Diagnóstico de virus fitopatógenos

Transcripción

1 Diagnóstico de virus fitopatógenos Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales. 9 de junio de 2011 Vivienne Gepp Dos páginas web Diagnosing Plant Diseases Caused by Viruses: Serological Approaches. International Plant Diagnostic Network Training on New and Emerging Pathogens. Antigua, Guatemala ction.pdf How Do You Diagnose a Virus Infection in a Plant? a_viruses/diag/what%20is%20it.html 1

2 Características generales Virus fitopatógenos: Acido nucleico + proteína 90% ARN, 1 cadena Viroides: ARN cadena simple, circular Criterios de clasificación Huésped Síntoma Forma Tamaño Ácido nucleico Ej. Tobacco mosaic virus TMV Tobacco mosaic tobamovirus 2

3 Clasificación Grupos Virus Familias Géneros Especies Criterios de clasificación Forma Tamaño Ácido nucleico Forma de transmisión Tipo de síntoma 3

4 Género Luteovirus Potato leafroll luteovirus Barley yellow dwarf luteovirus Dificultades en el diagnóstico de virus: pequeño tamaño poca diversidad morfologica síntomas similares síntomas variables: cultivar condiciones ambientales 4

5 Técnicas de diagnóstico Biológicas Físicas Serológicas Moleculares Una técnica es suficiente para el diagnóstico? Diagnóstico por propiedades biológicas: 1. Plantas huéspedes: Cuál(es)? Síntomas 2. Infección de plantas indicadoras: Cuál(es)? Síntomas 3. Transmisión: Cómo? 5

6 Macroscópicos Síntomas Microscopicos: Cuerpos de inclusión Efectos citopatológicos (en núcleo, cloroplastos, mitocondrias) APS. Illustrated Glossary of Plant Pathology. y/pages/i-m.aspx Diagnóstico por síntomas 6

7 Diagnóstico por síntomas Síntomas - cloróticos 7

8 Síntomas necróticos Síntomas necróticos 8

9 Síntomas Específicos de virus? Síntomas Síntomas específicos de virus? 9

10 Los síntomas dependen de: Planta Patógeno Ambiente Los síntomas dependen de: variedad ej. TSWV 10

11 Plantas indicadoras Nicotiana spp., Solanum spp., Chenopodium spp., Cucumus spp., Phaseolus spp., Vicia spp., Pisum spp., Brassica spp, etc. según los casos. Plantas indicadoras Cuáles inocular? Cómo reaccionan? Susceptible o no, sin síntomas Síntomas: locales y/o sistémicos Fuentes de información: Bibliografía, Intenet 11

12 Internet Association of Applied Biologists. Descriptions of Plant Viruses. Brunt, A.; Crabtree K.; Dallwitz, M.; Gibbs, A.; Watson, L. andzurcher, E. Plant Viruses Online. Descriptions and Lists from the VIDE Database. m Plantas indicadoras Sin síntomas Lesiones locales Síntomas sistémicos 12

13 Plantas indicadoras Tospovirus en Impatiens sp. 13

14 Blackberry chlorotic ringspot Ilarvirus Métodos de transmisión Por injerto Mecánica = por savia Por vectores: pulgones trips moscas blancas otros insectos nematodos Wikipedia. Strawberry vein banding virus rchpage3.asp 14

15 Transmisión por injerto Wikipedia. Strawberry vein banding virus VIRUS INDEXING PROCEDURES cations/web_version/117/ch5.htm ase.co.uk/virusrese archpage3.asp Transmisión mecánica 1. Macerado de planta enferma 2. Abrasivo (carborundum) 3. Planta sana = Transmisión por jugos 15

16 Transmisión por pulgones Técnicas basadas en características físicasf Forma y tamaño Propiedades de sedimentación 16

17 Microscopio electrónico Partículas de virus: Sombreadas Con tinción negativa Fuente: Walkey, 1991 Forma y tamaño 17

18 Técnicas que dependen de la proteína del virus 18

19 Serología Antígeno Anticuerpo Antisuero Policlonal Monoclonal Serología 1. Producción de antisuero 2. Técnicas serológicas - diagnóstico 19

20 Técnicas serológicas (1) Reacción antígeno - anticuerpo Precipitación Aglutinación Difusión Técnicas serológicas ipt=sci_arttext 20

21 Difusión Técnicas serológicas Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay Enzyme Linked ImmunoSorbant Assay (ELISA) zyme-linked-immunosorbant-assay-elisa.html How Do You Diagnose a Virus Infection in a Plant? /pathology/florida_viruses/diag/what%2 0is%20it.html 21

22 Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay 22

23 Serología ventajas: Especificidad Rapidez Sensibilidad Menor dependencia de condiciones biológicas e ambientales Semi-cuantitativo (ELISA) Serología - desventajas Detecta sólo la proteína del virus Cada antisuero detecta UN virus/género/raza Posibles reacciones cruzadas Disponibilidad de antisueros 23

24 Hibridación de ácidos nucleicos Northern blot Fuente: Techniques of Molecular Biology. Hibridación de ácidos nucleicos Dot blot DNA microarray 24