Diagnóstico de laboratorio en Enfermedad Inflamatoria Intestinal

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1 Diagnóstico de laboratorio en Enfermedad Inflamatoria Intestinal XIV Jornada de la Sociedad Médica de Laboratorio Clínico 22 de noviembre 2016 BQ. Carolina Valenzuela B cvalenzu@ispch.cl Jefe Sección Inmunología Laboratorio Nacional y de Referencia Inmunología Subdepto. Enfermedades No Transmisibles

2 Enfermedad inflamatoria intestinal Es una alteración inflamatoria, recurrente y crónica del tracto digestivo Principales formas de EII son la CU y la EC La CU y EC varían en la zona que afectan, la extensión de la inflamación, la lesión tisular resultante y los síntomas asociados

3 CU Inflamación superficial continua y se limita al colon (intestino grueso) EC Inflamación transmural (todas las capas del tejido intestinal), irregular (entremezcla con áreas de tejido sano) y se puede presentar en cualquier parte del tracto digestivo (desde la boca hasta el ano)

4 EC CU Diarrea

5 EII: Colitis ulcerosa y Enfermedad de Crohn Alternan brotes con períodos de remisión, lo que implica una sintomatología intermitente a lo largo del tiempo. Retraso en el diagnóstico Son de limitada eficacia terapéutica (control de la inflamación y efectos de brotes) Deterioro en la calidad de vida del paciente Asociada a un aumento de riesgo a cáncer colorrectal

6 Patogénesis EII : multifactorial Susceptibilidad genética del huésped Disfunción de la barrera intestinal EII Alteración de la regulación del SI Factores ambientales

7 Bacterias penetran la barrera epitelial Montaje de respuesta inflamatoria con un deterioro en la limpieza ( clearence ) Quiebre de la homeostasis

8 Susceptibilidad genética del huésped - Genes asociados a EII, comunes e individuales a CU y EC. - Están asociados a la homeostasis intestinal: -función de barrera intestinal -restitución epitelial -defensa microbiana -regulación de la inmunidad innata -generación de ROS -autofagia -regulación de la inmunidad adaptativa -vías metabólicas - En general el riesgo de las variantes para desarrollar EII es pequeño - EII podría ocurrir cuando múltiples variantes genéticas estén presentes - EII podría ocurrir cuando se presenten factores ambientales en individuos genéticamente susceptibles

9 factores ambientales - Flora comensal (bacterias, virus, hongos) - Patógenos - Antibióticos - Dieta - Tabaco

10 alteración de la regulación de la RI

11 Laboratorio en EII Diagnóstico diferencial con otras patologías: infecciones bacterianas, virales, parásitos, e.celíaca, s.intestino irritable, etc Evaluar condición del paciente: estado nutricional, anemia, alteraciones de la absorción, etc

12 Laboratorio en EII Orientación diagnóstica hacia CU ó EC: anticuerpos que presentan solapamiento; no son lo suficientemente sensibles y específicos en una u otra condición ANCA en suero Evaluar proceso inflamatorio Evaluar respuesta al tratamiento ASCA en suero PCR CALPROTECTINA fecal LACTOFERRINA fecal

13 Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos ANCA clase IgG Anticuerpos dirigidos contra antígenos localizados en el citoplasma de los neutrófilos y monocitos Granulos específicos: -Lisozima -Lactoferrina Citoplasma: -Calprotectina Granulos azurofilos: -Mieloperoxidasa (MPO) -Proteinasa 3 (PR-3) -Proteina bactericida incrementadora de la permeabilidad (BPI) -Elastasa -Catepsina G

14 ANCA clase IgG relación con patologías Vasculitis de vasos pequeños (VAA) Enfermedades Inflamatorias Intestinales (Colitis ulcerosa y Enf. de Crohn) Hepatitis autoinmune Conectivopatías

15 ANCA clase IgG relación con patologías

16 Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos ANCA clase IgG C.Ulcerosa: 40-80% E.Crohn : 5-42% Métodos: IFI en neutrófilos humanos (etanol-formalina) ELISA placa recubierta con proteínas específicas de neutrófilos

17 c-anca ANCA clase IgG IFI : placa neutrófilos fijados en etanol Resultan del artefacto de la fijación con etanol: El patron p-anca ocurre solo cuando los neutrofilos son fijados en etanol, el cual permeabiliza la membrana de los granulos citoplasmáticos y permite que la mieloperoxidasa (ag. principal del p-anca; altamente catiónica) se una a la membrana nuclear la cual tiene carga negativa por el DNA. p-anca Reumatol Clin. 2010;6(3):

18 ANCA clase IgG IFI : confirmación de p-anca en placa formalina Cuando los neutrófilos son fijados en formalina, el patrón p-anca se observa como c-anca, ya que éste reduce la atracción de la mieloperoxidasa hacia el DNA, con lo que permanece en el citoplasma. Reumatol Clin. 2010;6(3):

19 ELISA especificidades ANCA clase IgG Formato panel ANCA (detección de IgG anti- ) 1. PROTEINASA 3 2. LACTOFERRINA 3. MIELOPEROXIDASA 4. ELASTASA 5. CATEPSINA G 6. BPI (Proteina bactericida incrementadora de la permeabilidad)

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21 Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae ASCA clase IgG-IgA A fines de los años 80 se describe el hallazgo de anticuerpos contra S.cerevisiae en el suero de pacientes con EC El método ELISA, considera Acs. dirigidos contra el manano (tipo de carbohidrato derivado de la pared celular) Aproximadamente 2/3 de los pacientes EC con ASCA IgG+, también lo son para ASCA IgA Sólo hasta un 19% de los pacientes EC son ASCA IgA+

22 Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae ASCA clase IgG-IgA E.Crohn : 29-80% C.Ulcerosa: 0 29% Método : ELISA placa recubierta con mananos de S.cerevisiae

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24 Proteína ubicada en el citoplasma principalmente en neutrófilos, con propiedades antimicrobianas, estable, resistente a la proteólisis bacteriana De secreción extracelular en células estimuladas ó liberada cuando hay daño o muerte celular inflamación en el intestino Se detecta en heces Calprotectina fecal El nivel de cuantificación se correlaciona directamente con la intensidad de la reacción inflamatoria

25 Calprotectina fecal Almacenamiento muestra Mantener la muestra recolectada no más de 5 días a 2-8 C Alternativamente, almacenar a -20 C Extracción muestra (sistema estandarizado) Obtención sobrenadante Ensayar calprotectina inmediatamente Almacenar a 2-8 C hasta 5 días ó a -20 C hasta 4 meses.

26 Detección por método ELISA. Calprotectina fecal Es inespecífica. Puede estar aumentada en muchas situaciones: EII, gastroenteritis infecciosa, enterocolitis necrosante, carcinoma colo-rectal. En desordenes funcionales como SII donde no hay daño en mucosa, pero sí presenta diarrea y dolor abdominal, su nivel es normal

27 Calprotectina fecal En pacientes diagnosticados EII, es útil para evaluar la respuesta al tratamiento

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29 GRACIAS!

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