PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Transcripción

1 PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA UN METABOLITO SECUNDARIO ANTIBACTERIANO DE Penicillium verrucosum Juan Ernesto Baquero, Rubén D. Torrenegra, Martín Bayona Proyecto Colciencias Universidad Javeriana,Cod

2 OBJETIVOS ESPECIFICOS Identificar la especie de Penicillium spg 28 obtenida del banco de cepas del Grupo (GIBUJ). Evaluar diferentes medios de cultivo para la fermentación de metabolitos secundarios por Penicillium spg 28 Extraer y purificar por métodos químicos las sustancias producidas por Penicillium spg 28 Evaluar la actividad antimicrobiana de las sustancias producidas frente a E.coli y S. aureus.

3 Penicillium sp. Reino: Fungi Subdivisión:Deuteromicotina Clase: Hyphomycetidae Orden: Moniliales Familia: Moniliaceae Género: Penicillium Barnett,1998

4 Penicillium sp. Hongo filamentoso Heterótrofo Aerobio facultativo Temperatura óptima ºC ph óptimo 5.6, crecen ph 2.0 a 9.0 Producen sustancias antimicrobianas Degradan Celulosa Quitina Almidón Azucares lignina

5 CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS Conidioforo hialino, tabicado libremente ramificado y dan lugar a fialides ramificadas con cadenas de esporas

6 Características Macroscópicas Penicillium sp Inicialmente son blancas y vellosas Las esporas son pigmentadas de color verde, azul verdosa, amarillas La superficie de la colonia puede ser algodonosa aterciopelada o pulverulenta Presentar exudados en la superficie y Pigmentación en el reverso

7 E X P E R I M E N T A C I O N Conservada Activación Cultivo en suelo de la cepa monospórico Identificación Preinóculo Centrifugación Obtención de esporas

8 FILTRACIÓN BIOMASA CULTIVO EXTRACCIÓN SEPARACIÓN Y PURIFICACION IR, RMN, MASAS IDENTIFICACION Pruebas Antimicrobianas

9 Conidioforo alargado fino y septado Penicillium verrucosum Triverticilado se ramifica 2 ramas 7 a 8 métulas Fialides en forma de pico de botella Conidias esféricas en cadenas Hoestria y Samson 1981, Samson 1989, Pitt 1988, Gums and Domsch 1980, Barnett 1998.

10 MEDIO CZAPECK 2.5 cm en 14 días Textura rugosa pulvurulenta Verde oscuro Borde blanco aterciopelado Esporulación moderada Reverso rugoso incoloro Difusión de pigmento amarillo Penicillium verrucosum Pitt, 1988, Samsom 1989, Hoestria,Samsom 1981

11 Extracto de malta 3.0 cm en 14 días Verde oscuro Textura plana pulverulenta Borde blanco aterciopelado Reverso plano Difusión de pigmento amarillo Penicillium verrucosum Pitt, 1988, Samsom 1989, Hoestria,Samsom 1981

12 RENDIMIENTO Medio de cultivo Rendimiento de Biomasa/ Sustrato Rendimiento del Producto/ Sustrato J1 J2 Rendimiento de sustancia (mg)/ Biomasa g. J1 J2 PGS 42.6% 0.85% (-) 0,10 (-) B. alfa 45.5% 0.97% 0.035%

13 DICLOROMETANO Cristales transparentes Forma de agujas. SOLUBILIDAD Metanol, Acetona, Cloroformo. PUNTO DE FUSIÓN 136º C Rf: 0.5 Diclorometano-metanol (9.0: 1.0), en CCD bajo luz U.V de onda corta - U.V onda larga Reacción con Vainillinaacido sulfúrico: morado oscuro en CCD. MICROFUSIÓN SODICA No hay presencia de halogenos y Nitrógeno

14 ACETATO DE ETILO Rf=0.09 cristales blancos Diclorometano -metanol de forma asimétrica (9.0: 1.0) CCD bajo luz U.V de onda corta SOLUBILIDAD Acetona Vainillina- acido sulfúrico no revela color PUNTO DE FUSIÓN 192 ºC.

15 J1 J1 J1 J2 Pureza de las sustancias J1 y J2 producidas por P. verrucosum spg 28 PGS Bα Bα

16 ESPECTRO DE INFRAROJO J1

17 ESPECTRO DE RMN + H J1

18 ESPECTRO DE RMN 13 C, JMOD. J1 AROMATICO ALIFATICO LACTONA

19 Sustancia J1 Fórmula molecular C 17 H 20 O 6 O OH O OMe COOH

20 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA

21 Estria # Bacteria 200µg J1 (radio) (mm) Staphylococcus 1 aureus Staphylococcus 2 epidermis Streptococcus 3 mutans Streptococcus 4 salivarius Streptococcus 5 pyogenes Streptococcus sp Bacillus subtilis

22 Gram negativas Bacteria Salmonella enteritidis E.coli Proteus Pseudomona aureginosa Shigella Citrobacter freundii J1 200 µg (mm)

23 25µg Eritromicina 40µg 50µg Microorganismo S.aureus HALO(mm) J1µg Control ERITROMICINA 15µg 21

24 C.M.I Staphylococcus aureus J1 µg/ml C. esterilidad C+ Abs CMI= 13.3µg/ml CMB= 16.6µg/ml

25 E.coli La sustancia J1 no presentó actividad hasta 33.3 µg/ml.

26 C.M.I Staphylococcus aureus Agente antimicrobiano Amicacina Cloramfenicol Eritromicina Nitrofurantoina Vancomicina QUINONA Resistente 32 µg/ml 25µg/ml 8µg/ml 100µg/ml - - Suceptible 16 µg/ml 12.5µg/ml 2µg/ml 25µg/ml 5µg/ml 16.6µg/ml