EXPRESIÓN Y SIGNIFICACIÓN CLÍNICA DE CITOQUINAS EN CARCINOMA DUCTAL DE MAMA.
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- José Ignacio Campos Escobar
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1 EXPRESIÓN Y SIGNIFICACIÓN CLÍNICA DE CITOQUINAS EN CARCINOMA DUCTAL DE MAMA. Francisco Domínguez; Angeles Miranda * ; Francisco Vizoso * ; Noemí Eiró * ; Belén Rodriguez * ; Carlos Miguel Ruiz; Diana Rodriguez; Virgil Nicolae Hutanu. Departamento de Anatomía Patológica, Hospital de Cabueñes. * Unidad de Investigación, Hospital de Jove. Gijón Madrid, 6 de Febrero, 2015
2 INFLAMACIÓN Y CÁNCER Sobrerregulación de cytokinas proinflamatorias IL-1 IL-6 TNF IL-8 GM-CSF MMP9 VEGF Células endoteliales Mediadores proinflamatorios DESARROLLO Y PROMOCIÓN TUMORAL Células epiteliales fibroblastos Angiogénesis IL6-IL17 macrófago Remodelación tisular Inflamación local Thelper/supresoras/citotóxicas IL17
3 OBJETIVOS Valorar expresión global y por los diferentes tipos celulares de IL-1β, IL-5, IL-6 y IL-17, IFN-β y NFκB en tumores de pacientes mujeres con cáncer de mama. Investigar la relación entre la expresión de citoquinas y las características clínico-patológicas y el pronóstico de la enfermedad.
4 MATERIAL Y MÉTODOS (I) Estudio retrospectivo de 108 pacientes, mujeres intervenidas por cáncer ductal invasivo de mama en los hospitales de Jove y Cabueñes (Gijón) entre los años 1992 y 2002, con un seguimiento medio de 173 meses (rango: meses) Estudio inmunohistoquímico Elaboración de matrices tisulares (Microarrays) (Beeker Instruments. Sun Praeri, USA) Inmunotinción (Auto-Stainer. Dako)
5 MATERIAL Y MÉTODOS (II) Anticuerpo primario Referencia Recuperación antigénica Dilución Tiempo de incubación Linker IL-1β NB Bionova ph6 1: NO IL-5 sc-7887 Santa Cruz ph 6 1:50 30 NO IL-6 H3569-B01P Bionova ph6 1: SI IL Abbiotec ph6 1: NO IFNβ T3236 Epitomics ph9 1: NO NFkB Epitomics ph9 1: NO
6 MATERIAL Y MÉTODOS (III) Estudio inmunohistoquímico valoración de resultados. Localización: Células epiteliales, Fibroblastos, CMI SCORE: % de área teñida x Intensidad (0-3) (0-300). IL-1B IL-17 IL-6 INF-
7 RESULTADOS (I) EXPRESIÓN DE LOS FACTORES POR CÉLULAS TUMORALES, FIBROBLASTOS Y CMI
8 RESULTADOS (II) CORRELACIONES ENTRE LA EXPRESIÓN SIMULTÁNEA DE LOS FACTORES A ESTUDIO IL-1B IL-5 IL-6 IL-17 IFN-β NFkB IL-1B IL-5 p:0, IL-6 p:0,173 p:0, IL-17 p:0,115 p<0,0001 p:0, IFN-β p:0,043 p<0,0001 p:0,917 p:0, NFkB p:0,478 p<0,0001 p:0,279 p<0,0001 p<0,
9 RESULTADOS (III) IL-1B e IL-17 - grado histológico indiferenciado ( p=0.010 ) IFN-β y NFkB (p=0,041 y p=0,015) - HER-2 positivos IL-6 (p=0.018) - ganglios negativos Tumores con baja expresión de IL-1B y de IL-17 en fibroblastos tenían una probabilidad significativamente mayor de tener metástasis ganglionares (p=0,029 y p=0,006).
10 RESULTADOS (IV) Mayor probabilidad de SLE y SG en pacientes con valores intratumorales elevados de IL-6 (p=0.003) >Mediana IL6 >Mediana IL6 <Mediana IL6 <Mediana IL6 p< p=0.003 SLE y SG en ganglios negativos según la expresión de IL-6
11 RESULTADOS (V) Menor probabilidad de recurrencias en el subgrupo de pacientes con ganglios positivos y expresión tumoral elevada de IFN-β (p=0.034) SLE y SG según la expresión de IL1-B en fibroblastos estromales
12 CONCLUSIONES (I) 1. Más del 90% de los carcinomas mamarios muestran expresión de las citoquinas por las células tumorales. Sin embargo, ese porcentaje fue menor para los fibroblastos (del 33,3% al 90,7%) y para las células mononucleares inflamatorias (del 38,9% al 89,8%) del estroma tumoral. 2. La expresión de IL-1β e IL-17 en las células tumorales son predictores de alto grado histológico. La expresión de IL-6 predice la no afectación ganglionar. 3. Los valores de score de IFN-β y NFkB se relacionan significativamente con la expresión de HER-2, mientras que los de IFN-β se asocian positivamente con el fenotipo tumoral luminal-b. 4. Los valores altos de expresión de IL-6 en células tumorales, la expresión de IL-1 por los fibroblastos y las células mononucleares inflamatorias (CMIs) del estroma tumoral, y la expresión de IL-5 por las CMIs, se asocian con un pronóstico favorable de las pacientes.
13 MUCHAS GRACIAS
14
15 RESULTADOS
16 CONCLUSIONES
17 Cels T macrófagos Otros tipos Clásica NFκB Alternativa NFκB Tyrosin kinasa JAK/STAT Proliferación Inhibición de la apoptosis Reparación ADN Modulación de la inflamación
18 CONCLUSIONES (II) 3. La expresión de IL-1B e IL-17 en las células tumorales son predictores de alto grado histológico La expresión de IL-6 predice la no afectación ganglionar. 4. Los valores de score de IFN-β y NFkB se relacionan significativamente con la expresión de HER-2, mientras que los de IFN-β se asociaron positivamente con el fenotipo tumoral luminal-b. 5. Los valores altos de expresión de IL-6 en células tumorales, la expresión de IL-1 por los fibroblastos y las células mononucleares inflamatorias (CMIs) del estroma tumoral, y la expresión de IL-5 por las CMIs, se asocian con un pronóstico favorable de las pacientes.
19 INFLAMACIÓN Y CÁNCER Infecciones subyacentes y reacciones inflamatorias en 25% de los casos de cáncer Fallo en control de respuesta inmune Iniciación mutaciones, inestabilidad genética, epigenética Proliferación Respuesta a la reparación tisular Aumento de supervivencia celular Microambiente favorable Angiogénesis Immunosopresión local Metástasis Tomado de Grivennikov et al. 2010
20 DISCUSIÓN Eiró, Vizoso y cols. Describieron la expresión génica de IL-1B, IL-5, IL-6, IL-17, IFN- β y NFkB presente en tumores con alta probabilidad de metástasis hematopoyéticas y expresión de MMP-11 por las CMIs del estroma tumoral, asociándose ese fenotipo de CMIs con una elevada ocurrencia de metástasis y con un perfil inflamatorio relacionado con la agresividad del cáncer de mama
21 DISCUSIÓN Primer análisis por técnica inmunohistoquímica de la expresión de seis citoquinas inflamatorias con relevancia biológica en el cáncer de mama Expresadas por las células tumorales en la mayoría de los casos Variabilidad en su expresión por los fibroblastos y células mononucleares inflamatorias, en algunos casos con valor pronóstico significativo
22 DISCUSIÓN IL-1 facilita el desarrollo de metástasis y la activación de la angiogénesis, tiene efectos dramáticos sobre la generación de células mieloides en la célula ósea y sobre su reclutamiento en los lugares donde anida el tumor.
23 DISCUSIÓN Datos nuevos en la literatura científica que indican que la expresión de IL-1β por las células cancerosas contribuye a la agresividad biológica del tumor, pero su expresión por las celulas del estroma se corresponde con un fenotipo relacionado con menor progresión tumoral
24 DISCUSIÓN La expresión de IL-5 por las CMIs se asoció con mayor probabilidad de supervivencia en el conjunto de las pacientes, y en el subgrupo de pacientes con ganglios negativos, lo que parece indicar que la expresión de esa citoquina por los CMIs puede resultar indicativa de un fenotipo de células inflamatorias de posible efecto antitumoral, a pesar de que su expresión por las células cancerosas tenga otra significación biológica asociada con la agresividad tumoral.
25 DISCUSIÓN Este estudio demuestra una correlación significativa de la expresión de IL-6 con tumores en estadio menos avanzado y con tumores con ganglios negativos. Sus valores elevados de score se asocian con menor supervivencia libre de enfermedad y supervivencia total en el conjunto de pacientes y su expresión por las células cancerosas se asoció con un mayor grado histológico.
26 DISCUSIÓN Los resultados de este estudio muestran una relación significativamente positiva entre los valores elevados de IL-17 y el grado histológico indiferenciado de los tumores. No se encontró asociación significativa de sus valores con el pronóstico de las pacientes.
27 DISCUSIÓN Este estudio demuestra una relación entre la expresión del IFN-β y el status positivo para HER-2, lo que podría reflejar un mecanismo inmunitario de respuesta ante la presencia oncológica. Sus valores elevados se asocian con menor probabilidad de desarrollo de metástasis a distancia en los pacientes con ganglios positivos.
28 DISCUSIÓN El NFkB muestra una elevada expresión en la inmensa mayoría de los carcinomas mamarios. Aunque no se han observado asociaciones significativas entre los valores globales de tinción inmunohistoquímica para las diferentes citoquinas y la expresión MMP-11 por los CMIs, se confirmó el potente valor pronóstico de la expresión de MMP-11 por los CMIs del estroma tumoral.
29 DISCUSIÓN Los valores de score de IL-6 elevados se asociaron con una menor probabilidad de tiempo libre de enfermedad y de supervivencia global en el subgrupo de pacientes con CMIs negativos para las MMP-11. En el subgrupo de pacientes con tumores MMP-11 positivos en el que la mayoría de las pacientes desarrollaron metástasis, la expresión global de IFN-β se asoció significativamente con un pronóstico más favorable. La evaluación de la expresión de estas citoquinas puede mejorar la precisión pronóstica, ya de por sí potente, de la MMP- 11 en el cáncer de mama.
30 DISCUSIÓN La expresión IL-1B por los fibroblastos o por los CMIs mejoró significativamente la evaluación pronóstica en el subgrupo de pacientes con tumores con MICs MMP-11 negativos. La expresión de alguna de estas citoquinas por los tipos celulares podría resultar indicativo de un fenotipo de células estromales asociadas con menor agresividad tumoral.
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