NOCIONES DE EPIDEMIOLOGÍA Y DIAGNOSTICO DE HIV. Dra G Carballal Laboratorio de Virología Clínica CEMIC, 2009

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1 NOCIONES DE EPIDEMIOLOGÍA Y DIAGNOSTICO DE HIV Dra G Carballal Laboratorio de Virología Clínica CEMIC, 2009

2 La Pandemia de SIDA Personas que viven con el HIV/SIDA Total 40 millones Adultos 38 Niños 2 Nuevas Infecciones en el 2005 En ese año 5 millones Muertes en ese año 3 millones ONUSIDA/OMS Diciembre 2005

3 SIDA en Argentina: Casos notificados al 2005 Total de casos Hombres Mujeres Niños Relación hombre/mujer: 3:1 Gente viviendo con HIV: estimado

4 HIV Transmisión Principal vía: Sexual ( 50%) Heterosexual: 31% Homosexual: 22% Drogas EV 33% Madre a hijo Otras

5 Diagnóstico de Infección por HIV Es fundamentalmente serológico!!

6 4G 3G 1 y 2 G

7 Diagnóstico de infección por HIV Detección de Anticuerpos: Ensayos de tamizaje (screening) Enzimoinmunoensayos (ELISAs) Los Antígenos se obtienen de: Lisado de partículas virales completas Proteínas recombinantes Péptidos (sintetizados químicamente) Que Inmunoglobulinas detectan? IgG ( 1ª y 2ª generación) IgG, IgM, IgA ( 3ª generación) IgG, IgM, IgA y Antígeno p24 ( 4ª generación) Otros ensayos Aglutinación de partículas de gelatina o látex Hemoaglutinación pasiva Inmunoensayos de fase sólida Ensayos rápidos

8 Virología Médica 4 Ed. Ed. CORPUS, Cap 22 B Bouzas

9 Diagnóstico de la infección por HIV Ensayos Complementarios o Suplementarios ( antes Confirmatorios) Para anticuerpos Western blot Inmunofluorescencia Para antígenos o virus viable ELISA para antígeno p 24 Aislamiento en cultivo

10

11

12 Identificación por peso molecular de los principales productos de genes estructurales de HIV-1 en el Western blot. Gen Producto Descripción Env gp160 precursor gp120 envoltura externa gp41 transmembrana gag p55 precursor p40 precursor p24 core p17 matriz polp66 transcriptasa reversa p51 transcriptasa reversa p32 endonucleasa

13 Criterio de positividad para la interpretación de Western Blot. ORGANIZACIÓN CRITERIO ASTPHLD/CDC * Al menos dos de: -p24 -gp41 -gp160/120 Cruz Roja Americana Al menos tres bandas Una correspondiente a cada uno de los genes: gag + pol + env Consorcio para la Al menos dos bandas: p24 ó p32 + Estandarización de gp41 ó gp160/120 Serología de retrovirus FDA 24, p31, y gp41 ó gp120/gp160 OMS Al menos dos bandas de envoltura OMS: Organización Mundial de la Salud; FDA: Food and Drug Administration; CDC: Center for Disease Control, Atlanta.

14 Interpretación del Western blot POSITIVO: reactividad a 2 de cualquiera de los productos de Gag: p 24 ó env: gp 120/ 160, gp 41 INDETERMINADO: Cualquier patron de 1 o mas bandas reactivas que no alcanza el criterio de + NEGATIVO: ausencia de cualquier banda

15 Diagnóstico de la infección por HIV Detección de Ácidos Nucleicos (RNA ó DNA) Para Diagnóstico DNA proviral de HIV en células polimorfonucleares (neonatos) RNA en plasma (cualitativa) Para monitoreo de la terapia antiretroviral Carga viral plasmática de HIV

16 Diagnóstico de la infección por HIV Detección de antígenos virales o del virión ELISA (captura de antígeno p24): para pediatricos y primoinfección Co- Cultivo: a partir de PMN del paciente en PMN de dador normal estimulados con fitohemaglutinina. Se mantienen con IL-2 durante 30 días

17 Diagnóstico Virologico: es diferente en adultos y niños: qué usar? Anticuerpos antígeno genoma aislamiento p24 Tamizaje ELISA PCR Co-cultivo ELISA RT-PCR en lineas Aglut partic linfoblastoide Deteccion Inmunodot de Ag p 24 o TR Confirmación: WB, IFI. LIA

18 ALGORITMO PARA EL DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE HIV-1 Suero EIE (3G ó 4G) NEGATIVO REACTIVO RETESTEAR CON OTRA TECNICA INFORMAR AL MÉDICO Y SOLICITAR NUEVA MUESTRA INFORMAR RETESTEAR POSITIVO ELISA. HACER WB NEGATIVO (en ambos duplicados) WB NEGATIVO INDETERMINADO POSITIVO Agp24, RNA HIV Nueva Muestra en 7 10 DIAS Agp24, RNA HIV Nueva Muestra en 7-10 DIAS

19 DIAGNÓSTICO PEDIATRICO

20

21 Diagnóstico en menores de 18 meses nacidos de madres infectadas La madre infectada transmite la infección entre el 20 al 50% de los casos Los anticuerpos Ig G atraviezan la placenta lo que dificulta el diagnóstico La presencia de anticuerpos en el niño no indica infección como en los adultos Los anticuerpos maternos son indetectables a los meses de vida

22 Métodos usados anteriormente en pediatría Desaparición de bandas con el tiempo en WB seriados : tarda 18 meses Baja sensibilidad Detección de Anticuerpos IgM e IgA Producción in vitro de anticuerpos (IVAP o ELISPOT). Antígeno p24 en suero, previa disociación ácida de inmunocomplejos

23 Diagnostico Actual de HIV en el neonato: Aislamiento viral: por co-cultivo PCR para DNA proviral en PMN de sangre periférica Antigenemia p 24, previa disociación ácida RNA plasmático cualitativo ( carga viral)

24 SEGUIMIENTO DE LA INFECCIÓN POR HIV EN ADULTOS Y NIÑOS

25 Seguimiento de Infección por HIV Recuento de CD 4 Carga viral para HIV ( cantidad de ARN viral en plasma )

26 Carga viral para HIV Predice la evolución ( Mellors): Si baja carga inicial se demora la progresión a SIDA Monitorea la respuesta al tratamiento Permite establecer el nivel de base Es mejor marcador de evolución que CD4

27 Diagnóstico de HIV en período de ventana Antígeno p 24 Si +, confirmar Si -, no descarta infección Problema: complejos ag-ac. Hay que disociar los complejos con acido.

28 Carga viral para HIV: Métodos RT-PCR ( Amplicor) ( NASBA) bdna ( Chiron) Las variaciones > 0.5 logs son significativas

29 Virología Médica, 4 Ed. Ed CORPUS, Cap 22, Diagnóstico de HIV B Bouzas

30 Ante dudas: Que muestra? Cuando obtenerla? Cómo enviarla? Que significa este resultado? Consultar al Virólogo!

31 Siempre hay esperanzas FUTURO: Investigación: vacunas, nuevos antivirales Médicos, docentes : Educar en la prevención!

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