HONGOS CONTAMINANTES COMUNES. Ruby N. Gutiérrez 5.1

Transcripción

1 HONGOS CONTAMINANTES COMUNES. Ruby N. Gutiérrez Medios de Sabouraud y Mycosel - El agar Mycosel contiene cicloheximida y cloranfenicol (antibióticos) que inhiben el crecimiento de casi todas las especies saprofitas de hongos, mientras que el agar Littman contiene estreptomicina y que impide que se rieguen las colonias de las especies saprófitas. - Dematiáceos: se pueden obtener abriendo los platos de medios de cultivo, la semana anterior a la práctica por 15 minutos, exponiéndolos al ambiente y luego incubándolos a temperatura ambiente. - Colonias = contaminantes que pudieran esperarse de un exudado, o cualquier lesión que estuviera en contacto con el aire. - Algunas colonias son de color gris o negro-verdoso. Estas representan la familia Dermatiaceae y suelen constituir alrededor del 50%, o más de los hongos transmitidos por el aire. Las colonias de levaduras que son blandas y pastosas no deben ser numerosas. - Colonias con tinte color verde = Aspergillus o Penicillium. - Características: o Carencia de clorofila. Se alimentan de materia orgánica = Quimioorganótrofos (Heterótrofos) o Eucariotas o Pared celular rígida de polisacáridos, polipéptidos y quitina o Absorben nutrientes mediante enzimas extracelulares o Levaduras estructuras unicelulares que se reproducen por gemación o Presentan talo o micelio, constituidos por hifas (unidad básica) o Talo o micelio Vegetativo (desarrollo, nutrición y fijación) Reproductor (se forman los órganos de reproducción) hifas, levaduras y pseudohifas o Levaduras: talo disociado produce colonias de crec rápido, suave, aspecto similar a bacterias. o Mohos: talo filamentoso aéreo entremezclado más o menos largo o agrupado de manera compacta, de crecimiento lento salvo en los hongos oportunistas. o Dimórficos: hongos que tienen una fase parasitaria levaduriforme (37ºC) y una saprofítica micelial (20-25ºC) - Espora: forma de reproducción asexual en los hongos - Hifas: filamento que forma el tallo o cuerpo de un hongo - Micelio: conjunto de hifas entrelazadas y ramificadas - Conidias: estructura de reproducción asexual en fase micelial de los hongos. Son esporas producidas por hifas especializadas (llamadas conidióforos) mediante estrangulamientos sucesivos en el punto de unión. - Conidióforo: estructura en los extremos de las hifas vegetativas. Dan origen a las conidias. Rhizopus Colonia de rápido crecimiento, de aspecto típicamente algodonoso, de color blanco o blanco ceniza o negruzco dado por los órganos reproductores (hifas). Micelio vegetativo formado por hifas sin septos (cenocíticas) hialinas o ligeramente coloreadas a partir de las cuales se diferencian los conidióforos (esporangioforos) sobre un rizoide típico que le da una apariencia al hongo de los tallos estoloníferos de la fresa. Estos esporangioforos terminan en vesículas (esporangiosporas) variadas en forma; coloreadas o hialinas. Especies de amplia distribución, en todos los ambientes; saprófitas en su mayoría. * Mucor es igual a Rhizopus, sólo que el primero no tiene raicillas*

2 Aspergillus Colonias de crecimiento rápido y aspecto variable, afelpado, pulverulento o algodonoso, de colores diversos que van del blanco al amarillo pálido, del rojo al rojo vinoso o marrón oscuro, de olor característico a moho. Los conidióforos son fácilmente distinguibles del micelio vegetativo, de longitud variable terminando en una vesícula globosa o clavada, rodeada parcial o totalmente, con sus conidias globosas o elipsoidales, hialinas o coloreadas. Género con especies saprófitas y algunas parásitas. Aspergillus fumigatus (el de mayor virulencia dentro del género) y A. flavus, son las que se encuentran vinculadas con patologías. Fusarium Colonias de crecimiento rápido y abundante, generalmente de aspecto algodonoso, de diversos colores que van del blanco, rosado, salmón o violeta cubriendo toda la superficie del medio. Conidióforos simples o ramificados; solitarios o agrupados formando esporodoquios; conidas apicales simples (microconidias) o septadas (macroconidias) típicas de bordes curvados (falcado o apariencia de media luna), con ápices obtusos o agudos, solitarios o en cadenas; produciendo algunas especies, esporas de resistencia denominadas clamidosporas, generalmente globosas, intercalares o terminales. Se les encuentra en todos los ambientes en forma saprófita o parásita.

3 Penicillium Descubierto en 1929 por Alexander Fleming Sólo una especie es patógena: Penicillium marnefeii. Colonias de crecimiento rápido y abundante, de aspecto variable, afelpado, algodonoso o pulverizado, de colores diversos que van del blanco, azul-verdoso a verde olivo. Con o sin producción de exudado, confiriendo o no color al medio de cultivo, de olor fácilmente reconocible a moho. Micelio vegetativo con hifas septadas coloreadas o hialinas; micelio reproductor diferenciado a partir de las hifas vegetativas, formando los conidióforos simples o ramificados simétricos, que dan lugar a las ramas o métulas en cuyos extremos se tienen los esterigmas o fiálides, los cuales sostienen a las conididas dispuestas en cadenas. Conidias unicelulares hialinas o coloreadas, globosas y ovoides, de contorno liso o irregular. Género ampliamente distribuido en todos los ambientes teniendo especies saprófitas y parásitas.

4 LEVADURAS DE IMPORTANCIA CLÍNICA - Medio agar harina de maíz - Poseen crecimiento similar a las bacterias - Se caracterizan por las blastosporas y artrosporas (se dan cuando las hifas se segmentan en células rectangulares de paredes gruesas, de donde resultan esporas asexuales) - Hongos superiores poseen hifas y micelios, mientras que las levaduras poseen pseudohifas y pseudomicelios. Levadura con Azul de Lactofenol Artrosporas Candida albicans Pseudohifas Blastosporas = son esporas asexuales simples que se desarrollan por gemación de la célula madre, y su separación subsecuente del brote. Medio de Sabouraud Clamidospora (TIPICA) = las células de las hifas aumentan de tamaño y se rodean de paredes gruesas. Estas esporas asexuales son resistentes a condiciones ambientales desfavorables y germinan cuando las condiciones se hacen más favorables para el crecimiento vegetativo. Prueba en suero humano = tubo germinativo (UNICA) luego de 2 ó 3 horas en la incubadora Tinción de Gram Tubos germinales Clamidosporas Rhodotorula NARANJA!! API y VITEC = pruebas de azúcares para levaduras Cryptococcus neoformans En pulmones Contagio por excretas de palomas y otras aves Cryptococcus gatis eucalipto. No necesariamente en inmunosuprimidos Microorganismo ENCAPSULADO!! Tinción de Tinta China Tejido infectado

5 Malassezia furfur Pityriasis versicolor / Tinea versicolor Tinción con Azul de Algodón PREGUNTAS 1. Muestras clínicas que podemos procesar para el hallazgo de levaduras: a. LCR b. Sangre c. Esputo d. Biopsias 2. Característica de Cryptococcus neoformans: cápsula 3. Pruebas estudiadas para un diagnóstico rápido de Candida albicans: prueba en suero, ya que nos puede dar tubos germinales en 2 horas a una temperatura de 37 C 4. Pruebas bioquímicas para el diagnóstico de levaduras: a. Azúcares b. Asimilación de carbohidratos 5. Método comercial para pruebas de asimilación de azúcares: Disco de azúcares ESTUDIO DE LOS DERMATOFITOS Los dermatofitos son hongos que afectan solamente los tejidos superficiales queratinizados como la piel, pelo y uñas Tiña el nombre depende del lugar que este afectando. Es lo mismo que mazamorra o pie de atleta Las colonias de los dermatofitos son algonodosas y poseen color Habitats de donde proceden: o Antrofílicos o Zoofílicos o Geofílicos Diagnóstico: o Limpieza con alcohol al 70% o Examen directo KOH 20% Azul de Algodón o Cultivo a temperatura ambiente de 2 a 4 semanas Medio de Sabouraud Medio de Mycosel o Observación Macroscópica = colonias Microscópica = 10x y 40x Trichophyton rubrum MICELIO: crecimiento moderado (14 días); de color blanco con difusión del pigmento; aspecto aterciopelado, algodonoso o granuloso y plano; al reverso de se puede observar la colonia de color rojo. HIFAS: pectinadas y con clamidosporas. Los microconidios son piriformes en forma de lágrima a los lados del filamento; macroconidios escasos, fusiformes, largos, estrechos, en "punta de lápiz". In vitro perfora pelos y produce pigmento en agar papa y harina de maíz.

6 Trichophyton mentagrophytes es el agente responsable más frecuente de pie de atleta. MICELIO: de crecimiento moderado (7 a 10 días); de color blanco marfil; de aspecto polvoriento, granuloso, plano y centro acuminado. HIFAS: en raqueta, astas de ciervo, espirales, zarcillos; microconidios abundantes, en racimos y redondos; macroconidios escasos, en cigarro o salchicha, pared delgada y de 1 a 6 lóculos. In vitro perfora pelos, es ureasa (+). Microsporum canis no suelen afectar las uñas (ni canis ni gypseum) MICELIO: de crecimiento moderado (6 a 10 días); de color blanco amarillento; aspecto velloso, plano, radiado o lanoso; al reverso color anaranjado. HIFAS: en raqueta con clamidosporas y cuerpos nodulares; microconidios ocasionales; macroconidios en huso, extremos afilados, pared gruesa y con 6 o más lóculos. Microsporum gypseum MICELIO: de crecimiento rápido (6 días); de color café canela; aspecto polvoriente, granuloso y plano. HIFAS: con microconidios ocasionales y macroconidios en huso, paredes delgadas y menos de 6 lóculos.

7 PREGUNTAS 1. Significado de: a. Microconidias o microaleurisporas: conidias pequeñas unicelulares. Son estructuras de reproducción asexual en dermatofitos b. Macroconidias o macroaleurisporas: conidias grandes multicelulares c. Septas: paredes transversas que se pueden ver en las hifas septadas. 2. Parte del cuerpo atacada por: a. Microsporum: pelo y piel b. Trichophyton: pelo, piel y uñas c. Epidermophyton floccosum: piel y uñas 3. Tineas: son dermatofitosis. 4. Ejemplos: a. Tinea pedis (pie) b. T. unguium (uña) c. T. corporis (piel) d. T. capitis (cabello) DEMATIACEOS Proceden del ambiente Lesiones = protuberancias que asemejan un coliflor. Examen directo = KOH 20% Colonias de los dematiáceos Los cultivos se realizan en medios como Sabouraud simple o con antibióticos; crecen más rápido en agar papa y fructifican mejor en agar harina de maíz; se desarrollan a la temperatura ambiente o a 37ºC. El crecimiento es lento, en 7 a 12 días se observan colonias de superficie vellosa o algodonosa, de color negro o ligeramente gris verdoso, verde oscuro o café desde una vista superior e inferior del plato petri o tubo de ensayo. Asemejan color centavo chocolate oscuro (CROMOBLASTOMICOSIS) Phialophora Fiálides en forma de florero o botella, son sésiles, de base ancha y cuello estrecho, con collarete terminal en el cual se encuentran las fialosporas, que son ovaladas, hialinas y de pared delgada. Las fialosporas se unen por un material adhesivo y se aglutinan en forma de ramillete.

8 Cladosporium Conidióforos cortos y pigmentados, con formación acropétala de conidios (sólo es terminal) y cada conidio produce al subsecuente por gemación, de manera que forman cadenas. Las cadenas pueden ser cortas, de 3 a 4 esporas y son muy ramificados y con conidios elípticos de tamaño constante. PREGUNTAS 1. Estructuras observadas en los hongos dimórficos: a. Fiálides b. Fialosporas c. Macroconidias d. Conidióforos y conidios 2. Tipos de esporulación a. Cladospórica b. Phialophórica c. Acrotheca 3. Defina: a. Anamorfo: Hongo de reproducción asexual b. Teleomorfo: Hongo de reproducción sexual c. Holomorfo: Hongo de reproducción sexual y asexual 4. Diagnóstico con muestras de: a. Aspirados b. Material de biopsias c. Raspado de piel 5. Estructura microscópica patognomónica para un hongo dematiáceo en el examen directo de la muestra clínica: células furnagoides

9 Hongos dimórficos Son dimórficos porque poseen dos fases: o Vegetativa (micelios) a temperatura ambiente o Levaduriforme (37 C) Histoplasma capsulatum Se encuentra principalmente donde hay guano de murciélago. Descrito primero en Panamá Fase micelial muy infectiva El cultivo se realiza en agar sangre, agar papa, agar con extracto de levadura, sin antibióticos y se coloca a 25ºC durante 6 a 12 semanas. Las colonias son lisas, blanquecinas o de color rosado al principio, después son vellosas y de color blanco o café parduzco. Hifas son largas, ramificadas y septadas; a los lados hay microconidias esféricas. Las macroconidias (CARACTERÍSTICO!!) son equinuladas o tuberculadas, redondeadas o piriformes y nacen en conidióforos tubulares. La conversión a la fase de levadura se logra al sembrar en agar sangre acondicionado de peptona y cisteína, a ph de 7,4 o en medio de Kurung; se colocan a 37ºC y se tapan los tubos para aumentar la tensión de CO2. Al principio aparece pseudomicelio, después la colonia es lisa y se encuentran levaduras al microscopio con blastosporas de cuello estrecho y un solo núcleo. Paracoccidioides brasiliensis PANAMA!! El examen directo con KOH o Lugol se realiza en esputo, exudado o triturado de la biopsia. Se observan levaduras esféricas u ovales de doble pared y con gemación múltiple (UNICA LEVADURA MULTIGEMANTE) Las blastosporas a veces forman cadenas de 4 a 12 esporas adoptando una disposición en "timón de barco" u "orejas de Mickey Mouse"; también puede observarse en frotis y teñirse con Giemsa o Wright. La colonia micelial muestra filamentos septados y ramificados, hifas en espiral, clamidosporas y microaleuriosporas no características. En la fase de levadura se encuentran las células multigemantes

10 Blastomyces dermatitidis Europa, EUA, Asia Para el examen directo se obtiene esputo, lavado bronquial o pus. Se practica con solución salina o KOH. La fase levaduriforme es igual a la de P. brasiliensis. Se observa una levadura con brote germinativo de base muy ancha; la blastospora generalmente crece sin separarse de la célula madre y se presentan en pares. Al principio del cultivo llevado a cabo a 25ºC, el micelio se encuentra fragmentado, después aparecen conidios ovoides o piriformes, laterales o terminales que semejan una "paleta". La colonia a 37ºC es cremosa y plegada, microscópicamente se encuentran levaduras de 8 a 15 um con blastosporas de base ancha. Sporotrix schenkii Dimórfico, pero no sistémico. Afecta al haber pinchanzos de plantas. En el examen directo se pueden encontrar levaduras o cuerpos asteroides en solución salina con 1 gota de formol 10%; que de manifiesto la levadura rodeada por la Inmunoglobulina del huésped. El crecimiento del cultivo se da entre 3 a 5 días en gelosa de Sabouraud y agar sangre a 25ºC. Al principio la colonia es cremosa y brillante, después tornan beige, marrón o negra. A 35-37ºC adopta color gris o crema. En su forma micelial, posee hifas delgadas, septadas y ramificadas; la reproducción es por conidios acrógenos o simpodulosporas que se forman a los lados del filamento y dan la imagen de "duraznos en floración" o conidióforos en forma de margarita.

11 Pneumocystis jirovecii no es dimórfico, pero es sistémico No se puede cultivar Tinción de plata (Gimori) Se creía antes como parásito Trofozoítos = esporas Invade pulmones PREGUNTAS 1. Muestras clínicas para el hallazgo de Histoplasma capsulatum a. Orina b. Esputo c. Biopsia d. Raspado e. Lesiones 2. Población más expuesta a infección por Sporothrix schenckii: jardineros 3. Medios de cultivo adecuados para trabajar hongos dimórficos: a. Littman b. Mycosel c. BHI 4. Características morfológicas de Coccidiodes immitis en ambas fases: a. Fase micelial = hifas con autoconidias intercaladas b. Fase levaduriforme = cridosporas 5. Diferencias entre P. brasiliensis y B. dermatitides en forma de levadura: P. brasiliensis es multigemante 6. Cultivo en lámina, definición y valor en el diagnóstico micológico: sirve para identificar dermatiasis. Se puede hacer en agar harina de maíz o agar dextrosa de papa.

12 Células Vero VIROLOGIA Efecto citopático Ojo de búho por CMV En infección por CMV se observan células más grandes que las normales, con inclusiones intranucleares basofílicas. Dicha inclusión tiene apariencia de un "ojo de búho". El CMV es un virus de ADN, por ello su daño es a nivel nuclear. Cuerpos de Negri Sucede por Rabdovirus. En esta muestra de tejido cerebral se observa la formación de inclusiones intracitoplasmáticas conocidas como "cuerpos de Negri". Coilocitos

13 Cuerpo de Cowdry Dilución del suero del paciente Se colocan microplatos con cultivo de células, se les añade a cada uno una cantidad constante del virus y luego el suero del paciente. Si el paciente tiene anticuerpos para el virus se evitará la formación de Placas líticas (se observan como manchas transparentes en el medio azul). A mayor concentración de suero del paciente, mayor cantidad de anticuerpos y menor formación de Placas líticas. Dilución de una suspensión viral En este caso se toma la muestra al paciente, se hace una suspensión del virus de la muestra y luego se hacen varias diluciones las cuales se añaden a este medio células cultivadas. En este caso, a mayor dilución de la suspensión viral, menor será la formación de las Placas líticas (las placas líticas son producto del efecto del virus sobre las células).