efecto sobre la calidad microbiológicay la capacidad bactericida.

Transcripción

1 IV REUNIÓN NACIONAL BANCO DE LECHE HUMANA Hospital La Fe, Valencia 22 Junio de 2012 LIOFILIZACIÓN DE LA LECHE HUMANA COMO MÉTODO DE CONSERVACIÓN: efecto sobre la calidad microbiológicay la capacidad bactericida. * Hospital Universitario y Politécnico La Fe** Silvestre D.* Salcedo J.* Nogarotto E.* Gormaz M.** Ramón A** Sirvent R** Lopez-Mendoza M.C* 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 1

2 Beneficios de la LH: Óptimo aporte de energía y nutrientes Protege al lactante de numerosas enfermedades (infecciones, diarrea, otitis, infecciones del tracto respiratorio) Capacidad bactericida LH Estímula la maduración de órganos y del crecimiento del lactante Proporciona sostén afectivo 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 2

3 Componentes que pueden contribuir a la acción bactericida de la LH: Anticuerpos (IgA, immunoglobulinas) proporcionan imunidad al lactante con protección específica Citoquinas estimulan la respuesta inmunitaria Probióticos (Bifidobacterias) - evitan el crecimiento de bacterias enteropatógenas Prebióticos (oligosacáridos) previenen la infección por adhesión a los patógenos Componentes del glóbulo graso impiden el desarrollo de los virus; Proteinas (lactoferrina, lisozima) efecto bacteriostático 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 3

4 Posible carga microbiana de la LH Aerobios mesófilos: recuento total, informa de la contaminación total de microorganismos Enterococcos spp.: de origen fecal, muy resistentes a las condiciones extremas (tratamientos inadecuadas de tiempo y temperatura durante el almacenamiento) Staphylococcus spp.: procedente de la madre Coliformes:contaminación de origen fecal o condiciones higiénicas no adecuada del servicio del Banco de Leche 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 4

5 Bancos de Leche Humana Función: LosBLH son centros especializados responsables de la promoción,fomento y protección del amamantamiento. Su función esencial esrecibir, analizar, almacenar y distribuirla leche procedente de madres donantes. Protocolo general: 1. Extracción 2. Control e higienización 3. Almacenamiento hasta su uso CONGELACIÓN a -20ºC CONGELACIÓN a -80ºC LIOFILIZACIÓN (BLH Marmande) LIOFILIZACIÓN: eliminación del agua de la leche por sublimación en una cámara de vacío a una temperatura de -40 C 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 5

6 Hipótesis de trabajo La liofilización puede ser una buena alternativa para el almacenamiento de la LH en los Bancos de Leche, manteniendo sus propiedades y facilitando su conservación y manipulación durante largos periodos. 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 6

7 Objetivo Analizar la contaminación microbiológicay la capacidad bactericidade la LH: valorar las diferencias entre dos métodos alternativos de almacenamiento Liofilización Congelación -20 C -80 C 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 7

8 Material y Métodos Casuística: 44 mujeres sanas 24 muestras para el estudio de CB 20 muestras para el recuento microbiológico Recogidas en BLH La Fe (Valencia) Transporte inmediato a la UCH-CEU Bajo refrigeración en nevera con hielo Almacenamiento en congelación a -20ºC hasta su procesado Descongelación a 6-8ºC y alicuotado: 1. Análisis inmediato (referencia) 2. Almacenada a -80ºC hasta su análisis 3. Almacenada a -80ºC y liofilización hasta su análisis Análisis estadístico Análisis de la Varianza de un factor al 95% de probabilidad (Statgraphics) 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 8

9 1. Calidad microbiológica 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 9

10 Método analítico Siembra - Análisis de cuatro grupos diferentes de microorganismos - Medio de cultivo específico para cada uno - Incubación en estufa a temperatura y tiempo establecido 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 10

11 ResultadosContaminación de LH almacenada a -20 C: - A. mesófilos: en 17/20 muestras (2,52 10⁴± 9,83 10⁴ UFC/mL) - S. epidermidis: en 16/20 muestras (1,16 10⁴± 1,29 10⁴UFC/mL) - S. aureus: en 14/20 muestras (6,45 10²± 1,01 10⁴ UFC/mL) - Enterococcus spp: en 4/20 muestras (1,98 10⁴ ± 6,09 10⁴ UFC/mL) 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 11

12 Resultados Efecto del método de conservación Aerobios mesófilos, S. aureus, Enterococcus spp.: NO diferencias estadisticamente significativas 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 12

13 Resultados Efecto del método de conservación S. epidermidis: Se observa un descenso estadísticamente significativo 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 13

14 2. Capacidadbactericida (CB) 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 14

15 Método analítico Evaluación de la CB - Recuperación cepa E. coli NCTC 9111 serovar O111 K58(B4) (CECT); -Inoculación de E. coli en las muestras de leche y en caldo de peptona (control) -Incubación en estufa a 37 C / 2h; - Diluciones decimales con agua de peptona; -Siembra en VRBA, incubación a 37 C / 24h. CONTROL: crecimiento de E. coli inoculado en caldo de peptona N 0 MUESTRA: crecimiento de E. coli inoculado en leche N f 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 15

16 Método analítico Los resultados se expresan como porcentaje de reducción de los recuentos en la muestra problema (N f ) respecto a los recuentos en el control % reducción (N 0 ): N0 N = N 0 f Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 16

17 Resultados Efecto del método de conservación Todas las muestras presentan CB, en las tres condiciones de almacenamiento. Valores máximo y mínimo: 22,41% y 94,85% 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 17

18 Conclusiones 1. La mayor contaminación de LH se debe a: Aerobios mesófilos (85%), S. epidermidis (80%), S. aureus (70%) y Enterococcos spp.(20%). 2. La liofilización de LH no varia la contaminación microbiologica respecto a la congelación; excepto en el caso de S. epidermidisen el que conlleva un descenso significativo respecto al valor previo a -20ºC. 3. La LH presenta CB en todas las muestras analizadas. Esta propiedad de la LH se mantiene independientemente del método de conservación aplicado. La liofilización no afecta a esta propiedad respecto al almacenamiento en congelación a -20ºC ni -80ºC. La liofilización es una alternativa para la conservación de LH en bancos de leche 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 18

19 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 19

20 IV REUNIÓN NACIONAL BANCO DE LECHE HUMANA Hospital La Fe, Valencia 22 Junio de 2012 LIOFILIZACIÓN DE LA LECHE HUMANA COMO MÉTODO DE CONSERVACIÓN: efecto sobre la calidad microbiólogica y capacidad bactericida. * Hospital Universitario y Politécnico La Fe** Silvestre D.* Salcedo J.* Nogarotto E.* Gormaz M.** Ramón A** Sirvent R** Lopez-Mendoza M.C* 22 Junio 2012 IV Reunión nacional banco de leche humana 20