Alberts Molecular Biology of the Cell 4ª, 5ª o 6ª Ed. (2002, 2008, 2014) Lehninger Principles of Biochemistry 4ª, 5ª o 6ª Ed. (2004, 2008, 2012)

Transcripción

1 Bibliografía: Alberts Molecular Biology of the Cell 4ª, 5ª o 6ª Ed. (2002, 2008, 2014) Lehninger Principles of Biochemistry 4ª, 5ª o 6ª Ed. (2004, 2008, 2012) Lodish Molecular Cell Biology 5ª, 6ª o 7ª Ed. (2000, 2007, 2014) Watson Molecular Biology of the Gene 6ª o 7ª Ed. (2008, 2014) ADN ESTRUCTURA CROMOSOMAS Y GENOMAS

2 EL ADN: UNA HISTORIA FASCINANTE DE DESCUBRIMIENTOS

3 LO QUE YA SABEMOS: v Los cromosomas son los portadores de los elementos hereditarios v Los cromosomas están compuestos de ADN y proteínas v Cada cromosoma está formado por una molécula de ADN

4 Friedrich Miescher, 1869 Utilizando el pus de vendajes, aisla ADN y lo llama nucleína Frederick Griffith, 1928 Trabajando en una vacuna contra Streptococcus pneumoniae, obtiene el principio transformante: ADN

5 Oswald Avery, Colin MacLeod, and Maclyn McCarty, Solo cuando se destruye el ADN, se pierde la virulencia de Streptococcus pneumoniae

6 P 32 S 35 Demuestran que durante la infección de la bacteria por fago T4, solo el ADN entra a la célula. DNA: P 32 proteínas: S 35 Alfred Hershey & Martha Chase, 1952.

7 El ADN es la molécula de la herencia La naturaleza hereditaria de cada organismo está definida por su genoma, el cuál consiste de largas secuencias de ácidos nucléicos que proporcionan la información necesaria para construir al organismo.

8 La Pentosa (Ribosa o Desoxiribosa)

9 Las bases nitrogenadas RNA

10 Nomenclatura

11 Los DESOXIRIBONUCLEÓTIDOS

12 Reglas de Chargaff La cantidad de adenina es la misma que la de timina: A=T La cantidad de guanina equivale a la de citosina: G=C La cantidad de bases púricas es la misma que las bases pirimídicas: A+G=T+C Pero la cantidad de A+T G+C Excepción: algunos virus

13 Existe complementariedad entre bases nitrogenadas DNA

14 Linus Pauling Rosalind Franklin James Watson & Francis Crick Estructura del ADN Surco menor Surco menor Surco mayor Surco mayor

15 La distancia entre las bases nitrogenadas siempre es la misma, por su complementariedad constante 5 PO 4-3 OH 10.5 nucleótidos por vuelta Cadenas ANTI-paralelas

16 El ADN se encuentra en forma de doble cadena (excepciones: algunos virus) Complementariedad: A T G C Bases nitrogenadas: interior Fosfatos: exterior Los nucleótidos en cada una de las cadenas se encuentran unidos covalentemente entre sí por un enlace fosfodiester Las dos cadenas se encuentan asociadas de forma NO covalente por puentes de hidrógeno entre las bases nitrogenadas Las dos cadenas son anti-paralelas y cada una cuenta con dos extremos conformados por: Extremo 5 : PO 4 - Extremo 3 : OH Cada cadena se lee por la base nitrogenada desde el extremo 5 hacia el 3

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18 Propiedades del ADN Ø Cadenas muy largas Ø Soluble en agua Ø Insoluble en alcohol Ø Carga negativa (grupos fosfato hacia el exterior de la doble hélice) Ø Máximo de absorbancia a 260 nm (bases nitrogenadas) Ø Desnaturalización por altas temperaturas (90 ºC)

19 Desnaturalización y Re-naturalización El contenido de GC influye en las propiedades del ADN, especialmente sobre la temperatura de desnaturalización y alineamiento % GC Tm

20 Concentración y calidad del ADN A260 / A280 Calidad < 1.8 Contaminación con proteínas No hay contaminación La muestra > 2 probablemente contiene RNA Pico de absorbancia a Conatminación con 270 nm fenol Forma del ácido nucléico Concentración a A260nm = 1 DNA de doble cadena (dsdna) 50 µg/ml DNA de cadena sencilla (ssdna) 37 µg/ml RNA 40 µg/ml

21 Separación y visualización de fragmentos de ADN Gel de Agarosa 0.8% - 2.5% Bromuro de etidio: Agente intercalante entre las bases nitrogenadas que fluoresce a la luz UV

22 Si quieres extraer ADN en casa, consulta:

23 La estructura del ADN permite responder dos preguntas claves en la Genética: 1. Cómo se puede determinar la información de una función biológica en una forma química? DNA RNA proteína 2. Cómo se puede copiar la información a generaciones sucesivas? DNA DNA DNA

24 Tipos de secuencias de ADN Cromosoma Genes y relacionados Regiones intergénicas Genes Exones Función Pseudogenes Fragmentos de genes Promotores Intrones Secuencias repetidas dispersas LINES SINES Otras Centrómero Telómeros Regiones no traducibles (UTR) TRANSPOSONES Microsatélites