FACTORES QUE AFECTAN LA TASA DE PREÑEZ EN RECEPTORAS DE EMBRIONES PRODUCIDOS IN VITRO Y TRANSFERIDOS A TIEMPO FIJO.

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL CÓRDOBA (IRAC) FACTORES QUE AFECTAN LA TASA DE PREÑEZ EN RECEPTORAS DE EMBRIONES PRODUCIDOS IN VITRO Y TRANSFERIDOS A TIEMPO FIJO. Martin Pelizzari. Trabajo Final Para optar al Grado Académico de Especialista en Reproducción Bovina Córdoba

2 INDICE 1. RESUMEN INTRODUCCIÓN HIPÓTESIS DE TRABAJO OBJETIVO GENERAL OBJETIVOS ESPECÍFICOS MATERIALES Y MÉTODOS ANIMALES Y LUGAR DE TRABAJO DETERMINACIONES O TRATAMIENTOS ANÁLISIS DE DATOS RESULTADOS DISCUSIÓN CONCLUSIONES BIBLIOGRAFIA

3 1. RESUMEN El objetivo de este trabajo fue evaluar los diferentes factores que afectan el establecimiento de la preñez en receptoras de embriones producidos in vitro y transferidos a tiempo fijo. Los registros para este trabajo fueron recogidos de trabajos realizados en las provincias de Córdoba, Santiago del Estero, Corrientes y Santa Fe. En el estudio se analizaron los datos de 4214 transferencias de embriones a tiempo fijo, producidos in vitro por el laboratorio Biogen Argentina S.A. en el periodo comprendido entre Noviembre de 2012 y diciembre de Se analizaron los datos por regresión logística. La variable dependiente fue tasa de preñez y las variables independientes, se clasificaron en tres tipos:1) Factores relacionados a la receptora; 2) Factores relacionados al tratamiento de sincronización de la ovulación y 3) factores que dependen de la transferencia de los embriones. En el análisis de los factores relacionados a la receptora y el ambiente, se encontró una menor tasa de preñez en las receptoras que estaban con una condición corporal 4,5. En los factores relacionados al tratamiento de sincronización de la ovulación se encontró que cuando se utilizó el cipionato de estradiol (ECP) como inductor de la ovulación, se obtuvo mayor tasa de preñez que en los tratados con benzoato (EB) o GnRH. Finalmente, se evaluaron los factores relacionados al operario donde se encontró que cuando el lugar de deposición fue en el tercio anterior del útero (Alta) y la clasificación fue buena resultaron en mayor tasa de preñez. En síntesis, factores relacionados a la receptora de embriones y el ambiente, tratamiento de sincronización y la técnica de transferencia afectan significativamente la tasa de preñez en receptoras de embriones producidos in vitro y transferidos a tiempo fijo. Palabras clave: Transferencia de embriones, sincronización de la ovulación, Tasa de preñez, estradiol, GnRH. 3

4 2. INTRODUCCIÓN La transferencia de embriones bovinos está disponible comercialmente hace más de cuatro décadas (Thibier, 2003). Esta es utilizada con mayor frecuencia en cabañas de reproductores, pero es una herramienta que está al alcance para todos los productores que deseen utilizarla (Burnside y Smith, 1993). La situación actual de la ganadería exige eficiencia. Cuando se llegó al máximo de producción en una superficie, se puede recurrir al valor agregado. Este estaría dado por la genética y es allí donde las nuevas biotecnologías juegan un rol preponderante (Burnside y Smith, 1993). Un programa de transferencia de embriones es una herramienta que permite multiplicar rápidamente animales de alto valor genético. Este está compuesto de donantes que aportan su genética y de receptoras, las cuales son una parte muy importante porque deben quedar preñadas, llevar a término la gestación, criar y destetar un ternero cuyo potencial genético es superior. Además debería volver a ciclar para recibir otro embrión en la próxima temporada reproductiva. La producción mundial de embriones in vitro ha crecido en los últimos años. El reporte del año 2013 registra un incremento del 16,7 % con más de embriones colectados y más de embriones transferidos (Perry, 2014). Sudamérica produce el 72,7 % de los embriones in vitro producidos en el mundo, de los cuales fueron en Brasil y 3278 en Argentina (Perry, 2014). Diversos factores, ya sean estos de las receptoras y el ambiente, del tratamiento de sincronización o los que dependen de la transferencia de los embriones, hacen al éxito de un programa de transferencia de embriones in vitro. Detectar el momento del celo en una receptora es clave, para asegurar sincronía entre esta y el embrión que recibirá y así tener mayor chances de obtener una preñez. La obtención de tasas aceptables de preñez por medio de transferencia de embriones depende parcialmente de que el celo de las receptoras y donantes este dentro de una sincronía de 24 h (Rowson et al., 1972). En un estudio (Hasler, 2001) se clasificaron las receptoras de acuerdo al día del ciclo estral en que fueron transferidas con un embrión (6, 7 u 8 días post-estro). La tasa de preñez fue 4

5 significativamente mayor en el día 7, comparado con el día 6 u 8. Sin embargo en otros dos estudios de Hasler (Donaldson, 1985; Putney et al., 1988; Schneider et al, 1980) no se encontraron diferencias entre las receptoras que entraron en celo ± 24 h, con respecto a la donante. En un estudio se analizaron los datos de transferencia de embriones realizadas en receptoras cruza bos indicus en el norte de la provincia de Córdoba, durante el año No hubo diferencia significativa en la tasa de preñez entre los días del ciclo de la receptora, cuando estas fueron transferidas entre los días 6 y 8 de celo (Moreno et al., 1999). Una aplicación práctica a campo, es que una asincronia del celo de la receptora de ±24 h con el celo de la donante resulta en tasas de preñez comparables a cuando receptoras y donantes entran en celo al mismo tiempo (sincronía 0) tanto en embriones frescos como congelados-descongelados. Controlar el desarrollo folicular y la ovulación es una herramienta que ha permitido la expansión de la técnica de transferencia de embriones a tiempo fijo (Bó et al., 2002). El desarrollo de métodos de sincronización de la ovulación que evita la detección de celos para facilitar la transferencia de embriones en forma sistemática se llama transferencia de embriones a tiempo fijo (TETF; Bó et al., 2002). Los tratamientos más utilizados para la TETF consisten en administrar 2 mg de benzoato de estradiol (EB) por vía intramuscular (im) junto con la inserción de un dispositivo con progesterona, en lo que nosotros denominamos el Día 0. En el Día 5 se coloca una dosis lúteolítica de prostglandina F2α (PGF) im y se aplican 400 IU de ecg im. En el Día 8 se extrae el dispositivo y 24 h después se administra 1 mg de EB im. En el Día 17, se realiza la TETF a todas las receptoras que tienen un CL (Bó et al., 2002, 2004). Este protocolo resulta en una tasa de aprovechamiento del 85% y una tasa de concepción del 50%, por lo que se aprovecha al máximo el uso de las receptoras de que se disponen en un establecimiento y sin afectar las tasas de preñez. Existen en la actualidad diversos tratamientos de sincronización de la ovulación a tiempo fijo, que eliminan la necesidad de la detección de celo a diferencia de los protocolos a celo detectado ya sean naturales o sincronizados con PGF. Los protocolos de sincronización de celo de receptoras de TETF más utilizados combinan dispositivos liberadores de progesterona (P4) y EB como sincronizador de una nueva onda folicular, PGF como luteolitico, ecg para estimular el desarrollo del tamaño del folículo dominante. Aunque la proporción de receptoras transferida / tratada y preñadas / transferidas no difirió entre 5

6 grupos, la proporción de receptoras preñadas / tratadas tendió (P = 0.1) a ser mayor en vaquillas tratadas con ecg en el Día 5 frente a Día 8 (47,0% versus 40,7%, respectivamente), (Nasser et al., 2004). Con respecto a los inductores de la ovulación, se realizó un trabajo donde se comparó la utilización de cipionato de estradiol (ECP) o EB como inductores de la ovulación. No se encontraron efectos significativos del tratamiento en la tasa de aprovechamiento [EB: 59/75 (78,7%) vs ECP 58/75 (77,3%)] ni en la tasa de concepción [EB: 13/29 (44,8%) vs ECP: 14/28 (50,0%)]. Estos resultados demuestran que la utilización de ECP al momento del retiro implante es una alternativa confiable para la simplificación de los tratamientos de sincronización de la ovulación en TETF. (Bó et al., 2013). La condición corporal es otro factor importante. La reanudación de los ciclos estrales luego del parto se retrasan cuando la vaca pierde condición corporal durante la preñez. Si durante la preñez la alimentación es adecuada, pero no hay ganancia de peso durante el periodo parto-servicio las vacas presentaran celos pero las tasas de concepción y preñez serán reducidas en caso de recibir un embrión viable por TETF in vitro. Está bien establecido que un CL de buen tamaño secreta mayor progesterona y esto puede tener un efecto positivo en el reconocimiento de la preñez y la consecuente tasa de preñez en programas de TE. (Baruselli et al., 2010). En receptoras de embriones Bos indicus x Bos Taurus sincronizadas, una asociación positiva fue encontrada entre el área del CL y concentraciones plasmáticas de P4 (Baruselli et al 2000). En el mismo estudio los valores de la concentración de P4 plasmática incremento como el tamaño del CL de <1,5 a >2.0 cm 2.Estos datos están de acuerdo con resultados previos indicando que la estimación por US del CL puede ser usado para predecir la concentración de P4 en plasma y la función luteal. (Kastelic et al. 1990). Cuando receptoras Bos indicus x Bos Taurus fueron clasificadas de acuerdo al área del CL como CL1 (>2.00cm 2 ), CL2 (1,5-2.00cm 2 ), CL3 (<1,5 cm 2 ), las con mayor CL mostraron mayores tasas de concepción que las con CL de menor tamaño (58.4%,41.5% y 31.8% respectivamente; Baruselli et al., 2000). 6

7 La condición corporal es otro factor a tener en cuenta. En un estudio a campo, las receptoras fueron categorizadas según su condición corporal (CC) en una escala de 1 (delgada) a 5 (obesa) al momento de la transferencia de embriones. Las tasas de preñez fueron significativamente mayores en las receptoras cuya CC fue de 3 y 4 que en aquellas con CC 1, 2 o 5. (Tribulo et al., 2008) HIPÓTESIS DE TRABAJO Factores relacionados a la receptora de embriones y el ambiente, tratamiento de sincronización y la técnica de transferencia afectan significativamente la tasa de preñez en receptoras de embriones producidos in vitro transferidos a tiempo fijo OBJETIVO GENERAL Evaluar la influencia de distintos factores que afectan el establecimiento de la preñez en receptoras de embriones producidos in vitro y transferidos a tiempo fijo OBJETIVOS ESPECÍFICOS Evaluar el efecto del tratamiento de sincronización de la ovulación en la tasa de preñez a la TETF de embriones producidos in vitro. Evaluar el efecto de la CC de la receptora en la tasa de preñez a la TETF de embriones producidos in vitro. Evaluar el efecto del tamaño y cantidad de CL en la tasa de preñez a la TETF de embriones producidos in vitro. Evaluar el efecto del estadio del embrión producido in vitro sobre la tasa de preñez a la a TETF. Evaluar efecto del lugar y calidad de la técnica de TE y del operario en la tasa de preñez a la TETF de embriones producidos in vitro. 7

8 3. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. ANIMALES Y LUGAR DE TRABAJO Los registros para este trabajo fueron recogidos de trabajos realizados en las provincias de Córdoba, Santiago del Estero, Corrientes y Santa Fe. En el estudio se analizaron los datos de 4214 embriones producidos in vitro y TETF por el laboratorio Biogen Argentina S.A. en el periodo comprendido entre Noviembre de 2012 y diciembre de DETERMINACIONES O TRATAMIENTOS Antes de la sincronización, todas las receptoras fueron evaluadas por ultrasonografía transrectal (U.S.) para evaluar el estado reproductivo y las que tenían un CL o folículo >10 mm de diámetro fueron seleccionadas para ser sincronizadas por un protocolo de TETF. Por la diversidad de los tratamientos empleados estos fueron agrupados para su análisis en tres grandes grupos, que se detallan a continuación: 1) Tratamientos con dispositivos impregnados de P4 y BE como inductor de la ovulación. Día 0: dispositivo intravaginal impregnado con P4 (Prociclar, Zoovet; Dispocel, Von Franken, o DIB 0.5, Syntex SA, Argentina) y 2 mg de EB marca, 500 µg de cloprostenol (PGF: Ciclase, Syntex SA, Argentina) y 400 UI de ecg (Novormon 5000, Syntex SA, Argentina) en el Día 5 (mitad) o en el día del retiro del dispositivo (final), se retiró el dispositivo con P4 el Día7 u 8 y a las 24 h (Día 8 o 9) se inyecto 1 mg de EB IM. 2) Tratamientos con dispositivos impregnados de P4 y ECP como inductor de la ovulación Día 0: dispositivo intravaginal impregnado con progesterona P4 y 2 mg de EB, una dosis de PGF y 400 UI de ecg en el Día 5 (mitad) o en el día del retiro del dispositivo (final), se retiró el dispositivo con P4 el Día7 u 8 y se inyecto 1 mg de ECP en el momento de la remoción del dispositivo con P4. 8

9 3) Tratamientos con dispositivos impregnados con P4 y GnRH como inductor de la ovulación Día 0; un dispositivo intravaginal impregnado con P4, con o sin una dosis de 100 µg de gonadorelina (GnRH, Gonasyn GDR, Syntex SA). En el Día 5 una dosis de PGF y 400 UI de ecg y se retiró el dispositivo con P4. A las h del retiro del dispositivo se inyecto 100 µg de GnRH. Las receptoras que recibieron GnRH en el Día 0 recibieron además una segunda dosis de PGF 12 h después de la primera. Se definió como Día 0 del ciclo estral de las receptoras a las 48 h de removido el dispositivo con P4 en los tratamientos con EB y ECP como inductores de la ovulación, al momento de la aplicación de GnRH en las tratadas con este tratamiento. El día de la TETF las receptoras fueron evaluadas nuevamente por U.S. para corroborar la presencia o ausencia de uno o más CL, tamaño y lado del mismo (derecho o izquierdo). Las receptoras que tenían uno o más CL >14 mm de diámetro recibieron un embrión, en el cuerno uterino ipsilateral al o los CL. La técnica que se realizo es no quirúrgica transcervical. Los CL fueron clasificados en Calidad 1: >18 mm de diámetro, Calidad 2: >16 mm y <18 mm de diámetro y Calidad 3: >14 mm y <16 mm. El operario, lugar de la siembra (alta: en el tercio anterior o próxima al ovario; media: en el tercio medio del útero y baja: en el tercio posterior o distal del útero) y dificultad (calificación subjetiva del procedimiento en tres niveles: buena regular o mala) con que se realizó la misma fue registrada. Se clasifico a las receptoras por su condición corporal en la escala 1-5 (1 emaciada- 5 obesa). El diagnóstico de preñez se realizó por U.S. A los 30 días de la T.E ANÁLISIS DE DATOS El análisis estadístico se realizó por regresión logística ajustando un Modelo Lineal Mixto con una distribución binomial y un enlace logit del software Infostat (UNC; 2014). La variable dependiente fue tasa de preñez y las variables independientes, se clasificaron en tres tipos: 1) Factores relacionados a la receptora y su medio ambiente: Cantidad de Cl, Calidad de CL, Categoría de la receptora (vaca seca o vaquillona), Condición Corporal (CC). 9

10 2) Factores relacionados al tratamiento de sincronización de la ovulación: tipo de tratamiento (EB, ECP o GnRH) como inductor de la ovulación y momento de la aplicación de los 400 UI de ecg (mitad o final del tratamiento). 3) Factores que dependen de la transferencia de los embriones: día del ciclo estral de la receptora en el momento de la transferencia, estadio del embrión, calificación y lugar de deposición del embrión y operario. 4. RESULTADOS De los parámetros relacionados con la receptora y su medio ambiente (Tabla 1), no hubo diferencias significativas para los efectos: calidad de CL (P=0,46); cantidad de CL (P=0,26) y categoría de la receptora (P=0,21). Se encontraron efectos significativos del campo (P=0,01, no tabulado) y CC (P=0,01; Tabla 1). Las vacas con CC 4,5 resultaron en menores tasas de preñez en comparación con las con CC de 2; 2,5; 3 y 3,5. De los parámetros relacionados con el tratamiento de sincronización (Tabla 2), no hubo diferencias significativas para el momento en que se aplicó la ecg (P=0,35). Si se encontraron efectos significativos del inductor de la ovulación (P=0,01). Las vacas tratadas con ECP como inductor de la ovulación resultaron en mayores tasas de preñez con respecto a las vacas tratadas con EB o GnRH (Tabla 2). Por último, los factores relacionados con la transferencia (Tabla 3) que no resultaron significativos fueron día del ciclo de la receptora en que se realizó la transferencia (P=0,36), estadio del embrión (P=0,62) y operador (P=0,57). La calificación de la transferencia resulto significativa (P=0,01), resultando la calificación Buena, en la que dio en mayores tasas de preñes en comparación con las Regulares y Malas. Por último, el lugar de la transferencia efecto significativamente la preñez (P=0.0001), siendo las transferencias realizadas en el tercio anterior (Alta) las que resultaron en mayores tasas de preñez. 10

11 Tabla 1. Factores relacionados a la receptora que influyen en las tasas de preñez con embriones producidos in vitro y transferidas a tiempo fijo. Variable Preñadas/transferidas Valor P Porcentaje (%) Calidad del CL / , /380 0,45 37, /43 30,23 Total 1532/ ,71 Numero de CL /3995 0,25 36, /178 38,76 Total 1712/ ,00 Categoría recept. Vacas 654/1834 0,21 35,65 Vaquillonas 220/518 42,47 Total 874/ ,15 Condición Corporal 2 74/225 a 32,88 2,5 502/1434 a 35, /1467 a 0, ,85 3,5 193/532 a 36, /118 a 37,28 4,5 4/20 b 20,00 Total 1387/ ,53 ab Superíndices con diferentes letras difieren significativamente. Tabla 2. Factores relacionados al tratamiento de sincronización de la ovulación en las tasas de preñez de receptoras de embriones producidos in vitro y transferidas a tiempo fijo. Variables Preñadas/transferidas Valor P Porcentaje (%) 11

12 Momento de la Ecg. Final 84/209 0,35 40,19 Mitad 874/ ,14 Total 958/ ,32 Inductor ovulación EB 679/1888 b 35,96 ECP 232/483 a 0, ,03 GnRH 47/129 b 36,43 Total 958/ ,32 ab Superíndices con diferentes letras difieren significativamente. Tabla 3. Factores relacionados al operario en las tasas de preñez de receptoras de embriones producidos in vitro y transferidas a tiempo fijo. Variables Preñadas/transferidas Valor P Porcentaje (%) Lugar de deposición del embrión Alta 649/1545 a 42,00 Media 845/2511 b 0, ,65 Baja 6/35 b 17,14 Total 1500/ ,66 Calificación de la TETF Buena 1448/3849 a 37,62 Regular 52/222 b 0, ,42 Mala 5/31 b 16,12 Total 1505/ ,68 Estadio del embrión (código IETS) 12

13 Mórula (4) 2/6 33,33 Blastocisto temprano (5) 359/957 37,51 Blastocisto(6) 613/1690 0,61 36,27 Blastocisto expandido (7) 484/ ,23 Blastocisto eclosionado(8) 12/32 37,50 Total 1470/ ,80 Ciclo receptora 7 76/192 0,36 39, / ,25 Total 876/ ,37 ab Superíndices con diferentes letras difieren significativamente. 5. DISCUSIÓN Los resultados de este trabajo confirman la hipótesis propuesta. Los factores relacionados a la receptora de embriones y el ambiente, tratamiento de sincronización y la técnica de transferencia afectan significativamente la tasa de preñez en receptoras de embriones producidos in vitro y transferidos a tiempo fijo. De los parámetros relacionados con la receptora y su medio ambiente se encontró que tanto para calidad del CL como para la cantidad de CL no hubo diferencia significativa en la tasa de preñez para estos dos factores. Estos datos no concuerdan con los de Baruselli et al. (2000) que obtuvo mayor tasa de preñez cuando los CL eran Calidad 1. Sin embargo concuerdan con los datos reportados por Bo et al. (2013) donde no se encontraron diferencias en las tasas de preñez entre receptoras cuyos Cl fueron clasificados de la misma manera que en el presente trabajo y recibieron embriones producidos in vivo y congelados/descongelados. Para la categoría de la receptora, no se encontraron diferencias en este trabajo entre vacas y vaquillonas, concordando con lo reportado por Hasler (2001). Finalmente dentro 13

14 de los factores relacionados a la receptora y el ambiente, se encontró diferencia significativa para el factor CC, siendo menor tasa de preñez en la CC 4,5, esto también concuerda con la mayoría de la bibliografía resumida en Bo et al., (2008). En el trabajo mencionado se encontró que la tasa de preñez fue significativamente menor en receptoras con CC de 1, 2 y 5. En el presente trabajo, a pesar que las diferencias no fueron significativas, las receptoras con CC de 2 tuvieron una menor tasa de preñez que las con CC 3, 3,5 y 4. Esto demuestra que las receptoras deben tener una adecuada CC (entre 2,5 y 4) para tener las mejores tasas de preñez y que tanto las receptoras flacas como muy gordas tienen menor fertilidad a la transferencia de embriones. De los factores relacionados al tratamiento de sincronización de la ovulación, cuando se analizó el momento de aplicación de la ecg, no se encontró diferencia significativa en la tasa de preñez. Esto no concuerda con lo reportado por Nasser et al. (2004) que encontró una tendencia a una mayor tasa de preñez cuando la ecg se aplicó en el Día 5 (mitad) del tratamiento, en comparación al Día 8 (final) del tratamiento y por Peres (2011) que encontraron una mayor preñez en las receptoras tratadas con ecg en el Día 5. Sin embargo Baruselli et al. (2010) no encontró diferencias significativas, coincidiendo con los datos de este trabajo. Una posibilidad de la divergencia entre los resultados es que la condición corporal en general de las vaquillonas del experimento de Nasser et al. (2004) y de Bo et al. (2013) es que las receptoras podrían haber estado en menor condición corporal que las receptoras de este experimento. Numerosos trabajos de Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (Bo et al., 2014) demostraron que el efecto de la ecg es mucho más significativo cuando las vacas están en pobre condición corporal, mientras que el efecto no es tan manifiesto cuando las vacas están en buena condición corporal. Otro factor fue el tratamiento de sincronización utilizado. En este trabajo se encontraron mayores tasas de preñez cuando se utilizó el ECP con respecto a las obtenidas cuando se utilizó EB o GnRH. Esto difiere de los resultados de Bó et al. (2013) donde no se encontraron diferencias tanto para aprovechamiento como para tasa de preñez cuando comparo el uso de EB o ECP como inductores de la ovulación. Hay que tener en cuenta que se analizan datos de campo, no de un diseño experimental realizado para comparar distintos tratamientos, por lo tanto es posible que el efecto del 14

15 establecimiento donde se realizaron los tratamientos pueden haber influido sobre estos resultados. Finalmente con los factores relacionados a la técnica de transferencia en si, se encontró una mayor tasas de preñez la transferencia fue realizada en el tercio anterior del cuerno uterino (Alta) y la calificación era buena, demostrando que cuando se realiza la transferencia en las condiciones óptimas se pueden obtener tasas de preñez aceptables. Finalmente, no hubo influencia del estadio del embrión en las tasas de preñez coincidiendo con los datos de Hasler (2001) y no coincidiendo con los de Peres (2011). Este último investigador encontró diferencias es en el estadio del embrión pero hay que tener en cuenta que el trabajo con embriones producidos in vivo congelados/descongelados y los de éste trabajo son embriones transferidos en fresco y producidos in vitro. 15

16 6. CONCLUSIONES Los resultados de este trabajo final confirman la hipótesis propuesta. Factores relacionados a la receptora de embriones y el ambiente, tratamiento de sincronización y la técnica de transferencia afectan significativamente la tasa de preñez en receptoras de embriones producidos in vitro y transferidos a tiempo fijo. Las conclusiones específicas de este trabajo permiten indicar que las siguientes variables afectan las tasas de preñez de embriones producidos in vitro: Condición corporal de la receptora. Tratamiento de sincronización. Lugar de deposición del embrión durante la trasferencia. Calidad de la técnica de transferencia de embriones. 16

17 7. BIBLIOGRAFIA Baruselli P. S., Marques M. O., Carvalho N. A. T., Valentim R., Berber R.C.A., Carvalho Filho A. F., Nasser L.F., Madureira H.E., Costa Neto W. P Follicular dynamics and pregnancy rate in embryo recipient (Bos indicus x Bos taurus) treated with Ovsynch protocol for fixed-time embryo transfer. Acta Scientiae Veterinariae : 216. Baruselli P. S., Martins C. M., Sá Filho M. F., Nasser L.F., Gimenes L.U., Madureira H.E., Bó G Novos avancos nos tratamentos de doadoras e receptoras de embriao bovino. Acta Scientiae Veterinariae. 33: (Supl 1) Baruselli P. S., Ferreira R.M., Sá Filho M. F., Nasser L.F., Rodrigues C.A., Bó G Bovine embryo transfer recipient syncronisation and management in tropical environments. Reprod Fertil Dev. 22: Bó G.A., Baruselli P.S., Moreno D., Cutaia L., Caccia M., Tribulo R., Tribulo H., Mapletoft R.J The control of follicular wave development for self-appointed embryo transfer programs in cattle. Theriogenology, 57: Bo G.A., Moreno D., Cutaia L., Caccia M., Tribulo R.J., Tribulo H., Transferencia de embriones a tiempo fijo; tratamientos y factores que afectan los índices de preñez. Taurus. 21: Bó G.A., Mapletof R., Tribulo H Receptoras. En: Transferencia de Embriones y Nuevas Tecnologías. (Tribulo H., Bó G.A. y Tribulo J.R.). Instituto de Reproducción Córdoba Argentina. p 75 a 104. Bó G., Peres L.C., Pincinato D., Baruselli P., Mapletof R.J Programas de sincronización de receptoras de embriones bovinos. Resúmenes X Simposio internacional de reproducción animal. (4 al 6 de julio Córdoba Argentina). p 269. Burnside E.B. and Smith C Esquemas de selección con rodeos núcleos, MOET y por hermanos para el mejoramiento genético de Ganado bovino de carne. Resúmenes I Simposio Internacional de Reproducción Animal, Córdoba, Argentina. p. 70. Donaldson LE Matching of embryo stages and grades with recipient oetrous synchrony in bovine embryo transfer. Vet Rec Hasler F. H Factors affecting frozen and fresh embryo transfer pregnancy rates in cattle. Theriogenology. 56:

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