Métodos de valoración de la toxicidad. Ana Ruiz Nuño

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1 Métodos de valoración de la toxicidad Ana Ruiz Nuño

2 Objetivos Conocer toxicidad, efectos y mecanismos de acción de los xenobióticos sobre seres vivos Evaluar riesgo de exposición en población Combatir efectos tóxicos

3 Métodos de valoración de la toxicidad Criterios de unificación E. Letales agudos E. Irreversibles no letales por 1 exposición E. Graves por exposición repetida o prolongada E. Corrosivos E. Irritantes E. Sensibilizantes E.Carcinogénicos E. Mutagénicos E. Teratogénicos y reproductivos E. Ambientales (ecotoxicología)

4 Métodos de valoración de la toxicidad Tipos de Estudios Previsiones teóricas Estudios retrospectivos (Toxicidad humana estimada) Ensayos con animales y plantas Riesgo para la Población (incidencia) Efectos Toxicidad Mecanismo de acción

5 Métodos de valoración de la toxicidad Plantas Capacidad metabólica de retener sustancias tóxicas Incidencias para humanos y animales Límite máximo de residuos (plaguicidas) Método de Repetto y Sanz (1977) Método de Reiss

6 Animales Parámetros experimentales a determinar: -Especie animal animales pequeños, económicos -Número y grupos de animales más de una especie animal -Vía de administración del xenobiótico tipo producto, posible vía abs. -Tiempo de duración del estudio agudo, por dosis repetidas, crónico

7 Métodos de valoración de la toxicidad Animales Factores para determinar la especie animal *Efectos de xenobióticos V.O. ó V.P. *Estudios de administración tópica *Estudios de sensibilización

8 Métodos de valoración de la toxicidad Animales Personal cualificado GLP (Buenas prácticas de laboratorio) Especies animales para investigación Infraestructuras adecuadas Establecimiento de P.O.S. Reducción Regla de las 3R Refinamiento Reemplazo

9 Animales Parámetros experimentales a determinar: -Especie animal animales pequeños, económicos -Número y grupos de animales más de una especie animal -Vía de administración del xenobiótico tipo producto, posible vía abs. -Tiempo de duración del estudio agudo, por dosis repetidas, crónico

10 Toxicidad Aguda Métodos de valoración de la toxicidad Definición DL DL 50 DL DL Máx DL DL Mín (24 hrs,, 7, 15 y 30 días) Muy tóxica 25 mg/kg Tóxica 250 mg/kg Nociva 2000 mg/kg Sin toxicidad aguda 5000 mg/kg CL CL 50

11 Métodos de valoración de la toxicidad Toxicidad Crónica Definición: Toxicidad subcrónica o de dosis repetidas (10% de la vida del animal, de 1 a 3 meses) Toxicidad crónica (3 meses a años, 90 d estudio histológico) Parámetros de Valoración Aspecto físico Comportamiento Exámenes físicos Hematología Bioquímica sanguínea Orina Autopsia Histopatología

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13 Métodos alternativos Definición Tipos de métodos Estudios in vivo Manejo de información Diseños estadísticos Modelos matemáticos (QSAR) Retrospecivos Modelos de simulación Toxicovigilancia Estudios en Humanos Voluntarios sanos Órganos perfundidos Baño de órganos Técnicas in vitro Cultivos de órganos Cultivos celulares Modelos subcelulares + Estudios in vitro Sobrevaloración

14 Ensayos especiales Alteraciones mutagénicas Alteraciones carcinogénicas Toxicología de la reproducción Ensayos de comportamiento

15 Alteraciones mutagénicas Clasificación Células diana (somáticas, germinales) Nivel de afectación (cromosómicas, génicas) Mecanismo de producción (espontáneas, inducidas) Prueba de Ames (histidina) bacterias Métodos de valoración In vitro Cromosómicos In vivo A corto plazo: micronúcleos A largo plazo

16 Mutaciones de alteraciones cromosómicas

17 Mutaciones génicas por desfase

18 Alteraciones mutagénicas Clasificación Células diana (somáticas, germinales) Nivel de afectación (cromosómicas, génicas) Mecanismo de producción (espontáneas, inducidas) Prueba de Ames (histidina) bacterias Métodos de valoración In vitro Cromosómicos In vivo A corto plazo: micronúcleos A largo plazo

19 Test de Ames: bacterias Cepas mutantes: no crecen en medio deficiente en histidina Mutágenos revierten la mutación original y bacteria vuelve a crecer en ese medio Salmonella typhimurium

20 Ensayo de alteraciones cromosómicas

21 Ensayo de micronúcleos

22 Alteraciones mutagénicas Clasificación Células diana (somáticas, germinales) Nivel de afectación (cromosómicas, génicas) Mecanismo de producción (espontáneas, inducidas) Prueba de Ames (histidina) bacterias Métodos de valoración In vitro Cromosómicos In vivo A corto plazo: micronúcleos A largo plazo

23 Alteraciones carcinogénicas Fases Producción del daño genético Reproducción de la célula iniciada Expresión de las Características fenotípicas Valoración in vitro de transformación celular (líneas celulares) in vivo de carcinogénesis (roedores)

24 Fases del tumor

25 Alteraciones carcinogénicas Fases Producción del daño genético Reproducción de la célula iniciada Expresión de las Características fenotípicas Valoración in vitro de transformación celular (líneas celulares) in vivo de carcinogénesis (roedores)

26 Toxicología de reproducción Teratología, toxicología desarrollo, toxicología reproducción Toxicología reproducción Trastornos fertilidad Afección de la Espermatogénesis y ovogénesis de desarrollo Métodos de valoración Alteraciones del desarrollo embrionario Disminución crecimiento, peso corporal Defectos estructurales (teratogénicos) Defectos funcionales Huevos de aves animales Segmento I (fertilidad, reproducción) Segmento II (teratogénesis) Segmento III (perinatal)

27 Ensayos de comportamiento Medir aprendizaje animal y alteraciones que sufre Laberinto: ingenio, memoria Resitencia a fatiga Actímetro: comportamiento exploratorio Celulas fotoeléctricas: comportamiento exploratorio Analgesímetro: sensibilidad térmica Caja de dos compartimentos

28 Estimación del Riesgo Riesgo Determinación del riesgo Estimación del riesgo 1 a 5 en humanos Factores de seguridad 1000 en animales Extrapolación a la especie humana Normas o recomendaciones de exposición y uso Comparación con otras especies Litchfield 1992, 89 efectos en 6 tox. Correl.. log Peso v/s log DL 50 Krasorskii 1976, 279 pdtos,, sp Correl.. DL 50 exp / DL min hum Edwards y col. 1984, 7 pdtos. intox.. UK

29 Etapas en la estimación del riesgo

30 Estimación del Riesgo Riesgo Determinación del riesgo Estimación del riesgo 1 a 5 en humanos Factores de seguridad 1000 en animales Extrapolación a la especie humana Normas o recomendaciones de exposición y uso Comparación con otras especies Litchfield 1992, 89 efectos en 6 tox. Correl.. log Peso v/s log DL 50 Krasorskii 1976, 279 pdtos,, sp Correl.. DL 50 exp / DL min hum Edwards y col. 1984, 7 pdtos. intox.. UK

31 Bibliografía Toxicología Fundamental de Manuel Repetto, 3ª Edición, editorial Diaz de Santos Toxicología avanzada de Manuel Repetto. Ediciones Diaz de Santos Introducción a la toxicología de los alimentos. T. Shibamoto Fundamentos de ciencia toxicológica de José Bello Gutiérrez y Adela López de Cerain Salsamendi

32

33 Cromosomas-Meiosis y mitosis

34 Mitosis y meiosis

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