobre los niveles de catecolamina en sangre cuando se administra a ratas. En el artículo de Lancet publicado el 2 de Agosto de 1987, A. Clark, G.J.S. Cooper et al. informan que los amiloides de islotes de veintidós sujetos diabéticos de tipo 2 que contenían amiloides, mostraban inmunorreactividad con antisuero contra CGRP. Esto se inhibía mediante la preabsorción del antisuero con amilina, lo que sugiere que la amilina es un constituyente proteico principal de los amiloides de los islotes. Cooper et al., supra (1987), confirmaron que la amilina es un componente principal de los amiloides de los islotes. Además, se encontró inmunorreactividad CGRP/amilina en células de islotes de sujetos tanto diabéticos como no diabéticos, y los estudios preliminares muestran su presencia en células B. Cooper et al., Lancet 1987, 2:964. Esta identificación, junto con el hallazgo de un péptido similar en insulinomas, sugiere que la amilina puede secretarse conjuntamente con la insulina. De acuerdo con la invención, se proporciona un producto farmacéutico que comprende: 3 (a) un agonista de amilina e (b) insulina 4 0 como una preparación combinada para uso por separado o conjunto en un tratamiento mediante terapia. En otro aspecto de la invención, se proporciona el uso de un agonista de amilina en un procedimiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento de diabetes mellitus en un sujeto. Otro aspecto de la invención es un procedimiento para controlar la terapia de la diabetes mellitus o de hipoglucemias, que comprende las etapas de: (a) determinar el nivel de un agonista de amilina presente en una muestra de fluido biológico de un paciente sometido a dicha terapia; y (b) evaluar la necesidad en el paciente de la administración de un agonista de amilina. Otro aspecto adicional de la invención es un procedimiento para evaluar la necesidad de administrar un agonista de amilina en el tratamiento de la diabetes mellitus o de hipoglucemias, que comprende las etapas de: (a) determinar el nivel de amilina en una muestra de fluido biológico de un sujeto: y (b) evaluar la necesidad en dicho sujeto de la administración de un agonista de amilina. Las características específicas de la invención se indican en las reivindicaciones de esta patente. 3

4 ES T Esta invención surge por la idea de que la amilina, la amilina desamidada, CGRP, un fragmento peptídico funcional de amilina, de amilina desamidada o de CGRP, una variante conservativa de amilina, de amilina desamidada o de CGRP o un fragmento, será de uso en el tratamiento de la diabetes mellitus o de hipoglucemias. Esta idea fue inesperada. Aunque se sabía que tanto la amilina como el CGRP estaban asociados de alguna forma con la diabetes mellitus, previamente no se había sugerido que esto pudiera ser útil en el tratamiento de la afección. El trabajo en el que se basa esta invención se refiere a la amilina. La invención abarca el CGRP partiendo de la base de que este péptido tiene una constitución y propiedades generalmente similares a las de la amilina y, por lo tanto, puede esperarse que muestre el mismo efecto terapéutico sorprendente. La amilina puede estar en su forma de amilina desamidada con grupo carboxi terminal o, alternativamente, en su forma de amilina amidada con grupo carboxi terminal. La estructura de la forma amidada puede representarse como:- R-NH-(C H 4 OH)-CONH 2 donde R es el resto del péptido hasta el enlace peptídico con el residuo de Tirosina carboxi terminal. Las formas conocidas actualmente de CGRP incluyen un grupo amida C-terminal que es significativo por su actividad biológica. Por fragmento peptídico funcional de amilina, de amilina desamidada o de CGRP, se entiende un fragmento peptídico de al menos residuos aminoácidos de longitud, que realiza una función terapéutica in vivo de la amilina completa, de la amilina desamidada o del péptido CGRP. Por variable conservativa se entiende un péptido que es sustancialmente, aunque no completamente, homólogo con la amilina, con la amilina desamidada o con CGRP, o con el fragmento de los mismos, pero que es funcionalmente equivalente a los mismos. (Véase M.O Dayhoff, A. Model of Evolutionay Change in Proteins, en Altlas of Protein Sequence and Structure, volumen, suplemento 3, National Biomedical Research Foundation, 1978, páginas 34 a 32). De acuerdo con un aspecto preferido de la invención, una composición para uso en el tratamiento de la diabetes mellitus o de hipoglucemias, comprende a) insulina y b) amilina, amilina desamidada o CGRP, un fragmento peptídico funcional de amilina, de amilina desamidada o de CGRP, una variante conservativa de la amilina, de la amilina desamidada o de CGRP o un fragmento. El término insulina se usa en este documento para incluir la insulina de origen natural y sintético y también fragmentos peptídicos funcionales de insulina y variantes conservativas de insulina o fragmentos de las mismas, tales que puedan usarse en el tratamiento convencional de la diabetes mellitus. Los productos de acuerdo con la invención pueden proporcionarse convenientemente en forma de soluciones adecuadas para la administración parenteral. En muchos casos, será conveniente proporcionar insulina y amilina, amilina desamidada o CGRP (o un fragmento o variante) en una sola solución, para la administración conjunta. En otros casos, puede ser más ventajoso administrar insulina y amilina, amilina amidada o CGRP (o un fragmento o variante) por separado. Un doctor es quien mejor puede determinar un régimen de administración adecuado para cada paciente individualmente. Generalmente será preferible realizar la formulación de tal forma que la proporción molar entre insulina y amilina, amilina desamidada o CGRP (o un fragmento o variante) usada para el tratamiento, sea de 0:1 a 0,1:1. Un estudio preliminar ha indicado que, como la inmunorreactividad con insulina, la inmunorreactividad con amilina y, por lo tanto, la amilina está ausente en los islotes de Langerhans de los diabéticos de tipo 1. Por lo tanto, se propone que el síndrome diabético de tipo 1 se produce por una deficiencia de no una (es decir, insulina como se había pensado previamente) sino dos (insulina y amilina, amilina desamidada o CGRP) hormonas. Como se ha indicado previamente, el problema principal con el tratamiento con insulina de la diabetes es la hipoglucemia. Es probable que la coadministración de insulina y amilina, amilina desamidada o CGRP pueda evitar este efecto secundario. Entonces, esto puede permitir:- - Un control diabético más riguroso con un riesgo reducido de hipoglucemia. Esto se aplica al tratamiento de la diabetes mellitus de tipo 1 y también para la diabetes mellitus de tipo 2 (en la fase de lesiones secundarias de células de los islotes). - El uso de amilina, amilina desamidada o CGRP para la terapia de hipoglucemias recurrentes que complican la terapia con insulina de la diabetes mellitus de tipo 1 (o de la diabetes mellitus de tipo 2). - La terapia de la diabetes frágil (diabetes mellitus de tipo 1 con un mayor riesgo de hipoglucemias). 4

5 ES T La terapia de las hipoglucemias intratables que pueden complicar el curso de la enfermedad producida por tumores que secretan insulina, tales como insulinomas. Aunque esta invención está relacionada con resultados y no con teorías, puede ser de interés la siguiente explicación del posible modo de acción de la amilina (o del CGRP). 1. La amilina o la amilina desamidada se produce en los islotes de Langerhans, casi con total seguridad en las células B, es decir, en las mismas células que producen la insulina. La diabetes de tipo 1 se produce por la destrucción de células B en los islotes de Langerhans. Como estas células contienen amilina o amilina desamidada, es muy probable que la diabetes de tipo 1 esté asociada con una deficiencia de amilina o de amilina desamidada, así como de insulina. Por supuesto, en esta afección no se ve amilina o amilina desamidada en los islotes de Langerhans. 2. Se ha demostrado que la amilina y el CGRP modulan la velocidad de secreción de insulina inducida por glucosa desde las células B de los islotes, en varios sistemas modelo. (Ahren B, Martensson H, Nobin A. Effects of calcitonin generelated peptide (CGRP) on islet hormone secretion in the pig. Diabetologia 1987; : 34-39; Petterson M., Ahren B., Bottcher G., Sundler F. Calcitonin Gene-Related Peptide: Ocurrence in Pancreatic Islets in the Mouse and the Rat and Inhibition of Insulin Secretion in the Mouse. Endocrinology 1986: 119: ) 3. En músculos sóleos aislados de rata, la amilina reduce la velocidad de síntesis de glucógeno en los modos tanto basal como estimulado por insulina (Véase el Ejemplo mostrado más adelante). Cuando se consideran conjuntamente 2 y 3, la amilina (o el CGRP) ejerce un efecto modulador poderoso sobre el almacenamiento de glucosa en forma de glucógeno, inducido por insulina. Como éste puede ser bien el mecanismo por el que se provoca resistencia a insulina en la diabetes de tipo 2, entonces puede ser bien que la hipersecreción de amilina o de amilina desamidada (o de CGRP) sea un factor en la génesis de la resistencia a insulina encontrada en esta afección. Las acciones de la amilina (o CGRP), como se ha visto anteriormente, modulan y reducen los efectos hipoglucemiantes de la insulina, tanto reduciendo la liberación de insulina en relación con un estímulo de glucosa dado, como (más importante, en el caso de la diabetes de tipo 1) reduciendo la velocidad de almacenamiento de glucosa en forma de glucógeno. Por lo tanto, la amilina (o el CGRP) puede inducir la resistencia a insulina y amortiguar los efectos hipoglucemiantes de la insulina. La eficacia de una preparación de amilina en el tratamiento de la diabetes mellitus es dependiente de la capacidad de la amilina para acceder a la circulación. Para este fin, se requieren preparaciones de amilina que sean solubles. Se ha demostrado que pueden usarse ciertos procedimientos para solubilizar la amilina cuando está presente en masas amiloideas, y estos procedimientos también se usarán en la solubilización de amilina de otras fuentes. Cooper, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 84: (1987). Estos procedimientos incluyen (1) disolución de amilina en soluciones de guanidinio, especialmente clorhidrato de guanidinio, ph,7, tamponadas en monohidrógeno fosfato sódico/dihidrógeno fosfato sódico 0,2 M; (2) disolución de amilina en soluciones de ácido trifluoroacético/acetonitrilo, especialmente ácido trifluoroacético al 1,0%/acetonitrilo al 67%; (3) disolución de amilina en solución de ácido fórmico, especialmente ácido fórmico al 70%; y (4) el uso de ultrasonidos para disolver la amilina. El trabajo experimental también indica que la liofilización puede producir amilina más soluble, quizás mediante la alteración de su estado físico. La comparación de la actividad de la amilina que se ha sintetizado químicamente con la procedente de fuentes naturales indica que la actividad de la amilina procedente de estas fuentes diferentes puede ser cualitativamente distinta. Es probable que cualquier diferencia en la actividad esté provocada por una incapacidad durante su síntesis química de reconstituir completamente la molécula en la conformación natural necesaria para la actividad biológica completa. Se cree que esto está provocado en parte por la incapacidad de reconstituir completamente el enlace disulfuro del material sintetizado químicamente. Por lo tanto, es útil observar que la actividad de la amilina de fuentes diferentes, es decir, extraída del estado natural y sintetizada químicamente, puede ser diferente debido, en parte, a diferentes grados de reconstitución de la estructura secundaria y terciaria natural de la molécula. La reconstitución de la molécula en solución acuosa diluida a ph 8 produjo un grado de actividad biológica. Sin embargo, en vista de la baja solubilidad del material sintético en solución de agua a ph 8, puede obtenerse una mejor reconstitución de amilina sintética replegando el material resultante de procedimientos sintéticos, en una solución desnaturalizante acuosa, por ejemplo, soluciones de guanidinio

6 ES T o de urea, especialmente, cloruro de guanidinio 6,0 M o urea 8,0 M, a un ph especificado, especialmente a un ph ligeramente alcalino comprendido entre aproximadamente 7, y aproximadamente 9,0. Alternativamente, la solución para la reconstitución posterior puede ser eficaz en un disolvente desnaturalizante no acuoso, tal como dimetilformamida. Bajo tales condiciones, es de esperar que la reconstitución del enlace disulfuro mediante oxidación suave, tal como la producida por soluciones de potasio, ferricianuro o mediante la exposición al oxígeno atmosférico, produzca la reconstitución óptima del enlace disulfuro. Para uso terapéutico, será útil tener preparaciones de amilina de diferentes duraciones de acción, tales como las que se usan en el caso de la insulina. Véase Larner, J. Insulin and Oral Hypogylcaemic Drugs; Glucagon. (En Gilman, et al., Eds., The Pharmacologic Basis of Therapeutics, 7 ā Edición, MacMillasn 198, p ). Para este fin, se emplearán procedimientos similares a los utilizados en el caso de la insulina, para obtener preparaciones terapéuticas de amilina. Todas estas preparaciones pueden usarse individualmente o en combinación con combinaciones apropiadas de insulina, para el tratamiento de la diabetes mellitus, de hipoglucemias y de otras afecciones. Estos procedimientos y preparaciones incluyen (1) reacción de amilina con cinc y protamina, de acuerdo con el procedimiento de Hagedorn, et al., Protamine Insulinate, JAMA 6: (1936), para producir una preparación de amilina cuyo comienzo y duración de la acción están retrasados en comparación con la de amilina no complejada; (2) una suspensión de protamina-amilina preparada como se ha indicado anteriormente, en un tampón acuoso adecuado para la administración parenteral; (3) amilina cristalina preparada mediante la cristalización de amilina en presencia de una sal de cinc, especialmente cloruro de cinc, en un medio tamponado adecuado y, especialmente, uno de ph neutro (Larner, supra); (4) una suspensión de amilina cristalina y cinc en un tampón acuoso adecuado, preparada como se ha indicado anteriormente y adecuada para la administración parenteral; () una suspensión de protamina, cinc y amilina cristalina, en la que las concentraciones de amilina, cinc y protamina puedan disponerse de tal forma que el comienzo y la duración de la acción sean intermedios entre los de las formas de amilina soluble y de protamina; (6) el material de () anterior formulado en un tampón acuoso adecuado útil para la administración parenteral; (7) una preparación de cinc-amilina cristalina resuspendida en una solución de cloruro sódico/acetato sódico, ph 7,2-7,, y adecuada para la administración parenteral; (8) insulina amorfa precipitada a alto ph y adecuada para la administración parenteral; y (9) una mezcla de amilina cristalina y amorfa adecuada para la administración parenteral. Cada una de tales preparaciones será adecuada para la administración parenteral mediante la ruta subcutánea. La estabilidad de las preparaciones de amilina puede aumentarse a ph neutro. Las preparaciones neutras de amilina pueden mezclarse con otras preparaciones neutras de amilina o con preparaciones apropiadas de insulina, dando como resultado una mayor utilidad clínica. Larner, supra. Para purificar amilinaprocedente de diversas fuentes diferentes a un nivel útil en terapia para los seres humanos, se han usado diversos procedimientos. Se ha demostrado que la amilina puede aislarse a partir del páncreas humano en un estado muy puro mediante una combinación de concentraciones, usando una centrífuga, cromatografía de exclusión molecular y cromatografía de fase inversa, específicamente HPLC. Por ejemplo, en la purificación a gran escala de la amilina, pueden ser útiles y apropiadas formas de cromatografía distintas de HPLC, tales como la cromatografía líquida rápida de proteínas (FPLC). También es posible que sean útiles otras formas de cromatografía, tales como intercambio iónico, tamices moleculares o cromatografía de interacción hidrófoba. La terapia de la diabetes mellitus de Tipo 1 con trasplantes de tejidos de células de los islotes o de tejidos pancreáticos completos, o con implantes de células de islotes, puede llegar a ser un tratamiento importante. A causa de que algunos de los efectos terapéuticos de tal terapia proceden del reemplazo de la capacidad de fabricar y secretar amilina, será necesario el control de los niveles de amilina para seguir el curso de tal terapia. Análogamente, puede ser necesario controlar los niveles de amilina en sangre, suero o plasma, para evaluar el tratamiento de las hipoglucemias, de la diabetes mellitus de Tipo 1 y de diversos estados deficientes de amilina. Ejemplo Este experimento se realizó para demostrar en punto 3 anterior, que la amilina reduce la velocidad de síntesis de glucógeno en los modos tanto basal como estimulado por insulina. Después de un ayuno de una noche, se sacrificaron ratas, se extrajeron sus músculos sóleos y se incubaron en tampón a ph fisiológico. Se añadieron glucosa marcada con 14 C y glucosa fría (no marcada) y se midió la velocidad de incorporación de glucosa en glucógeno mediante extracción de glucógeno y recuento a intervalos de hasta seis horas. Los experimentos se realizaron en presencia de 1,, 0 y 00 6

7 ES T3 microunidades de insulina por ml. La mitad de los experimentos se realizó en presencia de 1 nanomoles por litro de amilina. 1 Los resultados se indican en la Figura 1 adjunta, que es un gráfico de la velocidad de síntesis de glucógeno frente a la concentración de insulina. Los círculos claros representan los resultados de los experimentos realizados en ausencia de amilina; los círculos rellenos representan resultados de los experimentos realizados en presencia de 1 micromoles por litro de amilina. Cada mancha a1y0microunidadespor ml de insulina es la media de 11 experimentos por replicado; cada mancha a y 00 microunidades por ml de insulina es la media de experimentos por replicado. A todas las concentraciones fisiológicas de insulina (de 1 a 0 microunidades por ml), se ralentiza la síntesis de glucógeno en presencia de amilina. Las diferencias son estadísticamente significativas (p es menor de 0,0 a 1 y 0 microunidades por ml por el ensayo de Mann Whitney. Se observará que la inhibición de la síntesis de glucógeno por la amilina persiste a concentraciones de insulina bajas y, presumiblemente, incluso nulas. Parece ser que la amilina tiene su propia acción, que es contraria a la de la insulina, pero probablemente no esta mediada por el antagonismo directo de la acción de la insulina. En apoyo de esto, se ha observado que la amilina no puede desplazar significativamente a la insulina de su receptor en los glóbulos rojos

8 ES T3 REIVINDICACIONES 1. Un procedimiento para preparar un producto farmacéutico que comprende asociar: 1 (a) un agonista de amilina y (b) una insulina para proporcionar una preparación combinada para uso, por separado o conjuntamente, en el tratamiento por terapia. 2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho producto es para uso en el tratamiento de la diabetes mellitus o de hipoglucemias. 3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho agonista de amilina es amilina. 4. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho agonista de amilina es CGRP Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho agonista de amilina es un fragmento peptídico funcional de amilina. 6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho agonista de amilina es un fragmento peptídico funcional de CGRP. 7. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho agonista de amilina es una variante conservativa de amilina. 8. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho agonista de amilina es una variante conservativa de CGRP. 9. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho agonista de amilina es una variante conservativa de un fragmento peptídico funcional según se define en la reivindicación 4 o la reivindicación.. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha insulina es un fragmento peptídico funcional de insulina. 11. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicha insulina es una variante conservativa de insulina o un fragmento peptídico funcional de insulina. 12. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha amilina está liofilizada Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho agonista de amilina se dispone en un vehículo adecuado para la administración de liberación retardada. 14. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho producto se formula para la administración parenteral. 1. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se proporciona una suspensión de dicho agonista de amilina. 16. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha suspensión se formula con una sal de cinc en un tampón farmacéuticamente aceptable. 17. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16,en el que dicha sal de cinc es cloruro de cinc. 18. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16 o la reivindicación 17, que comprende una resuspensión de una preparación cristalizada de dicho agonista de amilina y una sal de cinc, realizándose dicha resuspensión en una solución de acetato sódico/cloruro sódico. 8

9 ES T3 19. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 18, en el que dicha solución tiene un ph de 7,2 a 7,. 1. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho agonista de amilina es un agonista de amilina humano. 21. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la proporción molar entre dicha insulina y dicho agonista de amilina es de 0:1 a 0,1: Uso de un agonista de amilina en un procedimiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento de diabetes mellitus en un sujeto. 23. Uso de un agonista de amilina en un procedimiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento de hipoglucemias en un sujeto. 24. El uso de acuerdo con la reivindicación 22 ó 23, en el que se usa insulina en la preparación de dicho medicamento El uso de la reivindicación 24, en el que dicha insulina se formula para la administración parenteral. 26. El uso de la reivindicación 24 o la reivindicación 2, en el que dicha insulina se formula para la administración de liberación retardada. 27. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26, en el que dicha insulina y agonista de amilina se formulan para uso por separado en el tratamiento de la diabetes mellitus o de hipoglucemias. 28. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el que dicho agonista de amilina es amilina. 29. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el que dicho agonista de amilina es CGRP.. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el que dicho agonista de amilina es un fragmento peptídico funcional de amilina. 31. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el que dicho agonista de amilina es un fragmento peptídico funcional de CGRP. 32. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el que dicho agonista de amilina es una variante conservativa de amilina El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el que dicho agonista de amilina es una variante conservativa de CGRP. 34. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el que dicho agonista de amilina es una variante conservativa de un fragmento peptídico funcional de amilina o CGRP. 3. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 34, en el que dicho agonista de amilina se formula para la administración parenteral. 36. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 3, en el que dicho agonista de amilina se formula para la administración de liberación retardada. 37. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 36, en el que la proporción molar entre dicha insulina y dicho agonista de amilina es de 0:1 a 0,1: Un procedimiento para controlar la terapia de la diabetes mellitus o de hipoglucemias, que comprende las etapas de: (a) determinar el nivel de un agonista de amilina presente en una muestra de fluido biológico de un 9

10 ES T3 paciente sometido a dicha terapia; y (b) evaluar la necesidad en el paciente de la administración de un agonista de amilina. 39. Un procedimiento para evaluar la necesidad de administración de un agonista de amilina en el tratamiento de la diabetes mellitus o de hipoglucemias, que comprende las etapas de: (a) determinar el nivel de amilina en una muestra de fluido biológico de un sujeto; y 1 (b) evaluar la necesidad en dicho sujeto de la administración de un agonista de amilina.. El procedimiento de la reivindicación 38, que además comprende la etapa de evaluar la necesidad de adrninistración de insulina en dicho sujeto. 41. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 38 a, en el que dicho agonista de amilina comprende amilina. 42. El procedimiento de la reivindicación 41, en el que dicha amilina comprende amilina humana. 43. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones a 44, en el que dicha muestra de fluido biológico se selecciona entre el grupo compuesto por sangre, suero y plasma NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva.

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