Superovulacion de Donadoras de Embriones Bovinos

Transcripción

1 Superovulacion de Donadoras de Embriones Bovinos

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3 Actividad de la Transferencia de Embriones en Bovinos en Sudamérica Gabriel A. Bó, Argentina Luiz F. Nasser, Brazil Joao H. Viana, Brazil Carlos Gutierrez R., Colombia IETS Annual Meeting, Denver, CO, USA, 2008

4 Thibier, 2007

5 In-Vivo Produced Embryos Colombia Uruguay (2005) Thibier, 2007

6 90 % de las Transferencias en el Campo Centros de colección, principalmente para Exportación.

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8 Principal Breeds of Donor Cows in Argentina (80% Beef 20% Dairy) Angus Hereford Brangus Braford Bonsmara Brahman Simmental Holstein

9 Principal Breed in Brazil Nelore (85%)

10 Transferred Embryos in Argentina (In-Vivo Produced) 63% Frozen

11 Pregunta Identificar las tres cosas mas importantes que cambiaron la actividad de Transferencia de embriones en su región en los últimos 5 años.

12 Argentina: Fixed-Time Embryo Transfer Fixed-Time insemination of Donors Embryo Exports into different South-American Countries

13 Which one is in Heat?

14 Commercial FTET with Fresh and Frozen Thawed In Vivo Embryos (Adapted from Bo et al., 2007) Transferred /Treated Conception Rate Pregnancy Rate (%) (%) (%) PGF 60/100 (60.0%) 32/60 (53.3%) 32/100 (32.0%) FTET 1309/1542 (84.9%) 692/1309 (52.7%) 692/1542 (44.9%)

15 Seen in heat Not seen in heat Total Conception Rates 517/924 (55.9%) 219/409 (53.5%) 1333 P- value 0.36 Peres et al., 2006

16 Brazil (In-Vivo Produced) 90% Fresh

17 Brazil In-Vitro Embryo Production Fixed-Time Embryo Transfer

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19 Embryo Transfer in Brazil ( ) Embriões transferidos Ano base IVF ET Total Fonte: SBTE 2007 Viana, SBTE 2007

20 Como cambio el negocio de Importación y Exportación en los últimos años?

21 Argentina ,600 1,400 1,200 1, Total Embriones Importados Imported Embryos Total Embriones Exportados Exported Embryos Data from 3 Labs. Only , Cutaia et al., 2007

22 EXPORTACION DE SEMEN Y EMBRIONES BOVINOS PERIODO (*) SEMEN SEMEN EMBRIONES EMBRIONES Año 2007 LECHERO CARNICERO LECHERO CARNICERO SEMEN SEMEN EMBRIONES EMBRIONES Año 2008 LECHERO CARNICERO LECHERO CARNICERO (*) Datos obtenidos de solicitudes de exportación presentadas ante SENASA DCA FAGB-Septiembre 2008

23 SUPEROVULACION DE DONANTES EMBRIONES EN BOVINOS Gabriel A. Bó Instituto de Reproducción n Animal Córdoba C (IRAC)

24 Selección de Donantes

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26 Selección de Donantes Ciclos estrales regulares y que hayan comenzado a temprana edad. Dos o menos servicios por concepción en años anteriores. Comportamiento individual superior en características de importancia económica. Crías superiores a la media del rodeo. Especialmente comparado con sus hermanos/as (hijos del mismo toro). Ningún problema al parto o irregularidades reproductivas. Ningún defecto genético o de conformación detectable

27 Calidad embrionaria y edad Vacas viejas (13 a 16 años) Vacas Jóvenes (hijas) 3 a 6 años Valor de P N CL 25 ± 3 29 ± Total O/E 21 ± 5 20 ± Embriones 6 ± 2 12 ± Infertilizados 15 ± 3 7 ± Malhi et al., 2007

28 Transferencia de embriones Superovulación Necesidad de incrementar el número n de embriones transferibles

29 Respuesta SPO Año Colecciones 11,5/donante 27% 19% 54% Emb. Transferibles (6,2/donante) Infertilizados (3,1/donante) Degenerados (2,2/donante) Año Colecciones 12,7/donante 30% 19% 51% Emb. Transferibles (6,5/donante) Infertilizados (3,8/donante) Degenerados (2,4/donante) Looney, datos no publicados

30 Variabilidad en la respuesta superovulatoria 2048 donantes Ovocitos-embriones Totales E. Transferibles % de las donantes no produjeron embriones 30 % de las donantes produjeron el 70% de los embriones Looney et al., 1986

31 Variabilidad en la respuesta superovulatoria (IRAC-BIOGEN 2007) Ova-embriones: 9,72 ± 0,2 Emb. Fertilizados: : 6,5 ± 0,2 Emb. Congelables: : 4,4 ± 0,1 En el 7 % (100/1443) de las SPO no se colectaron estructuras. En el 25 % (358/1443) de las SPO no se colectaron embriones grado 1 y 2. El 40 % de las SPO produjeron el 80 % de los embriones grado 1 y 2.

32 Desarrollo de folículos 4 4 mm en vacas Ovulación Fase luteal Ovulación 2-Ondas FSH Fase luteal 3-Ondas FSH

33 10 6 Alta Respuesta Superovulatoria 2 mm Baja Respuesta Superovulatoria Boni et al., 1997; Burns et al., 2005

34 Factores que afectan la respuesta SPO Extrínsecos Gonadotrofinas Pureza Dosis Vía a de adm. Frecuencia Lugar de adm. Intrínsecos Status nutricional Historia reproductiva Edad Status ovárico

35 Gonadotrophin preparations used in commercial embryo transfer over the past 25 years

36 Gonadotrofinas para Superovulacion 1. Gonadotrofina Corionica Equina (PMSG/eCG) 2. Extractos de Pitutaria (FSH) 3. Gonadotrofina menopausica humana (hmg)

37 Extractos de Pituitaria Folltropin-V V (Bioniche, Canada). Dosis:100 a 200 mg Cebuínos y 200 a 400 mg en Taurinos. Pluset (Calier, España). Dosis: : 200 a 350 UI en Cebuínos y 350 a 1000 UI en Taurinos. Ovagen (ICP, Nueva Zelandia) Dosis: : 6 a 10 mg en Cebuínos y 17,6 mg (20 ml) en Taurinos.

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39 FSH/LH Ratio and Superovulation Group n CL Total Ova/embryos Fert.(%) Trans.(%) I 100% LH a 7.3 a 5.3 c (73) 4.0 (55) II 32% LH a 6.4 a 4.6 c (72) 3.9 (61) III 16% LH b 13.6 b 9.7 d (71) 7.7 (57) IV Pure FSH b 13.2 b 8.3 d (63) 5.5 (42) ab P<0.05; cd P<0.07) ( ab Willmott et al., 1990

40 FSH/LH Ratios & Superovulation of Bos indicus (Overall) Group n CL TOE FO 100%LH a %LH ab Pure FSH b ab P<0.05 Tribulo et al., 1991

41 Factores que afectan la respuesta SPO Extrínsecos Gonadotrofinas Pureza Dosis Vía a de adm. Frecuencia Lugar de adm. Intrínsecos Status nutricional Historia reproductiva Edad Status ovárico

42 Quantidade de folículos nos ovários de Bos taurus e de Bos indicus Ovário Ovário

43 Effect of Dose (NIH-FSH FSH-P1) of Folltropin-V V on Superovulatory Response in Brahman Cows Ova/embryos Dose n Year Total Transferable 140 mg mg mg G. Uribe Mejía,, 2004

44 Tabela. Número de embriões viáveis e congeláveis (média ± desvio padrão) em vacas Nelore superovuladas com diferentes doses de FSH (Folltropin-V) e inseminadas em tempo fixo. São Paulo, 2002 (Resultados preliminares). Dosagem N Total de Estruturas Embriões Transferíveis Embriões Congeláveis 200 mg 23 10,6 ± 8,6 6,5 ± 7,7 5,7 ± 7,0 133 mg 23 9,9 ± 7,0 5,6 ± 4,1 4,4 ± 3,2 100 mg 23 10,0 ± 7,8 7,7 ± 7,4 6,4 ± 6,5 Valores na mesma coluna sem letras sobrescritas não diferem (P>0,4)

45 Approximadamente 70% de la variabilidad puede estar relacionada con las características ováricas en el momento del comienzo de los tratamientos Monniaux et al., 1983

46 Follicular Waves in Cattle Follicular Diameter (mm) Days after ovulation

47 10 6 Alta Respuesta Superovulatoria 2 mm Baja Respuesta Superovulatoria Boni et al., 1997; Burns et al., 2005

48 Singh et al., 2003

49 Singh et al., 2003

50 Superovulatory Response and Wave Emergence Initiation No. of follicles No. of ovul. of treatment n (>7 mm) (ultrasound) Day ± 3.4 a 9.5 ± 2.3 b Day ± 3.8 a 18.4 ± 3.4 a Day ± 2.4 b 6.7 ± 2.2 b Day ± 2.3 b 6.5 ± 2.3 b ab (P<0.05). Nasser et al., 1993

51 Control del desarrollo folicular Ablación Folicular Progesterona y estradiol

52 Transvaginal ultrasound-guided follicle ablation Bergfelt et al., 1994

53 Follicular Ablation Ablatio n ~ 1.5. days new wave emergence Follicle Size Days Bergfelt et al., 1994

54 Superovulatory Response After Aspiration of the Dominant Follicle Dominant Follicle Aspiration yes no n CL 7.7 b 19.3 b 21.6 b Ova/Embryos Total collected 5.1 a Fertilized 2.4 a Transferable 1.0 a ab - P< b 12.6 a 10.3 b 18.7 b 12.9 b 10.1 b Bungarts and Niemann,, 1994

55 Superstimulation - Follicle Ablation Day 0 Day 2 Day 4 Day 6 Day 7 Day 13 AM - Ablate 2 largest follicles - Insert CIDR AM - Initiate FSH treatments AM - PGF PM - PGF & remove CIDR PM - AI AM - AI Embryo collection

56 Synchronization of Follicular Wave Emergence Folicular diameter (mm) Progesterone device + P4 and EB ~ 4. days Wave emergence FSH Days Caccia and Bo, 1998

57 Tratamiento de SPO con P4 y Estradiol 50 o 100 mg de P4 2.5 mg de EB Tratamiento SPO Colecta de embriones Disp. / P4 D.C. e IA a las 12 y 24 h PGF

58 Respuesta superovulatoria y producción de embriones No hubo diferencias entre las vacas superestimuladas tratadas con Disp. Con P4 4 días después del tratamiento con estradiol, 1 o 2 días después de la ablación folicular o, 8 y 12 días después del estro

59 1. Esquema tradicional de superovulación PGF 2α Detección de celo PGF 2α FSH (12/12h) Detección de celo Colecta de embriones D-0 D-10 D-13 D-0 D-7 2. Superovulación de sincronización del desarrollo folicular Detección De celo EB+P4 CIDR PGF PGF2α FSH (12/12h) Detección De celo Colecta De embriones D-0 D-4 D-7 D-8 D-15

60 Which cow is in estrus? Cuál está en celo?

61 Datos Individuales 100% 80% 60% 40% 20% 0% h post PGF 6 ov ov 13 9 ov 4 12 ov ov ov ov 6 Chesta et al., 2003

62 BE + P4 PGF 2α LH LH P4 FSH E2 P4 mm 6 2 Dia 0 Dia 4 Dia 7 Dia 8

63 E + P4 PGF 2α FSH plh o GnRH 12 h IA IA CE P4 D0 D4 D5 D6 D7 PM D8 AM D8 PM D9 AM D15 AM

64 E + P4 FSH PGF 2α plh o GnRH 24h IA IA CE P4 D0 D4 D5 D6 D7 PM D8 PM D9 AM D9 PM D15 PM

65 Número medio (±( EE) de ovocitos/embriones colectados, ovocitos fertilizados y embriones transferibles en vacas y vaquillonas Angus superovuladas que recibieron GnRH o plh como inductor de la ovulaci ación a las 12 h (Día a 8) o 24 h (Día a 8,5) de removido el dispositivo. (Día a 7PM, P36). Tipo de Día n Ovocitos/ Fertilizados Embriones inductor embriones Grado 1 y 2 colectados GnRH GnRH plh plh GnRH plh ab P<0,05 Día 8 (12h) Día 8,5 (24h) Día 8 (12h) Día 8,5 (24h) Efectos principales Día 8 (12h) Día 8,5 (24h) ,7 ± 0,9 5,7 ± 1,1 5,2 ± 0,8 6,8 ± 1,1 5,2 ± 0,7 5,9 ± 0,7 5,0 ± 0,6 6,2 ± 0,8 3,2 ± 0,7 4,5 ± 0,9 3,8 ± 0,7 5,6 ± 0,9 3,9 ± 0,6 4,6 ± 0,6 3,5 ± 0,5 a 5,0 ± 0,6 b 2,6 ± 0,6 3,7 ± 0,8 2,9 ± 0,6 4,4 ± 0,7 3,1 ± 0,5 3,6 ± 0,4 2,7 ± 0,4 a 4,0 ± 0,5 b

66 P>0,13 Número medio (±( EE) de ovocitos/embriones colectados, ovocitos fertilizados y embriones transferibles en vacas y vaquillonas Brangus superovuladas y tratadas con dispositivos con progesterona por 6,56 o 7 días, d combinado o no con GnRH en el Día D a 8. Tipo de inductor GnRH GnRH plh plh GnRH plh Día Día 8 (12h) Día 8,5 (24h) Día 8 (12h) Día 8,5 (24h) Efectos principales Día 8 (12h) Día 8,5 (24h) n Ovocitos/ embriones colectados 4,5 ± 1,8 5,7 ± 1,5 10,1 ± 4,2 3,6 ± 1,4 5,1 ± 1,2 7,1 ± 4,5 7,3 ± 2,3 4,8 ± 1,1 Fertilizados 2,9 ± 1,5 4,8 ± 1,2 5,4 ± 1,7 3,4 ± 1,4 3,9 ± 0,9 4,5 ± 1,1 4,1 ± 1,2 4,2 ± 0,9 Embriones Grado 1 y 2 2,4 ± 1,2 4,0 ± 0,7 4,5 ± 1,3 2,9 ± 1,4 3,2 ± 0,7 3,7 ± 0,9 3,4 ± 0,9 3,5 ± 0,7

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68 DIB Día 7 PM LH Día 8 remoción DIB BE PGF 2α FSH (200 mg Fol) LH AI AI CE DIB D -1 D0 D4 D6 D7 PM D8 AM D8 PM D9 AM D15 DIB Día 7 PM LH Día 8.5 remoción DIB BE PGF 2α FSH (200 mg Fol) LH AI AI CE DIB D -1 D0 D4 D6 D7 PM D8.5 PM D9 AM D9 PM D15

69 Remoción plh N Totales Fertilizados Grado 1 y 2 Día a 7 (P24) Día a ± ± ±0.8 Día a 7 (P24) Día a ± ± ±1.1 Día a 7,5 (P36) Día a ± ± ±0.7 Día a 7,5 (P36) Día a ± ± ±1.3 Efectos principales Día a ± ± ±0.5 a Día a ± ± ±0.9 b Día a 7 (P24) ± ± ±0.7 Día a 7,5 (P36) ab P< ± ± ±0.8 Martins et al., 2005

70 Superovulation and embryo transfer in Bos indicus cattle Pietro S. Baruselli 1 *, Manoel F. de Sá Filho 1, Claudiney M. Martins 1, Luiz F. Nasser 1, Marcelo F. G. Nogueira 2, Ciro M. Barros 2 and Gabriel A. Bó 3 1 Departament of Animal Reproduction, FMVZ-USP, Rua Prof. Orlando Marques de Paiva, 87, CEP , Sao Paulo-SP, 2 Departamento de Farmacología, Instituto de Biociências, UNESP, Botucatu-SP, Brazil; 3 Instituto de Reproducción Animal Córdoba, Universidad Católica de Córdoba, Cordoba, Argentina

71 Group 1 (n=20) EB PGF 2α LH 12h Flushing FSH (100mg Folltr.) IA IA DIB vaginal device D0 Group 2 (n=20) D4 D5 D6 D7 PM D8 M D8 T D9 M D15 M EB PGF 2α LH 24h Flushing FSH (100mg Folltr.) IA IA DIB vaginal device D0 D4 D5 D6 D7 PM D8 T D9 M D9 T D15 T

72 a b n=20 n=20 12h 24h Embriões trasnferíveis Figura - Efeito do momento da aplicação do GnRH (48 ou 60 h) após a aplicação de prostaglandina (12 ou 24h após o último FSH) na produção de embriões transferíveis em Nelore. Poços de Caldas, MG, Martins et al. SBTE (2005)

73 Indução da ovulação para IATF em vacas superovuladas Espécie horas após último FSH Bos taurus 24h Bos indicus 12h

74 mm Capacidade ovulatória conforme o diâmetro folicular em Bos taurus LH 80,0% a (8/10) 10 LH 8,5 0,0% b (0/9) LH 7 0,0% b (0/9) Sartori et al. (Biology of Reproduction, v. 65, p , 2001)

75 mm 10 Capacidade ovulatória conforme o diâmetro folicular em Bos indicus 90,0% a LH (9/10) LH 80,0% a (8/10) 8,5 7 LH 33,3% b (3/9) Gimenes et al., SBTE (2005)

76 mm Hipótese experimental LH 10 LH 8 FSH 3

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78 FTAI protocol in superstimulated Bos indicus Day 0 Day 4 Day 5 Day 6 Day 7 Day 8 Day 9 Day AM P4 Device + EB (2mg) FSH FSH FSH + PGF FSH LH FTAI Flushing PM FSH FSH FSH + PGF FSH + P4 device removal 9 11 FTAI

79 FTAI protocol in superstimulated Bos taurus Day 0 Day 4 Day 5 Day 6 Day 7 Day 8 Day 9 Day AM P4 Device + EB (2mg) FSH FSH FSH + PGF FSH FTAI PM FSH FSH FSH + PGF FSH + P4 device removal LH FTAI Flushing

80 Number of FTAI in superstimulated Bos indicus donors

81 PGF (Day 6 AM) P4 (12h) P4 (24h) P4 (36h) FSH (12/12h) P12/LH48 P24/LH48 P36/LH48 LH (Day 8 AM) AI AI AI Hours after PGF Semen viability Ultrasonography (12/12h) Semen viability % of ovulations Distribution of ovulations (indicated in hours after the first PGF) in superstimulated Nelore (Bos indicus) donors treated with progesterone releasing devices (DIB) for 6.5d (P12), 7d (P24) or 7.5d (P36) with LH treatment on Day 8

82 Group 1 (n=10) BE (D0) PGF 2α LH 12h Flushing DIB FSH (100mg Folltr.) AI 12h 24h AI D-0 Group 2 (n=10) D4 D5 D6 D7 PM D8 AM D8 PM D9 AM D15 AM BE (D0) PGF 2α LH 12h Flushing FSH (100mg Folltr.) AI DIB 16h D0 D4 D5 D6 D7 PM D8 AM D9 D15 AM

83 Effect of number of fixed-time inseminations (1 vs 2 FTAI) on embryo production in Nelore donors superstimulated with Folltropin-V and induced to ovulate with Lutropin-V (means ± SEM) 1 FTAI (n = 10) 2 FTAI (n = 10) P value Number of follicles > 8mm at plh 16.2 ± ± Number of CL at ova/embryo collection 10.5 ± ± Total ova/embryos collected 8.2 ± ± Unfertilized ova 0.6 ± ± Degenerated embryos 3.3 ± ± Grade 1, 2 and ± ± Grade 1 and ± ± Martins et al., (2005)

84 Field data No. animals No. ova/embryos 1 FTAI ±0.8 2 FTAI ±0.9 No. transferable embryos Santa Barbara Embriões Dr. Claudiney De Melo Martins Botelhos - MG 4.7± ±0.7

85 Alterações no Protocolo P-36:

86 Protocolo P-36 vs P-36/eCG (n=20) P4 3 mg BE F S H 133 mg PGF2α P4 ( pm) IATF LH (am) Colheita Embrião D0 D5 D6 D7 D8 D9 D10 D17 US US US P4 3 mg BE F S H 120 mg PGF2α ecg 2x (200 UI) P4 ( pm) IATF LH (am) Colheita Embrião D0 D5 D6 D7 D8 D9 D10 D17 C.M. Barros 2007

87 Protocolo P-36 vs P-36/eCG Características Grupo Experimental (n=20) P-36 P-36/eCG Estruturas colhidas Embriões viáveis Estruturas fertilizadas Taxa viabilidade (%) Total de embriões viáveis ** p < 0,03 6,7 ± 1,2 5,1 ± 1,1 6,1 ± 1,2 76, ,0 ± 1,5 ** 7,3 ± 1,2 8,4 ± 1,3 73,0 146 C.M. Barros 2007

88 Resultados Preliminares en Donantes Brangus Treatment Groups N Total ova/embryos Fertilized ova Transferable Embryos Control ± ± ±1.4 ecg ± ± ±1.5 P<0.07 Reano y Bó, B, no publicados

89 Variable Control Previo (n=30) Ecg (n=15) Valor p Cuerpos Lúteos 14,27 ± 1,0 a 18,53 ± 1,4 b 0,01 Ovocitos / Embriones Totales 13,87 ± 1,5 a 16,07 ± 1,8 a 0,39 Embriones Fertilizados 9,63 ± 1,1 a 12,07 ± 1,6 a 0,21 Embriones Grado 1 5,8 ± 0,8 a 9,6 ± 1,4 b 0,02 Embriones Grado ± 0,9 a 10,47 ± 1,4 b 0,04 Embriones Grado ,67 ± 1,0 a 10,93 ± 1,5 a 0,06

90 Trabalhos para facilitar o manejo durante a superovulação de doadoras Bos taurus e Bos indicus

91 Número de administrações de FSH para superovulação em Bos indicus

92 Protocolos de SOV com IATF D0 M BE+P4 8 FSH T M BE+P4 4 FSH T M BE+P4 2 FSH T D1 D2 D3 D4 D5 FSH (20%) FSH (15%) FSH (20%) FSH (15%) FSH (40%) FSH (30%) - - FSH (70%) D6 FSH (10%) FSH (10%) FSH (20%) - FSH (30%) - D7 D8 D9 FSH (5%) LH IA FSH (5%) IA FSH (10%) LH IA - IA - LH IA - IA D10 D11 D12 D13 D15 Colheita Colheita Colheita

93 Tabela - Efeito do número de administrações de FSH (2, 4 ou 8 vezes) na resposta superovulatória de vacas Nelore (Bos indicus), Poços de Caldas-MG. Número de administrações de FSH P Número de animais Nº de folículos no D4 11,1±0,8 10,8±0,7 10,3±0,6 0,66 Nº de folículos no LH 11,3±0,8 b 13,9±0,7ª 14,8±0,7 a 0,003 Nº de CLs no D15 7,3±0,6 b 8,8±0,6 ab 10,8±0,6 a 0,001 Total de estruturas 7,1±0,8 b 8,0±0,6 ab 8,7±0,6 a 0,06 Emb. transferíveis 5,42±0,63 b 6,33±0,54 ab 7,67±0,53 a 0,008 Emb. congeláveis 4,71±0,61 b 5,54±0,42 ab 6,71±0,44 a 0,01 Emb. não fertilizados 1,00±0,34 a 1,29±0,42 a 0,33±0,10 b 0,004 Emb. degenerados 0,62±0,16 0,38±0,13 0,67±0,17 0,34 Martins et al., (2008)

94 a 5.42 ab b n=24 n=24 n=24 2FSH 4FSH 8FSH Transferable embryos Figure - Effect number FSH treatment on number of transferable embryos in Nelore (Bos indicus) and Holstein (Bos taurus) cows, Poços de Caldas, MG, Martins et al., 2008

95 n fol Fol <8mm 8fsh 0-8mm 4fsh 0-8mm 2fsh 0-8mm d4 d5 d6 d7 d8 d9 Control of follicular growth dia n fol <Fol>10mm 8fsh 8-10mm 4fsh 8-10mm 2fsh 8-10mm d4 d5 d6 d7 d8 d9 dia n fol fsh>10mm 4fsh>10mm 2fsh>10mm Fol >10mm d4 d5 d6 d7 d8 d9 dia

96 D0 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9 D10 D11 D12 D13 D15 M 8 FSH BE+P4 BE+P4 Protocolos de SOV com IATF T M 3 FSH FSH (20%) FSH (20%) FSH (40%) - FSH (15%) FSH (15%) - FSH (40%) FSH (10%) FSH (10%) - - FSH (5%) FSH (5%) FSH (20%) - LH IA LH IA IA IA Colheita Colheita T M BE+P4 2 FSH FSH (50%) - - FSH (50%) T LH IA IA Colheita

97 Tabela - Efeito do número de administrações de FSH (2, 3 ou 8 vezes) na resposta superovulatória de vacas Nelore (Bos indicus), Poços de Caldas- MG. Número de administrações de FSH P Número de animais Nº de folículos no D4 12,0±1,1 11,3±0,9 12,5±1,0 0,63 Nº de folículos no LH 8,9±0,5 b 15,8±0,9 a 16,1±1,1 a 0,001 Nº de folículos no D15 1,3±0,4 2,5±0,4 1,8±0,2 0,14 Nº de CLs no D15 7,1±0,6 b 11,8±0,8 a 12,8±0,7 a 0,001 Total de estruturas 5,9±0,8 b 9,3±0,8 a 10,8±0,9 a 0,002 Emb.. transferíveis 4,8±0,6 b 7,0±0,6 a 7,2±0,5 a 0,045 Emb. congeláveis 4,2±0,5 b 6,6±0,6 a 6,9±0,4 a 0,018 Emb. não fertilizados 0,4±0,2 1,3±0,4 2,1±0,6 0,79 Emb. degenerados 0,5±0,4 1,0±0,3 1,5±0,6 0,99 Martins et al., (2008)

98 a a 4.8 b n=12 n=12 n=12 2FSH 3FSH 8FSH Transferable embryos Figure - Effect number FSH treatment on number of transferable embryos in Nelore (Bos indicus) and Holstein (Bos taurus) cows, Poços de Caldas, MG, Martins et al., 2008

99 FTAI protocol in superstimulated Bos indicus Day 0 Day 4 Day 5 Day AM P4 Device + EB (2mg) FSH (40%) 3 PM FSH (40%) + PGF Day 7 Day 8 Day FSH (20%) + P4 device removal LH / GnRH FTAI 6 FTAI Day 15 8 Flushing

100 Número de administrações de FSH para superovulação em Bos taurus

101 b 6.33 ab 7.67 a b 2.6 b 5.7 a 0 2FSH 4FSH 8FSH 0 2FSH 4FSH 8FSH Figure - Effect number FSH treatment on number of transferable embryos in Nelore (Bos indicus) and Holstein (Bos taurus) cows, Poços de Caldas, MG, Martins et al., 2008

102 Single Injection of FSH E + P4 FSH P4 device removal PGF 2α plh 24h IA IA EC P4 device D0 D4 D5 D6 D7 PM D8.5 PM D9 AM D9 PM D15 PM

103 FSH vs ecg for superstimulation Bos indicus cattle

104 HIPÓTESE ecg LH ecg ecg E2 E2 FD

105 FSH vs ecg para superovulação em Bos indicus EB (2,0mg) Remove D7 (PM; 36h) Group 1: 100mg DIB Group 2: 2.000UI ecg FSH LH (25mg) (AM) Group 3: 2.500UI D0 D4 D5 D6 D7 D8 D15 PGF2α (AM / PM) FTAI 16 after LH Flushing

106 n=12 FSH- 100mg ecg 2000UI 4.4 n=12 n=12 ecg 2500UI Transferable embryos Figure - Effect superovulatory treatment with FSH or ecg on number of transferable embryos in Nelore (Bos indicus) cows, Poços de Caldas, MG, Martins et al., 2006

107 TABELA Taxa de concepção em receptoras recendo embriões produzidos através de diferentes protocolos de superovulação. Médias N emb transf. N Prenhes % 2000 ecg , ecg , FSH ,90 Martins et al., 2006

108 FSH vs ecg para superovulação em Bos indicus EB (2,0mg) Remove D7 (PM; 36h) Group 1: 133mg DIB Group 2: 1.500UI ecg FSH LH (25mg) (AM) Group 3: 2.000UI D0 D4 D5 D6 D7 D8 D15 PGF2α (AM / PM) FTAI 16 after LH Flushing

109 a n=12 FSH- 133mg 3.1 b ecg 1500UI 6.7 a n=12 n=12 ecg 2000UI Transferable embryos Figure - Effect superovulatory treatment with FSH or ecg on number of transferable embryos in Nelore (Bos indicus) cows, Poços de Caldas, MG, Martins et al., 2006

110 SUPEROVULAÇÃO COM INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL EM TEMPO FIXO EM DOADORAS BOS TAURUS TRATADAS COM FSHp OU COM ecg

111 Experimental design 1st Replicate (32d) 2nd Replicate (32d) 3rd Replicate Group 200mg (n=4) Group 2.000UI (n=4) Group 2.500UI (n=4) Group 2.000UI (n=4) Group 2.500UI (n=4) Group 200mg (n=4) Group 2.500UI (n=4) Group 200mg (n=4) Group 2.000UI (n=4) The same sires were used in all replicates Group 100mg Folltropin Group 2.000UI ecg Group 2.500UI ecg

112 n=12 FSH- 200mg 6.7 ecg 2000UI 8.1 n=12 n=12 ecg 2500UI Transferable embryos Figure - Effect superovulatory treatment with FSH or ecg on number of transferable embryos in Holstein (Bos taurus) cows, Poços de Caldas, MG, Martins et al., 2008

113 Utilização contínua da ecg para superovular doadoras Nelore (Bos indicus) ecg Produção de anticorpos?

114

115 Desenho Experimental 1 a Réplica (35d) 2 a Réplica (35d) 3 a Réplica (35d) 4 a Réplica Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Empregou-se o mesmo acasalamento nas doadoras superovuladas Grupo FSH 133mg Grupo ecg 2000UI

116 Todos animais com FSH N embr transf mg FSH 2000 UI ecg 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing 3.7 Gráfico. Número de embriões transferíveis (grau 1, 2 e 3) em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10) e inseminadas em tempo fixo. Martins et al., 2007

117 % embr transf * 41.8 ** Todos animais com FSH mg FSH 2000 UI ecg 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing Gráfico. Percentual do número de embriões transferíveis (grau 1, 2 e 3) em relação ao primeiro flushing em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10) e inseminadas em tempo fixo. Martins et al., 2007

118 ,1 16,4 Todos animais com FSH ,1 14,4 13,5 12,4 13,2 N CL ,1 9, mg FSH 2000 UI ecg 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing 6,1 Gráfico. Número de CL no dia do Flushing em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10). Martins et al., 2007

119 * Todos animais com FSH % CL ** mg FSH 2000 UI ecg 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing Gráfico. Percentual de redução do número de CL no dia do Flushing em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas e inseminadas em tempo fixo por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10). Martins et al., 2007

120 100 Taxa de recuperação (%) ,2 88,2 83,1 82,0 84,9 84,8 78,0 78,9 133 mg FSH 2000 UI ecg 83,3 69,9 0 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing Gráfico. Taxa de recuperação de embriões (N o de estruturas embrionárias / N o de CL) em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10) e inseminadas em tempo fixo. Martins et al., 2007

121 Conclusão Verificou-se efeito semelhante da superovulação com ecg e FSH até o terceiro tratamento Quando o tratamento com FSH foi utilizado novamente as doadoras obtiveram a mesma eficiência

122 OBJETIVO DE UN PROGRAMA DE TE COMERCIAL Obtener el mayor número n de embriones transferibles en el menor tiempo posible

123 Niveles de P4 y celo en donantes tratadas con cloprostenol el día de la colecta Regresión Luteal (P4 < 1 ng/ml) Celo n Día n Día Control 6/10 a 9,7±1,8 a 3/10 10,3±0,6 0,6 500 μg 8/8 b 3,6±0,8 b 7/8 7,0±0,9 0,9 750 μg 9/9 b 3,1±0,5 b 5/9 7,2±0,9 ab P<0,05

124 Dinámica folicular en donantes tratadas con cloprostenol en el día de la colecta Número de folículos Días pos colecta >10 mm Control 4-9 mm Control >10 mm Cloprostenol 4-9 mm Cloprostenol

125 Superstimulation following E-17β Day 0 Day 4 Day 6 Day 8 Day 9 Day 15 Day 22 Day 28 - Insert CIDR - inject 5 mg E-17E 17β plus 100 mg P4 - Initiate FSH treatments - PGF - PGF & remove CIDR - AI - AI - Embryo collection & transfer - PGF - Estrus - PGF - Insert CIDR (donors) - inject 5 mg E-17E 17β plus 100 mg P4

126 Superstimulation following Follicle Ablation Day 0 Day 1 Day 4 Day 6 Day 7 Day 13 Day 20 Day 28 - Ablate 2 largest follicles - Insert CIDR - Initiate FSH treatments - PGF - PGF & remove CIDR - AI - AI - Embryo collection & transfer - PGF - Estrus - PGF - Insert CIDR (donors) - Ablate 2 largest follicles

127 Flush Summary & Averages Holstein Red Angus Pooled # of Donors # of Flushes Avg. # of Flushes Avg. Days b/t Flushes Total IETS # 1 collected Avg. IETS # 1/Flush Avg. IETS # 2/Flush Transferable/Flush (IETS #1 & #2) Traditional 60 day Transferable/flush 8.5 (1038 Donors) Stables, 2003

128 Desempeño de vacas Red Angus donantes superovuladas cada días Cantidad de donantes 20 Período de tratamiento Superovulaciones, n, (promedio x donante) [var.] Intervalo promedio entre superovulaciones Promedio embriones x superovul. [variación] 32 meses 16 [11-20] 40 días 5,8 [0-28]

129 Programación de Donantes Producción n estimada (en base a 5,8 embriones transferibles por vaca) 365 días d / 40 días d = 9 colecciones por añoa 9 col. x 5,8 emb.. transf. = 52,2 emb.. por vaca por añoa 52 emb.. x 60 % preñez ez = 31 preñeces eces por vaca por año a

130 Resumen Los tratamientos superovulatorios deben ser iniciados en el momento del comienzo de una onda folicular. La sincronización n del desarrollo folicular permite iniciar los tratamientos sin tener que detectar celo base, sin alterar la respuesta SPO. Es posible también n realizar la IATF e independizarse de la detección n de celos de la donante.

131 MUCHAS GRACIAS!!!