ScanGel Monoclonal ABO/RH Tarjetas Tarjetas
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- Clara Ortiz Sandoval
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1 ScanGel Monoclonal ABO/RH Tarjetas Tarjetas GEL FORMULADO CON REACTIVOS MONOCLONALES DE ORIGEN MÚRINO O HUMANO Grupo hematico ABO. Determinación de los Ag RH1 IVD Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad se hallan bajo un sistema de garantía de calidad desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización de los productos finales. Cada lote de producto final se somete a un control de calidad y sólo se comercializa si está en conformidad con los criterios de aceptación. El fabricante conserva la documentación referente a la producción y al control de cada lote. 17
2 I - UTILIZACIÓN Y PRINCIPIO DE LA PRUEBA Esta tarjeta está estrictamente reservada para uso profesional e in vitro. Designada para grupaje ABO y la determinación del antígenos RH1 (D), el test combina los principios de aglutinación y filtración en gel. La reacción se obtiene y se lee tras la centrifugación de unos microtubos especialmente diseñados, rellenos de gel impregnado del reactivo específico del antígeno eritrocitario a determinar. La suspensión de glóbulos rojos se deposita en el pocillo de cada microtubo y se centrifuga inmediatamente. Los glóbulos rojos no aglutinados se depositan en el fondo del microtubo, mientras que los aglutinados se retienen por todo el gel en función de su tamaño. Su posición en el gel determina la intensidad de la reacción II - CARACTERÍSTICAS DE LOS REACTIVOS Los tres primeros microtubos de la tarjeta ScanGel Monoclonal ABO/RH contienen cada uno un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen múrido respectivamente de especificidad anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) y anti-abo3 (AB). Estos anticuerpos se producen a partir de los siguientes clones : anti-abo1 (A) : 15750F7 anti-abo2 (B) : X9 anti-abo3 (AB) : AB5-63A5A2 / X9 El cuarto y el quinto microtubo contienen cada uno un gel impregnado con un reactivo monoclonal de origen humano respectivamente de especificidad anti-rh1 (D) y anti-rh1, 2, 3 (DCE). Estos anticuerpos se producen a partir de los siguientes clones : Anti-RH1 (D) : B9A4-B2A6A6A1A1 Anti-RH1, 2, 3 (DCE) : T3D2F6 / MS24 / MS260 El sexto microtubo contiene el gel sin anticuerpos y corresponde al control (Ctl). Estos reactivos contienen azida sódica (< 0,1 %) como conservante. El código del producto y el número de paneles por caja se indican en la etiqueta de la caja. 18
3 III - CADUCIDAD Y CONSERVACIÓN La fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento se indican en la caja. Las tarjetas deben conservarse a temperatura ambiente, de +15 C a +25 C. Las tarjetas deben almacenarse verticalmente, protegidas de las fuentes de calor, en un local con escasas variaciones de temperatura e higrométricas. IV - PRECAUCIONES La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas de laboratorio siguientes : No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar tarjetas que muestren signos de desecación o burbujas, o si la lengüeta de sellado muestra signos de deterioro. Como los reactivos contenidos en los microtubos tienen una naturaleza diferente, es indispensable tomar las precauciones necesarias para no provocar contaminaciones inter-microtubos, especialmente cuando se retira la lengüeta de aluminio y en las etapas de distribución. Utilizar una punta de pipeta para cada muestra. Comprobar la precisión y el correcto funcionamiento de las pipetas y de los otros equipos. Llevar guantes y gafas de protección durante la manipulación de los reactivos y de las muestras. No pipetear directamente con la boca. Evitar las salpicaduras. En caso de salpicaduras, limpiar las superficies manchadas con lejía de 12 Cl diluida al 10% y secar con papel absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá ser desechado en un contenedor especial para residuos contaminados. Producto y fungible que hayan estado en contacto con muestras o reactivos que contenga material de origen humano deben ser descartados una vez descontaminados. Las fichas de seguridad están disponibles bajo petición. V - RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS La sangre debe obtenerse en condiciones de asepsia en un tubo sin o con anticoagulante (EDTA, CPD). Tras la obtención, la prueba debe realizarse lo antes posible. Las muestras que no puedan analizarse rápidamente deberán conservarse entre +2 C y +8 C para ser sometidas a prueba en las 48 horas siguientes. En ningún caso debe observarse hemólisis. No calentar las muestras. 19
4 VI - TÉCNICAS Material suministrado Tarjetas ScanGel Monoclonal ABO/RH Material necesario pero no suministrado Medios de suspensión de los glóbulos rojos ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos IH QC 4 x 6 ml Centrífuga : ScanGel Centrifuge Pipetas automáticas o semiautomáticas Puntas de pipetas Tubos de un solo uso Contenedor especial para residuos con riesgo biológico Lejía Guantes de látex Papel absorbente Gafas de protección Controles Controles positivo y negativo : glóbulos rojos encontrados positivos y negativos para el antígeno estudiado. Estos controles deben ser testados simultáneamente con los glóbulos rojos de la muestra a probar para validar la actividad propia del reactivo. IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos. Procedimiento Seguir estrictamente el protocolo propuesto. Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente. Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a probar. VI.1 - Suspensión en ScanLiss a) Previa preparación de la suspensión de globulos rojos 1% para testarse en ScanLiss Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 10 μl del precipitado globular. Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. 20
5 b) Técnica 1. Identificar la tarjeta con el nombre o el número de muestra correspondiente. Retirar la lengüeta de aluminio de las tarjetas con cuidado para evitar las contaminaciones interpocillos. Resuspender los hematíes anted de usar. 2. Distribuir 50 μl de suspensión globular en el pocillo de cada microtubo de la tarjeta. 3. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centrífuge. 4. Leer las reacciones. VI.2 - Suspensión en ScanSol a) Preparación extemporánea de una suspensión de glóbulos rojos 5% en ScanSol Poner 0,5 ml de ScanSol en un tubo de un solo uso identificado. Añadir 25 μl del precipitado globular. Mezclar. La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso. b) Técnica 1. Identificar la tarjeta con el nombre o el número de muestra correspondiente. Retirar la lengüeta de aluminio de las tarjetas con cuidado para evitar las contaminaciones interpocillos. Resuspender los hematíes anted de usar. 2. Distribuir 10 μl de suspensión globular en el pocillo de cada microtubo de la tarjeta. 3. Centrifugar inmediatamente 10 minutos en ScanGel Centrífuge. El retraso entre el final de la distribución y el principio de la centrifugación no debe exceder los 10 minutos. 4. Leer las reacciones. VII - INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS La presencia de aglutinados en la superficie o dispersos en el gel corresponde a un resultado positivo que indica la presencia del antígeno eritrocitario correspondiente. Un sedimento de glóbulos rojos en el fondo del microtubo corresponde a un resultado negativo que indica que el antígeno eritrocitario correspondiente no se detecta. Una reacción positiva en uno de los microtubos sólo puede ser válida si el microtubo Ctl es negativo. Si el microtubo Ctl presenta una reacción positiva : Lavar los glóbulos rojos con solución salina isotónica (NaCl 0,9%). Repetir el procedimiento como se indica en VI.1 o VI.2. 21
6 Si el microtubo Ctl es negativo, la interpretación para cada uno de los otros microtubos es la siguiente : Resultado positivo Resultado positivo bajo Resultado negativo a Si el microtubo Ctl da siempre una reacción positiva repetir la prueba utilizando otra técnica que no sea la técnica de filtración en gel. Los resultados sólo son válidos si los controles positivo y negativo dan los resultados esperados. a) Interpretación de los microtubos ABO1(A), ABO2 (B) y ABO3(AB) Un agrupamiento ABO completo conlleva 2 pruebas complementarias : la prueba globular realizada con los reactivos anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) y si es necesario anti-abo3 (AB) y la prueba sérica realizada con los glóbulos rojos problema A1, B y si es necesario A2 y O. En la tabla siguiente se muestran los perfiles de las reacciones esperadas con los reactivos anti-abo1 (A), anti-abo2 (B), anti-abo3 (AB) y los glóbulos rojos problema A1, A2, B, O así como sus interpretaciones : GRUPOS PRUEBA SÉRICA : GLÓBULOS PRUEBA GLOBULAR : REACTIVOS ROJOS PROBL. Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O La prueba globular y la prueba sérica deben dar resultados concordantes. Cualquier divergencia entre ambas pruebas deberá resolverse antes de dar un resultado de agrupamiento ABO. Cada vez que se observe una divergencia entre las pruebas globular y sérica, habrá que realizar pruebas complementarias con los controles adecuados. b) Interpretación del microtubo RH1 (D) Un resultado positivo en al microtubos RH1 (D) indica la presencia del antígeno RH1 (D) en la superficie de los glóbulos rojos probados. A pesar de sus especificaciones, el anti-rh1(d) de la tarjeta ScanGel Monoclonal ABO/RH no permite la detección de todos los antígenos D débiles ni la detección del fenotipo RH1 parcial categoría VI (DVI). Si se 22
7 requiere la detección de estos antígenos especiales, realizar un ensayo complementario con el reactivo ScanGel Monoclonal Anti-RH1(D)/RHW1 asociado a la tarjeta ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d. c) Interpretación del microtubo RH1, 2, 3 (DCE) Un resultado positivo en el microtubo RH1, 2, 3 (DCE) indica la presencia del antígeno RH1 (D) y/o RH2 (C) y/o RH3 (E) en la superficie de los glóbulos rojos probados. VIII - COMPORTAMIENTO Se ha evaluado el comportamiento de la tarjeta ScanGel Monoclonal ABO/RH en un panel de 1641 muestras no seleccionadas (1.150 donantes, 332 pacientes, y 159 recién nacidos) que se completó con un panel de muestras seleccionadas (antígenos débiles o variante). Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de placa, tubo, microplaca o filtración de gel. a) Comportamiento específico de los reactivos anti-abo1(a), anti-abo2(b) y ABO3 (AB) Las muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Se comprobó un panel de 17 muestras seleccionadas (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB, A3B, ABf). Todas las muestras fueron detectadas con unareactividad de 1+ a 3+. Los antígenos B adquiridos comprobados no fueron detectados con el anti-abo2(b) de la tarjeta ScanGel Monoclonal ABO/RH. Los reactivos anti-abo1(a), anti-abo2 (B) y anti-abo3(ab) de la tarjeta ScanGel Monoclonal ABO/RH mostraron una buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. b) Comportimiento específico del reactivo anti-rh1(d) Las muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Se ha ensayado un panel de 24 muestras especiales (Ag débiles, variantes y fenotipos especiales). Se ha detectado el conjunto de las variantes y de los fenotipos especiales, excepto una muestra de fenotipo RH1 parcial categoría VI (DVI). Fue detectado el 94% de los antígenos RHW1 (D débil) comprobados. Ambos reactivos anti-rh1(d) de la tarjeta ScanGel Monoclonal ABO/RH mostraron buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. 23
8 c) Comportimiento específico del reactivo anti-rh1, 2, 3 (DCE) Las muestras han dado resultados compatibles con los esperados. Ambos reactivos anti-rh1, 2, 3 (DCE) de la tarjeta ScanGel Monoclonal ABO/RH mostraron buena reproducibilidad interanálisis e intraanálisis. LÍMITES Los resultados anormales pueden ser consecuencia de : una contaminación bacteriana o química del suero, del plasma, de los glóbulos rojos o del material. una medicación o un estado patológico del paciente que provoque una reacción cruzada. el uso de un medio de suspensión para los glóbulos rojos diferente al recomendado. una preparación de los glóbulos rojos diferente a la recomendada. la presencia de fibrina (imagen de un sedimento celular compacto en el fondo de un microtubo acompañado de una fina banda rosada en la zona superior del gel correspondiente a los glóbulos rojos retenidos por los residuos de fibrina). contaminación entre microtubos. uso de otro procedimeinto del descrito anteriormente. Su licenza DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Suisse 24
9 IX - LITERATURE 1. Kankura T., Kurashina S., Nakao M.: A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83: Rouger Ph., Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Lapierre Y., Rigal D., Adam J. et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Salmon Ch., Cartron J.P., Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme, 2è éd. Masson Agre P.C., Cartron J.P.: Protein blood group antigens of the human red cell. Structure, function and clinical significance. The John Hopkins University Press Third international workshop and symposium on monoclonal antibodies and related antigens. Section Rh TCB 1996;6: Reid M.E., Lomas-Francis C.: the blood group antigen facts book. Academic Press Third international workshop and symposium on monoclonal antibodies and related antigens. Section ABO. TCB 1997;1: Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.
10 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2008 Fax.: Code:
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