Validación de métodos analíticos
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- Celia Rivas Moreno
- hace 6 años
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1 Problemática y alternativas tecnológicas para la remoción de arsénico en la obtención de agua potable Validación de métodos analíticos Basado en la Guía Eurachem
2 Validación de métodos analíticos Principios de la práctica analítica 1-Las mediciones analíticas se deberían hacer para satisfacer una necesidad acordada u objetivo definido. 2-Las mediciones analíticas se deberían realizar usando métodos y equipamiento que han sido probados para asegurar que se ajustan al propósito de la medición.
3 Validación de métodos analíticos Principios de la práctica analítica 3-El personal dedicado a las mediciones analíticas debería ser calificado y competente para realizar la tarea (y demostrar que pueden realizar el análisis correctamente). 4-Debería haber un ensayo independiente de forma regular del desempeño técnico de un laboratorio.
4 Validación de métodos analíticos Principios de la práctica analítica 5-Las mediciones analíticas realizadas en un lugar deberían ser consistentes con aquellas realizadas en otro lugar. 6-Las organizaciones que hacen mediciones analíticas deberían tener procedimientos de control de calidad y de aseguramiento de la calidad bien definidos.
5 Validación de métodos analíticos Qué es validación de un método? Es el proceso de demostración experimental y documentada de que un método analítico es adecuado para una aplicación específica. Evaluar las capacidades de desempeño del método.
6 En la validación asumimos que Validación de métodos analíticos Se están usando equipos que están trabajando correctamente y que han sido calibrados adecuadamente. El analista que realiza los estudios es competente en ese campo de trabajo y tiene el conocimiento suficiente.
7 Validación de métodos analíticos Por qué es necesario validar un método? Porque la medición analítica es importante (costo, salud, remediación, legal, etc.) Por la obligación profesional del analista
8 Validación de métodos analíticos Cuándo debería validarse un método? -Cuando se desarrolla un método nuevo -Cuando se revisa un método ya establecido para mejorarlo o aplicarlo a un nuevo problema -Cuando el control de calidad indica que el método en uso está cambiando con el tiempo -Cuando se usa un método ya establecido en un laboratorio diferente o con diferente analista o con diferente instrumental -Para demostrar la equivalencia entre 2 métodos, por ejemplo, un método nuevo y uno establecido en una norma
9 Grado de validación Validación de métodos analíticos Validación parcial Para los métodos normalizados (NMX, NOM, AOAC, EPA, FDA, etc.). Validación completa Para los métodos nuevos, ya que no existen datos de validaciones previas.
10 Validación de métodos analíticos Cómo se valida un método? Verificando sus parámetros de desempeño. - Límite de detección - Límite de cuantificación - Intervalo de trabajo y ámbito lineal - Exactitud - Precisión - Medición de la incertidumbre - Sensibilidad - Robustez - Recuperación
11 Validación de métodos analíticos Los parámetros de desempeño de un método Límite de detección Es la menor concentración del analito que puede detectarse en una muestra, pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones establecidas de la prueba. En el análisis de trazas, es importante saber cuál es la concentración más baja que puede detectarse confiablemente por el método.
12 Límite de detección Validación de métodos analíticos Para un resultado analítico que es muy cercano al valor del blanco, se plantea la duda de si el valor corresponde a valores aleatorios del blanco o a la presencia real del analito. La señal de fondo es producida por el blanco y exhibe ruido. El límite de detección (LD) corresponde a una señal k veces la desviación estándar del ruido de fondo.
13 Límite de detección Validación de métodos analíticos Los valores por encima del LD pueden ser atribuídos a la presencia del analito y los valores por debajo del LD son indicativos de la ausencia de analito en cantidades detectables. DL = X bl + KS bl Donde, X bl : media de las mediciones del blanco k = Factor numérico de acuerdo al nivel de confianza deseado. Según la Guía Eurachem, puede ser 3. S bl = desviación estándar de las mediciones del blanco.
14 Límite de cuantificación Validación de métodos analíticos Es la menor concentración de un analito que puede determinarse con una precisión aceptable (repetibilidad) y exactitud bajo las condiciones establecidas de la prueba. También se ha definido como el contenido igual o mayor que el menor punto de concentración en la curva de calibración.
15 Límite de cuantificación Validación de métodos analíticos QL = X bl + KS bl Donde, X bl : media de las mediciones del blanco K = Es un factor numérico elegido de acuerdo al nivel de confianza deseado, siendo k= 5, 6 ó 10. S bl = desviación estándar de las mediciones del blanco.
16 Validación de métodos analíticos Intervalo de trabajo y ámbito lineal La linealidad de un método se define como su aptitud para obtener resultados proporcionales a la concentración de analito. El rango lineal es el rango de concentraciones del analito para las cuales el método brinda resultados proporcionales a la concentración. En el extremo inferior del rango de concentraciones, los factores limitantes son los valores del LD y/o del límite de cuantificación. En el extremo superior del rango de concentraciones, las limitaciones aparecen por efectos varios que dependen de la respuesta del instrumento
17 Exactitud Validación de métodos analíticos Es la proximidad de concordancia entre el resultado de una medición y el valor de referencia aceptado. Expresa la cercanía de un resultado al valor verdadero. Veracidad (certeza): Es la expresión de que tan cercana se encuentra la media de un conjunto de resultados (producidos por el método) respecto del valor real. Precisión: Es una medida de que tan cercanos están los resultados unos de otros. Describe la dispersión de los resultados.
18 Validación de métodos analíticos Veracidad (certeza): La veracidad se expresa en términos de sesgo. El sesgo caracteriza el error sistemático en un procedimiento analítico dado. El sesgo es la desviación (positiva ó negativa) de la media de los resultados analíticos del valor verdadero (conocido o asumido). Material de referencia certificado (CRM) Se realizan un mínimo de 10 repeticiones del ensayo 3 días consecutivos, y se compara el promedio de los valores obtenidos (X) con el valor de referencia certificado (μ). s = X - μ
19 Precisión Validación de métodos analíticos Repetibilidad (RSD, %) Reproducibilidad (RSD, %) Proximidad de la concordancia entre los resultados de las mediciones sucesivas del mismo mensurando, realizadas bajo las mismas condiciones de medición. Proximidad de la concordancia entre los resultados de las mediciones del mismo mensurando, con las mediciones realizadas haciendo variar las condiciones de medición. Condiciones de medición: procedimiento de medición, el analista, el laboratorio, el equipo y los intervalos de tiempo.
20 Precisión Validación de métodos analíticos n = 10 Repetibilidad (RSD, %) Reproducibilidad (RSD, %) RSD (%) = (Desviación estándar / Promedio) * 100 Criterio: Si la reproducibilidad está por abajo del 10% de la repetibilidad, se considera que la reproducibilidad es aceptable.
21 Medición de la incertidumbre Validación de métodos analíticos Es una desviación estándar o un intervalo de confianza y su estimación toma en cuenta todos los efectos reconocidos que operan sobre el resultado. Sensibilidad Es el cambio de la respuesta del instrumento que se corresponde con el cambio de la concentración del analito. La sensibilidad es la pendiente de la curva de calibración, y cuanto mayor es la pendiente, más sensible es el método.
22 Recuperación Validación de métodos analíticos Es la fracción del analito adicionada a una muestra de prueba (fortificada o spiked ) antes del análisis, que es determinada de forma efectiva por el método. % R = (CF - CU) / CA * 100 Donde: CF = Concentración del analito medida en la muestra fortificada CU = Concentración de analito medida en la muestra sin fortificar CA = Concentración de analito adicionada.
23 Validación de métodos analíticos Recomendaciones cuando se usa un método validado 1- El analista debe familiarizarse completamente con el método antes de usarlo por primera vez. a) Debe determinar al menos el límite de detección, la repetibilidad, reproducibilidad y rango lineal de trabajo. b) Debe conocer la teoría del método, identificar los puntos sensibles. c) Considerar la estabilidad de los reactivos, disoluciones, etc.
24 Validación de métodos analíticos Recomendaciones cuando se usa un método validado 2- Evaluar cuántas muestras es conveniente procesar al mismo tiempo. Es mejor analizar adecuadamente pocas muestras, que tratar de analizar un gran número de muestras y tener que repetir la mayoría de ellas. 3- Asegurarse de que se tiene disponible todo lo que se necesita para llevar a cabo el método antes de iniciar el trabajo. Esto implica reunir el conjunto apropiado de equipos, reactivos y patrones.
25 Validación de métodos analíticos Muchas gracias!
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