Genética en el diagnóstico de la enfermedad celiaca. Dra. Nadia Gerhardt
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- José Ángel Padilla Salinas
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1 Genética en el diagnóstico de la enfermedad celiaca Dra. Nadia Gerhardt
2 HLA- características Es poligénico; está constituido por varios genes clasificados en tres regiones.
3 HLA- características Es poligénico; está constituido por varios genes clasificados en tres regiones. Son altamente polimorficos, existen múltiples alelos para cada locus.
4 HLA- características Es poligénico; está constituido por varios genes clasificados en tres regiones. Son altamente polimorficos, existen múltiples alelos para cada locus Presentan un fuerte desequilibrio de ligamento en el cual algunos combinaciones de alelos se heredan juntos con más frecuencia de los esperado al azar.
5 HLA Clase I -estructura Los heterodímeros HLA de clase I están constituidos por una cadena α pesada y una molécula pequeña β2-microglobulina cuyos genes mapean en el cromosoma 15.
6 HLA Clase II- estructura Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadas por los genes en la región HLA-D que comprende tres subregiones HLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1) Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos) Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
7 HLA Clase II- estructura Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadas por los genes en la región HLA-D que comprende tres subregiones HLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1) Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos) Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
8 HLA Clase II- estructura Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadas por los genes en la región HLA-D que comprende tres subregiones HLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1) Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos) Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
9 HLA Clase II- estructura Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadas por los genes en la región HLA-D que comprende tres subregiones HLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1) Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos) Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
10 HLA Clase II- estructura Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadas por los genes en la región HLA-D que comprende tres subregiones HLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1) Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos) Región D Subregión Q Cadena α Cadena β
11 HLA Clase II- estructura Los heterodímeros HLA de clase II ( cadena α y β) son especificadas por los genes en la región HLA-D que comprende tres subregiones HLA-DP (DPA1 y DPB1), DQ (DQA1 y DQB1) o DR (DRA1 Y DRB1) Nomenclatura: HLA DQ A1/B1* (números de alelos) DQB1*02
12 HLA- Función Las molécules de HLA son capaces de unirse a los péptidos antigénicos y presentarlos a los LT. Las moléculas de clase I/ antígenos endógenos son reconocidos por los LT CD+8, desencadenando una rta citotóxica. Los heterodímeros HLA clase II/ antígenos exógenos son reconocidos por los LT CD4+ y disparan una respuesta humoral. Las moléculas de HLA de clase I se expresan de manera constitutivas en practicamente todas las células nucleadas, mientras que las moleculas de clase II normalmente se expresan solo en células dendríticas, LB, macrófagos y algunos otros tipos celulares
13 HLA- Función
14 HLA DQ2/DQ8 Población general DQ2/DQ8 EC Alrededor del 30% de la población general presenta las moléculas DQ2/DQ8 sin enfermedad, solo un 3% desarrolla intolerancia al gluten.
15 DQ2/DQ8 El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismo cromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomas homologos (trans)
16 DQ2/DQ8 El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismo cromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomas homologos (trans) cis
17 DQ2/DQ8 El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismo cromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomas homologos (trans) cis trans HLA-DQ2.5 HLA-DQ8
18 DQ2/DQ8 El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismo cromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomas homologos (trans) Numerosos estudios muestran que la homocigosis DQB1*02 (DR3/DR3 o DR3/DR7) está asociado a un mayor y más agresivo riesgo de EC. La mayoría de los pacientes celiacos DQ2/DQ8 negativos (5%) presentan moléculas DQ2.X, codificadas por DQB1*02 de alto riesgo en ausencia de DQA1*05. Muy raramente los pacientes celiacos llevan moléculas DQ diferentes:dqx.5 el heterodimero codificado por el alelo DQA1*05 en ausencia de DQB1*02 o DQB1*0302. DQX.x moléculas formadas por una cadena α DQA1 *05 y una cadena β DQB1 *02 o *0302
19 DQ2/DQ8 El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismo cromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomas homologos (trans) Numerosos estudios muestran que la homocigosis DQB1*02 (DR3/DR3 o DR3/DR7) está asociado a un mayor y más agresivo riesgo de EC. La mayoría de los pacientes celiacos de los DQ2/DQ8 negativos (5%) presentan moléculas DQ2.X, codificadas por DQB1*02 de alto riesgo en ausencia de DQA1*05. Muy raramente los pacientes celiacos llevan moléculas DQ diferentes:dqx.5 el heterodimero codificado por el alelo DQA1*05 en ausencia de DQB1*02 o DQB1*0302. DQX.x moléculas formadas por una cadena α DQA1 *05 y una cadena β DQB1 *02 o *0302
20 DQ2/DQ8 El heterodímero HLA DQ2 puede expresarse junto en el mismo cromosoma (configuracion cis) o separados en los dos cromosomas homologos (trans) Numerosos estudios muestran que la homocigosis DQB1*02 (DR3/DR3 o DR3/DR7) está asociado a un mayor y más agresivo riesgo de EC. La mayoría de los pacientes celiacos de los DQ2/DQ8 negativos (5%) presentan moléculas DQ2.X, codificadas por DQB1*02 de alto riesgo en ausencia de DQA1*05. Muy raramente los pacientes celiacos llevan moléculas DQ diferentes:dqx.5 el heterodimero codificado por el alelo DQA1*05 en ausencia de DQB1*02 o DQB1*0302. DQX.x moléculas formadas por una cadena α DQA1 *05 y una cadena β DQB1 *02 o *0302
21 Contribución de los genes HLA en EC DQ2.5 β α DQ8 DQ2.x DQX.5 DQX.x DQB1*02 DQA1*05 β α β α DQB1*0302 DQA1*03 DQB1*02 DQA1 *05 DQB1 *02 y *0302 DQA1*05 DQB1 *02 o *0302 DQA1 * % 5-10 % 5 % Muy raramente
22 Otros genes asociados a EC Otros genes están involucrados en la susceptibilidad a la EC: se han identificado tres regiones HLA como así tb genes no-hla tales como genes que codifican citoquinas, quimioquinas y sus repectores, móleculas de adhesion celular, activadores de celulas T y B. Sin embargo, su contribución es baja ( alrededor del 15% y no es considerado en el riesgo genético de EC. Solo la tipificación molecular del HLA tiene un rol en el manejo clínico de la enfermedad
23 Utilidad clínica Significado clínico tipificación del HLA DQ2/DQ8 Positivo Indica predisposición genética Diagnóstico en pacientes con: -resultados discordantes serología, biopsia y /o clínica. -pacientes de alto riesgo como familiares de primer grado -pacientes con otras enfermedades patologías de origen autoinmune y no autoinmune (DBT tipo 1, enfermedad tiroidea autoinmune, hepatopatía autoinmune, déficit IgA, síndrome de Down, síndrome de Turner, entre otros) Negativo Excluye la EC Excelente VPN (99%) EC resulta improbable cuando los alelos de predisposición están ausentes.
24 Utilidad clínica
25 Métodos moleculares Cebadores secuencia especifica (sequence-specific primers, SSP) Sonda oligonucleotidos secuencia específica (sequencespecific oligonucleotide probe, SSOP) directo o indirecto Polimorfismo de conformación de la cadena simple (single strand conformation polymorphism, SSCP) Polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción restriction (fragment-length polymorphism, RFLP) Secuenciación Real Time PCR Oligonucleotidos asociado a enzimas (enzyme-linked oligonucleotide assay, ELONA)
26 Olerup SSP DQA1*02,05; DQB1*02,0302 Contiene 17 mezclas de amplificación y detección de los alelos DQA1 y DQB1 relevantes EC y un control negativo. Una combinación de cebadores y mezclas de reacción permite discrimimar los alelos de DQ2 y DQ8 en geles de alta resolución
27 Métodos moleculares Cebadores secuencia especifica (sequence-specific primers, SSP) Sonda oligonucleotidos secuencia específica (sequencespecific oligonucleotide probe, SSOP) directo o indirecto Polimorfismo de conformación de la cadena simple (single strand conformation polymorphism, SSCP) Polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción restriction (fragment-length polymorphism, RFLP) Secuenciación Real Time PCR Oligonucleotidos asociado a enzimas (enzyme-linked oligonucleotide assay, ELONA)
28 Tipaje INNO-LiPA HLA Amplificación múltiplex de los exones 2 a 3 de locus DQB1 del HLA Hibridació reversa Sondas oligonucleótidos específicas sobre la membrana de nitrocelulosa Los productos de la amplificación se hibridan utilizando 1 tira de tipaje que lleva fijadas 37 sondas específicas de secuencia, así como 2 líneas de control Identificación a nivel de grupo de alelos (esto significa las dos primeras cifras posteriores al asterisco en el nombre de un alelo cuando se sigue la nomenclatura estándar para el HLA).
29 Tipaje INNO-LiPA HLA
30 Métodos moleculares Cebadores secuencia especifica (sequence-specific primers, SSP) Sonda oligonucleotidos secuencia específica (sequencespecific oligonucleotide probe, SSOP) directo o indirecto Polimorfismo de conformación de la cadena simple (single strand conformation polymorphism, SSCP) Polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción restriction (fragment-length polymorphism, RFLP) Secuenciación Real Time PCR Oligonucleotidos asociado a enzimas (enzyme-linked oligonucleotide assay, ELONA)
31 Tipaje con detección colorimétrica Amplificación del exones 2 y 3 de locus DQA1 y DQB1 del HLA Hibridación directa
32 Tipaje con detección colorimétrica Amplificación del exones 2 y 3 de locus DQA1 y DQB1 del HLA Hibridació reversa DQ8 DQ2.5 DQ2.5/DQ8
33 Se propuso estudiar n=35 7 Fueron excluidos Biopsia pendientes Fueron estudiados n=28 DQ2/DQ8 positiva Serología Positiva Síntomas n=17 DQ2/DQ8 positiva Serología Positiva Sin Síntomas n=1 DQ2/DQ8 negativa Serología Negativa Sin Síntomas n=4 DQ2/DQ8 positiva Serología negativa Síntomas n= 5 DQ2/DQ8 negativa Serología positiva Síntomas n= 1 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia no concluyente n=0 Biopsia no concluyente n=0 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia Positiva n=15 Biopsia Positiva n=1 Biopsia Positiva n=0 Biopsia Positiva n= 2 Biopsia Positiva n= 0 Diagnostico final: Celiaco:15 No celiaco:1 No concluyente:1 Diagnostico final: Celiaco:1 No celiaco:0 No concluyente:0 Diagnostico final: Celiaco:0 No celiaco:4 No concluyente:0 Diagnostico final: Celiaco:2 No celiaco:2 No concluyente:1 Diagnostico final: Celiaco:0 No celiaco:0 No concluyente:1
34 Se propuso estudiar n=35 7 Fueron excluidos Biopsia pendientes Fueron estudiados n=28 DQ2/DQ8 positiva Serología Positiva Síntomas n=17 DQ2/DQ8 positiva Serología Positiva Sin Síntomas n=1 DQ2/DQ8 negativa Serología Negativa Sin Síntomas n=4 DQ2/DQ8 positiva Serología negativa Síntomas n= 5 DQ2/DQ8 negativa Serología positiva Síntomas n= 1 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia no concluyente n=0 Biopsia no concluyente n=0 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia Positiva n=15 Biopsia Positiva n=1 Biopsia Positiva n=0 Biopsia Positiva n= 2 Biopsia Positiva n= 0 Diagnostico final: Celiaco:15 No celiaco:1 No concluyente:1 11 pacientes cumplen Diagnostico final: Celiaco:1 No celiaco:0 con las No concluyente:0 recomendaciones de ESPGHAN Diagnostico final: Celiaco:0 No celiaco:4 No concluyente:0 Diagnostico final: Celiaco:2 No celiaco:2 No concluyente:1 Diagnostico final: Celiaco:0 No celiaco:0 No concluyente:1
35 Se propuso estudiar n=35 7 Fueron excluidos Biopsia pendientes Fueron estudiados n=28 DQ2/DQ8 positiva Serología Positiva Síntomas n=17 DQ2/DQ8 positiva Serología Positiva Sin Síntomas n=1 DQ2/DQ8 negativa Serología Negativa Sin Síntomas n=4 DQ2/DQ8 positiva Serología negativa Síntomas n= 5 DQ2/DQ8 negativa Serología positiva Síntomas n= 1 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia no concluyente n=0 Biopsia no concluyente n=0 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia no concluyente n=1 Biopsia Positiva n=15 Biopsia Positiva n=1 Biopsia Positiva n=0 Biopsia Positiva n= 2 Biopsia Positiva n= 0 Diagnostico final: Celiaco:15 No celiaco:1 No concluyente:1 Diagnostico final: Celiaco:1 No celiaco:0 No concluyente:0 Diagnostico final: Celiaco:0 No celiaco:4 No concluyente:0 Diagnostico final: Celiaco:2 No celiaco:2 No concluyente:1 Diagnostico final: Celiaco:0 No celiaco:0 No concluyente:1
36 Yo no como pan y por lo tanto el trigo es para mí algo inútil. Los campos de trigo no me recuerdan nada y eso me pone triste. Pero tú tienes los cabellos dorados y será algo maravilloso cuando me domestiques! El trigo, que es dorado también, será un recuerdo de ti. Y amaré el ruido del viento en el trigo. Muchas gracias!!!
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