PRACTICA Núm. 6 TINCION DE FLAGELOS BACTERIANOS POR EL METODO DE LEIFSON

Tamaño: px

Comenzar la demostración a partir de la página:

Download "PRACTICA Núm. 6 TINCION DE FLAGELOS BACTERIANOS POR EL METODO DE LEIFSON"

José Ayala de la Fuente
hace 6 años
Vistas:

1 PRACTICA Núm. 6 TINCION DE FLAGELOS BACTERIANOS POR EL METODO DE LEIFSON I. OBJETIVO Demostrar la presencia de flagelos mediante tinción y observar la movilidad que presentan algunas bacterias diferenciándola del movimiento browniano. II. INTRODUCCION Muchos microorganismos son móviles, desplazándose de un lugar a otro para obtener nutrientes, crecer y reproducirse. Muchas de las bacterias poseen esta capacidad, debido a la presencia de unos órganos de locomoción denominados flagelos. Estos son filamentos simples químicamente compuestos de proteína conocida como flagelina. Tienen su origen en el protoplasma de la célula bacteriana y su espesor es alrededor de 0.01 micrones. El número y disposición de los flagelos es variable en las diferentes bacterias, pero generalmente es constante para cada especie. Algunas tienen solamente un flagelo, otras dos o más y pueden ser polares o perítricos - alrededor del cuerpo de la célula -. (Fig. 6.1) Las bacterias flageladas cuando están suspendidas en una gota de líquido son activamente móviles. Sin embargo, es muy importante distinguir entre el movimiento real debido a los impulsos originados por los flagelos permitiendo el desplazamiento de la bacteria dentro del campo microscópico y el llamado movimiento browniano que se produce siempre que se suspenden en un líquido, partículas pequeñas y que presentan las bacterias inmóviles debido al bombardeo molecular sobre la superficie de la célula. Los flagelos pueden ser teñidos, pero debido a su diámetro tan pequeño, se requieren técnicas especiales. Los flagelos de organismos eucarióticos, como algas y protozoarios, son mucho más gruesos y pueden observarse en preparaciones en fresco ó con tinciones simples. 33

2 III. MATERIAL Y SUBSTANCIAS Suspensión bacteriana. Solución salina ó agua destilada estéril. 1 Portaobjetos excavado. 1 Portaobjetos normal perfectamente limpio en mezcla crómica y desengrasado. 1 Cubreobjetos perfectamente limpio y desengrasado. Pipetas Pasteur estéril. Gradilla. Asa bacteriológica. Lápiz graso. Mechero Bunsen. Cerillos ó encendedor. Aplicadores. Vaselina. Papel absorbente. Colorante de Leifson. Mezcla crómica. Microscopio. Aceite de inmersión. IV. TECNICA A. OBSERVACION AL FRESCO EN GOTA PENDIENTE 1. Depositar en condiciones asépticas tres o cuatro asadas de la suspensión bacteriana en el centro del cubreobjetos limpio y libre de grasa. También se puede usar una pipeta Pasteur estéril para este fin, procurando que la gota quede lo suficientemente grande para facilitar la observación. NOTA: Los cubreobjetos se pueden limpiar frotándolos cuidadosamente entre los dedos con agua y jabón y enjuagándolos en agua caliente. Luego sumergirlos en alcohol y secarlos con un trapo limpio sin pelusa. Finalmente, el calentamiento suave a la flama quitará los últimos restos de grasa. 2. Cuando se trata de un cultivo sólido, colocar una gota de solución salina ó agua destilada estéril en el centro del cubreobjetos limpio y emulsionar una pequeña 34

3 cantidad del material. Se puede hacer una pequeña marca cerca de la gota en el cubreobjetos para facilitar la observación. 3. Poner un poco de vaselina alrededor de la concavidad del portaobjetos utilizando para ello un aplicador. 4. Invertir y colocar el portaobjetos sobre el cubreobjetos que contiene la gota de la suspensión bacteriana cuidando que quede bien centrado para que la excavación quede directamente encima de la gota. La gota no debe tocar el portaobjetos. 5. Presionar suavemente para que se adhieran perfectamente cubre y portaobjetos. 6. Invertir rápidamente. La gota que contiene el material a examinar pende del cubreobjetos sobre la excavación del portaobjetos. (Fig. 6.2) 7. Observar al microscopio con el objetivo seco débil y enseguida con el seco fuerte. Al localizar la marca hecha en el cubreobjetos, el borde de la gota se encontrará fácilmente. 8. Determinar si hay movilidad real - desplazamiento de las células de un lado a otro dentro del campo microscópico -, ó movimiento browniano. 9. Si se desea observar células individuales, colocar una gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos y observar con objetivo de inmersión. B. TINCION DE FLAGELOS 1. Hacer un círculo en un portaobjetos perfectamente limpio para lo cual previamente fue sumergido en mezcla crómica durante 24 horas, lavado posteriormente con agua destilada, enjuagado con alcohol y secado con un trozo de tela limpio. Desengrasarlo pasando por una flama varias veces. 2. Colocar dentro del círculo con pipeta Pasteur, una gotita de la suspensión bacteriana e inclinar el portaobjetos de uno y otro lado para extender la muestra. 3. Fijar la preparación al aire ya que si esta operación se hace usando la flama del mechero se pueden destruir los flagelos. 35

4 4. Humedecer la preparación con el Colorante de Leifson y dejarla en reposo a temperatura ambiente durante 10 minutos en tiempo caluroso o en la incubadora en tiempo frío. 5. Lavar con agua corriente. 6. Secar y observar con objetivo de inmersión. INTERPRETACION: Los flagelos se tiñen bien de color rojo en aquellas bacterias que no presentan flagelos extremadamente delicados. 7. Dibujar las observaciones hechas: Observación A. Observación B. V. CUESTIONARIO 1. Dar la clasificación de las bacterias de acuerdo al número y localización de sus flagelos. 2. Dibujar la estructura de un flagelo bacteriano. 3. Consultar otro método de tinción para flagelos. 4. Diferenciar los flagelos bacterianos de los de células Eucarióticas. 5. De qué otra manera se puede demostrar la movilidad de una bacteria? 36

5 37 MICROBIOLOGIA APLICADA

6 38

Documentos relacionados

PRACTICA Núm. 3 PREPARACIONES DE EXTENSIONES O FROTIS Y TINCION SIMPLE

PRACTICA Núm. 3 PREPARACIONES DE EXTENSIONES O FROTIS Y TINCION SIMPLE I. OBJETIVO Conocer el procedimiento para preparar extensiones ó frotis y los diferentes métodos de tinción, así como su utilidad