A. hemolíticas extracorpusculares, métodos de estudio:
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- Ignacio Sosa San Martín
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1 ANEMI AS NORMOCÍ TI CAS Anemias hemolíticas A. hemolíticas intracorpusculares, métodos de estudio: MEMBRANOPATIAS: esferocitosis y eliptocitosis hereditaria ENZIMOPATIAS: G6PD y PK HEMOGLOBINOPATIAS: talasemias y hemoglobinopatías estructurales (anemia falciforme) A. hemolíticas extracorpusculares, métodos de estudio: A. H. ALOINMUNITARIA A. H. del RECIÉN NACIDO A. H. AUTOINMUNE A. H. AUTOMEDICAMENTOSA Anemias por aplasia medular
2 CICLO VITAL DE ERITROCITO SMF G. Hemo y Globina Bilirrubina+albúmina (plasma) Hb+haptoglobulina (plasma)
3 Anemias hemolíticas ANEMI AS NORMOCÍ TI CAS Hemólisis intravascular: Hb plasma Hemoglobinemia Hemoglobinuria haptoglobina LDH Mec. Disminución vida media: Intracorpusculares MEMBRANOPATIAS ENZIMOPATIAS HEMOGLOBINOPATIAS: Talasemias Estructurales Hemólisis extravascular: BiliRB plasma Bilirrubinemia Esplenomegalia haptoglobina LDH Mec. Disminución vida media: Extracorpusculares INMUNITARIAS NO INMUNITARIAS
4 A. hemolíticas intracorpusculares: membranopatías Pruebas indirectas, no se identifican espectrina y ankirina 1. Pruebas para determinar la fragilidad eritrocitaria A) ROE o FOE B) Prueba lisis en glicerol acidificado (PLGA) Valor normal > 1800 sg (30min) Esferocitosis hereditaria < 1800 sg 2. Prueba de autohemólisis a 37ºC Capacidad de GR para mantener su integridad in vitro tras 24 h (ATP) 3. Prueba de la estabilidad térmica eritrocitaria La membrana resiste aumentos Tª hasta 49ºC. Después poiquilocitos Piropoiquilocitosis congénita (PPC) Tª corporal
5 A. hemolíticas intracorpusculares: enzimopatías G6PD: glucosa 6 fosfato deshidrogenasa PK: piruvato kinasa Métodos cualitativos: prueba de la mancha fluorescente Sangre total + sustratos de la G6PD gota sobre filtro y observación a luz UV (340 nm) la aparición o no de fluorescencia Métodos cuantitativos Se usan diferentes kits comerciales
6 A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías Hb A 1 : 95 98% Hb A 2 : 2 3% Hb F: 0,8 2% Hb S: 0% Hb C: 0% Hemoglobinopatías estructurales: Hb S (anemia de células falciformes) Hb S transmisión autosómica dominante. Hb S funcional hasta desoxigenación. Hb S se demuestra por: Electroforesis de Hb en acetato de celulosa (ph = 8,6) Técnica de falciformación: sangre en medio pobre en oxígeno drepanocitos A. falciforme Método falciformación Gota sangre diluida en un portaobjetos. Cubreobjetos cuyos bordes son sellados. Después incubación 37 ºC 1 h eritrocitos falciformes
7 A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías Talasemias: β Talasemias Talasemia menor β HBA 2 Talasemia mayor (A. de Cooley)
8 A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías Técnicas para el estudio de las talasemias 1. Electroforesis de Hb 2. Cuantificación de la fracción Hb A 2 3. Cuantificación de la Hb fetal (Hb F) 4. Estudio de la estabilidad molecular de la Hb 5. Otros métodos 1. Electroforesis de hemoglobinas Acetato celulosa o geles (gel poliacrilamida, ph = 8,6) Hb A, Hb A 2, Hb F Hb S, Hb E, Hb J (mutantes) 2. Cuantificación de la Hb A 2 Cualitativo o cuantitativo. Cortar tira y medir D.O. Valores normales = 2 3%
9 A. hemolíticas intracorpusculares: hemoglobinopatías 3. Hb F: Método de resistencia a la elución ácida sobre porta Resistencia de la Hb F a la elución cuando un frotis (GR) se somete a ph ácido potente coloración roja Hb F (recién nacido): 50 80% Hb F (< 6 meses): 8% Hb F (> 6 meses): 1 2% (Para Hb A 2 y Hb F existen también métodos automáticos) 4. Estudio de la estabilidad molecular de la hemoglobina a) Método de estabilidad térmica b) Método de estabilidad química Solución de Hb Incuba 2 h 50ºC Cuerpos Heinz Isopropanol 5. Otros métodos a) Azul cresilo brillante (ACB) Cuerpos Heinz (Hb H) = Hb β4 b) Test de falciformación para Hb S
10 A. hemolíticas extracorpusculares A. H. ALOINMUNITARIA A. H. del RECIÉN NACIDO A. H. AUTOINMUNE A. H. AUTOMEDICAMENTOSA Destrucción del GR por fijación de Ac a su membrana. Ac Ag aloac y aloag Estudio de las anemias hemolíticas inmunitarias Prueba de Coombs indirecta o antiglobulina indirecta (PAI) Especificidad de un Ac incompleto que al unirse al Ag in vitro, NO es capaz de aglutinarlo. Se necesita antiglobulina humana para conseguir la aglutinación y comprobar la existencia del Ac. USO: Detectar Ac anti D libres en el plasma de embarazada Rh ( ) con riesgo sensibilización previa. O la presencia de Ag Du (no aglutina con Ac anti D) Prueba de Coombs directa (PAD) Reconoce Ac unidos a la membrana de los GR Antiglobulina + eritrocitos recubiertos de Ac. Aglutinación hemólisis in vivo 1. Anemia hemolítica autoinmune 2. Anemia hemolítica recién nacido
11 A. hemolíticas extracorpusculares Test de Coombs Ac (Ig) unidos a GR Antiinmunoglobunlina muestra humana AGLUTINACIÓN Ac (Ig) libres Hematies del paciente Reacción Ag Ac en membrana AntiIg humana AGLUTINACIÓN
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13 Anemia por aplasia medular Anemia Arregenerativa: RETICULOPENIA Es normocítica y normocrómica Aparece hipersideremia, leucopenia y trombocitopenia Diagnóstico: aspirado medular y/o biopsia Tratamiento: No es maligna transfusiones constantes a veces transplante de M.O.
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