ETAPAS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA OBTENCIÓN DE MUESTRAS FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO INCLUSIÓN CORTE MONTAJE TINCIÓN DE LOS CORTES

Transcripción

1

2 ETAPAS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA OBTENCIÓN DE MUESTRAS FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO INCLUSIÓN CORTE MONTAJE TINCIÓN DE LOS CORTES

3 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Todas las muestras de tejido, ya sea obtenidas de materiales quirúrgicos, necropsias, biopsias deben ser procesadas adecuadamente para obtener buenos cortes histológicos.

4 FIJACIÓN Tratamiento del tejido con sustancias químicas que retardan las alteraciones de los tejidos, posteriores a la muerte y conservan la configuración normal de los mismos.

5 Fijador: Sustancia que detiene en forma rápida los procesos de autólisis y que, al mismo tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el estado en que se encontraban en la vida.

6 TIPOS DE FIJADORES Físicos: Desecación: Extendidos, líquidos de punciones. Calor seco: Bacteriología. Calor húmedo: Microquímica, Zoología. Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja de actuar los mismos se reanudan.

7 TIPOS DE FIJADORES Químicos: Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras). Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores). Alcoholes (precipitan proteínas). Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores). Picratos (precipitan proteínas).

8 DESHIDRATACIÓN Se obtiene por medio de un reactivo anhidro pero ávido de agua. Se sumerge en alcoholes de graduación cada vez mayor. Alcohol Etílico. Alcohol Isopropílico. Alcohol Butílico. Acetona

9 ACLARADO Se debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina: Xileno. Tolueno. Benceno.

10 INCLUSIÓN La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y también en el interior de las células embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención de cortes con el micrótomo.

11 CONFECCIÓN DEL TACO Obtención del bloque de parafina de forma regular, para ser cortado con el micrótomo.

12 CONFECCIÓN DEL TACO

13 CORTE Micrótomo Rotativo. Micrótomo de Deslizamiento. Micrótomo de Congelación. Crióstato.

14 Micrótomo Rotativo.

15 Micrótomo Rotativo.

16 EXTENSIÓN Utilizar portaobjetos limpios y preparados con el adhesivo adecuado. Se realiza en agua tibia (38oC). Precaución: el preparado debe quedar bien extendido y sin pliegues. Rotular.

17 EXTENSIÓN Luego de escurrir el exceso de agua llevar a estufa (60 C) no más de dos horas.

18 TINCIÓN DE LOS CORTES Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales: Colorantes que diferencian los componentes básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y eosina). Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

19 Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:

20 TINCIÓN DE LOS CORTES La reacción de los grupos aniónicos con un colorante básico se denomina BASOFILIA (que tiene afinidad por lo básico) La reacción de los grupos catiónicos con un colorante ácido se denomina EOSINOFILIA (que tiene afinidad por lo ácido)

21

22

23

24

25

26

27

28 Las coloraciones especiales comprenden un conjunto de tinciones o impregnaciones utilizadas para poner de manifiesto o resaltar determinadas estructuras de los tejidos. Para Fibras colágenas de tejido conectivo: Tricrómico de Van Gieson: las fibras colágenos se observan de color rojo. Tricrómico de Gomori: se observan de color rojo. Tricrómico de Masson: las fibras colágenas se observan de azul.

29 Para tejido adiposo: Sudan black: el tejido adiposo se observa de color negro. Sudan IV-rojo Escarlata: - grasas neutras: se observan de color rojo vino. - lipoides: rojo anaranjado - fosfolípidos: se tiñen poco o nada. Para carbohidratos y mucopolisacáridos: Acido Peryódico de Schiff (PAS): los mucopolisacáridos básicos o neutros se observan de color rojo.

30 Técnica de Ramón y Cajal- Técnica argéntica por impregnación de sales de plata.