Chikungunya en Las Américas: Diagnóstico y vigilancia por laboratorio

Transcripción

1 Chikungunya en Las Américas: Diagnóstico y vigilancia por laboratorio

2 Diagnóstico CHIKV: papel del laboratorio La confirmación etiológica específica de CHIKV sólo es posible por técnicas de laboratorio En áreas endémicas, el dengue constituye el principal diagnóstico diferencial Las plataformas para vigilancia de dengue, permitirán la detección y vigilancia de CHIKV

3 GENERO Familia Togaviridae 1. Rubivirus 2. Alphavirus

4 Alphavirus Amplio grupo de virus transmitidos por artrópodos, que tienen como características el ser virus cubiertos con RNA. Muchos asintomáticas de ellos producen infecciones Encefalitis Proceso febril acompañado o no de exantema y poliartralgia Cuadro grave que puede comprometer la vida como es una encefalitis o una fiebre hemorrágica.

5 Alphavirus Barmah Forest (BF), Encefalitis Equina del Este(EEE), Middelburg (MID), Ndumu (NDU), Semliki Forest (SF), Encefalitis Equina Venezolana(VEE), Encefalitis Equina del Oeste (WEE).

6 Chikungunya: el virus &imgrefurl=http%3a%2f%2fwww.esculape.com%2finfectio%2fchikungunya_2007_run.

7 Chikungunya: el virus Familia Togaviridae, género Alphavirus Virus pequeño, esferico, envuelto nm de diámetro Virus RNA (+) Muy lábil a temperaturas altas Vector = mosquitos Aedes spp

8 Genoma del CHIKV

9 La proteína de envoltura (E1/E2) se une a receptores celulares para iniciar la infección Chikungunya: el virus Virión esférico nm de diámetro Los anticuerpos neutralizantes (protectivos) están dirigidos contra subunidades de la proteína E

10 Chikungunya: el virus Genoma ~ 12Kb 3 genotipos

11 Chikungunya: papel del laboratorio Diferenciales: Dengue, Influenza, malaria, leptospirosis, rickettsiosis, fiebres recurrentes, shigellosis, cholera, meningitis, hepatitis Esencial una buena historia clínica que se ajuste a la definición establecida para CHIKV

12 Cuadro Hematológico Leucopenia con linfocitosis relativa Trombocitopenia rara Velocidad Sedimentación Globular elevada Proteina C reactivas elevada Factor Reumatoideo: Positivo o Normal

13 Chikungunya: papel del laboratorio Fiebre Virus / Antígeno Acs. neutralizantes IgG Acs. IgM 3-7 días 1-8 días (max) Incubación Viremia días (Umbral de anticuerpos) 13 Adaptado de: Chikungunya overview, Dr. P. Formenty

14 Chikungunya: papel del laboratorio Dx. VIROLÓGICO Dx. SEROLÓGICO Aislamiento viral BSL 3 (virus emergente) Detección de RNA (PCR) MAC-ELISA HI PRNT Días tras el inicio de síntomas Detección viral: días 1 a 5 (máximo 8) Detección Acs (IgM) : día 5 en adelante

15 Suero Tipo de muestra -Fase aguda: Hasta 8 días tras el inicio de síntomas (principalmente primeros 5 días) -Fase convaleciente: días tras el inicio de síntomas

16 Conservación de la muestra: Mantener refrigerada (2 8 o C) si va ser procesada (o enviada a un laboratorio de referencia) dentro de 48 horas. Mantener congelada (-70 o C) si no se procesa en un período de 48 horas. La muestra se conserva adecuadamente durante periodos prolongados de tiempo.

17 Ensayos serológicos: ELISA IgM 1. Cubrir con anti-human IgM 2. Suero del paciente (IgM) 3. Adicionar Antigeno CHIKV HRP HRP 4. Adicionar conjugado HRP anti-grupo CHIKV Diagnóstico por laboratorio Adaptado de: Laboratory Testing for Chikungunya Virus, Dr. R. Lanciotti, CDC

18 Ensayos serológicos: ELISA IgG 1. Cubrir con Acs Monoclonales (anti-grupo) 2. Adicionar antígeno viral (CHIK) 3. Adicionar suero del paciente AP AP 4. Adicionar conjugado anti IgG Adaptado de: Laboratory Testing for Chikungunya Virus, Dr. R. Lanciotti, CDC

19 Enzyme Inmunosorbent linked Assay: Técnica Inmunoenzimática: ELISA Basada en la especificidad de la Respuesta Inmune. Enzima produce color en la reacción al reaccionar con su sustrato. Centro Nacional Centro Nacional de Diagnostico de Diagnostico y Referencia y Referencia Dpto. Virología Dpto. Vrología 26/09/ /09/2012

20 Ensayos serológicos: Neutralización Ensayo de Neutralización por Reducción de Placas (PRNT) Incubar diluciones del suero del paciente + virus Interpretación: 100 plaques = No hay anticuerpos presentes en la muestra 90% de reducción de placas= anticuerpos presentes Neutralización No neutralización Adaptado de: Laboratory Testing for Chikungunya Virus, Dr. R. Lanciotti, CDC Centro Nacional de Diagnostico y Referencia Dpto. Vrología 25/09/2012

21 Chikungunya: papel del laboratorio Los laboratorios deben implementar y fortalecer la capacidad diagnóstica básica para detección viral Limitaciones de los ensayos serológicos: No existen estuches comerciales validados ni avalados por OPS/OMS Las pruebas rápidas presentan muy baja sensibilidad Detección de IgM/IgG: ELISA in house (CDC) relativamente compleja, exigente Los ensayos serológicos (única muestra) son presuntivos Reacción cruzada con otros flavivirus (especialmente Mayaro) Centro Nacional de Diagnostico y Referencia Dpto. Vrología 25/09/2012

22 Chikungunya: papel del laboratorio Ensayo confirmativo recomendado: CDC CHIK Real-Time RT-PCR Diseño original: 4 iniciadores/2 sondas (actualizado, 2014) Detecta todos los genotipos de CHIK (WA, SCEA, & Asia) 25 copias/reacción (alta sensibilidad) CHIKV Diagnóstico por laboratorio Centro Nacional de Diagnostico y Referencia Dpto. Vrología 25/09/2012

23 Chikungunya: Vigilancia por laboratorio Algoritmo propuesto por OPS para la detección y confirmación inicial de casos autóctonos de Chikungunya, en áreas donde aún no ha sido reportado El algoritmo esta basado en la vigilancia del dengue como principal dx diferencial en la región Disponible en: CHIKV Diagnóstico por laboratorio Centro Nacional de Diagnostico y Referencia Dpto. Vrología 25/09/2012

24 Selección de muestras (áreas donde no se ha demostrado circulación -Muestras negativas para dengue, en pacientes con artralgia grave o artritis no explicada por otra condición médica. -Muestras de pacientes que cumplan con la definición de caso sospechoso. Paciente con inicio de fiebre aguda >38,5oC y artralgia grave o artritis no explicada por otra condición médica, que reside en o ha visitado áreas epidémicas o endémicas entre las dos semanas previas al inicio de los síntomas - Conglomerados de pacientes con fiebre y artralgias graves

25 CHIKV Diagnóstico por laboratorio

26 Caso confirmado Cualquier caso sospechoso con resultado positivo en alguno de los siguientes ensayos: -Detección de ácidos nucleicos (RT-PCR). -Aislamiento viral (en BSL3). Detección de IgM (en muestra aguda), seguida de un ensayo de neutralización positivo. -Seroconversión (ELISA IgM/IgG) o aumento en el título de anticuerpos por neutralización en muestras pareadas.

27 Chikungunya: papel del laboratorio Los centros colaboradores y laboratorios de referencia en la región, juegan un papel primordial en la confirmación (serológica) de los casos Una vez demostrada la circulación viral autóctona, no será necesario confirmar el 100% de los casos

28 Chikungunya: Vigilancia por laboratorio Se deben ajustar los protocolos de vigilancia para no sobrecargar los laboratorios, considerando la confirmación de los casos graves pero sólo un porcentaje o número limitado de muestras ambulatorias con fines de vigilancia (no diagnóstico individual) El laboratorio juega un papel fundamental para la detección de los casos iniciales; sin embargo, los programas de vigilancia deben articular además el componente clínico, epidemiológico, ambiental y social para lograr una adecuada caracterización y control de brotes

29 Gracias!