Vol. 9 núm.2 julio Cabras de cuatro cuernos. Una deleción en un gen incrementa la prolificidad de la Rasa Aragonesa

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1 Vol. 9 núm.2 julio 2008 Cabras de cuatro cuernos Una deleción en un gen incrementa la prolificidad de la Rasa Aragonesa

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3 SUMARIO 4 SEOC informa ARTÍCULOS TÉCNICOS Factores que afectan a los análisis físico-químicos y al diagnóstico en las muestra de leche de cabra J.AMORES;A.SÁNCHEZ;D.SIERRA ;C.LUENGO ;A.GÓMEZ;J.C.CORRALES;C.DELAFE;A.CONTRE- RAS; C. GONZALO 21 Las Indicaciones Geográficas Protegidas en el sector de los pequeños rumiantes españoles: Ternasco de Aragón CONSEJO REGULADOR DE LA INDICACIÓN GEOGRÁFICA PROTEGIDA TERNASCO DE ARAGÓN 21 ARTÍCULOS DE INVESTIGACIÓN 24 Una deleción de 17 pares de bases en el gen BMP15 (ligado al cromosoma X) incrementa la prolificidad en la raza ovina Rasa Aragonesa L. V. MONTEAGUDO, R. PONZ, M. T. TEJEDOR, A. LAVIÑA, I. SIERRA 32 Cabras de cuatro cuernos (Cabras Políceras o Multihorned goats ) I. SIERRA; M. HERRERA; M.T. TEJEDOR; L.V. MONTEAGUDO 24 ESTUDIOS DE INTERÉS 40 NOTAS DE PRENSA 45 NORMAS DE PUBLICACIÓN NEWSLETTER: Si deseas recibir la NEWSLETTER mensual de la SEOC, te rogamos envies tu nombre, apellidos y mail de contacto a: Te informaremos de las novedades del sector! 32 Créditos FOTOGRAFÍA DE PORTADA A. ABECIA EDITA SEOC COORDINADOR ALFONSO ABECIA MARTÍNEZ MAQUETACIÓN, PUBLICIDAD Y DISTRIBUCIÓN PASAJE MERCADER, BARCELONA TEL FAX DEPOSITO LEGAL B ISSN Queda prohibida la reproducción total o parcial del contenido de Pequeños Rumiantes sin previa autorizción escrita. La responsabilidad de los artículos, reportajes, comunicados, etc. recae exclusivamente sobre sus autores. La SEOC sólo se responsabiliza de sus artículos o editoriales. En virtud de lo dispuesto en el artículo 30.2 de la Ley 15/1999, de Protección de Datos de Carácter Personal, la SEOC le informa de que dispone de un fichero con datos de carácter personal, cuya finalidad es la distribución de publicaciones, el envíodematerialadministrativoyocasionalmentepublicitario.los datos necesarios para el envío de esta publicación han sido obtenidos de la SEOC y de fuentes accesibles al público. El responsable deltratamientoeslaseoc.paraejecutarlosderechosdeoposición, acceso, rectificación y cancelación, en el ámbito reconocido por la Ley 15/1999, puede dirigirse por escrito a la SEOC, Facultad de Veterinaria de Zaragoza, Miguel Servet 177, Zaragoza.

4 SEOC INFORMA RESUMEN FOTOGRÁFICO DE LAS JORNADAS TÉCNICAS SEOC Carlos Palacios en acci n Antonio (Felixcan) explicando en la explotaci n de Colungo, cerca de Barbastro (Rasa Aragonesa) Segundo grupo de Barbastro Alguno de los asistentes a Barbastro El grupo de Olmedo Primer grupo de Barbastro Juan Pedro (CEVA) hablando a los asistentes a Olmedo 4

5 SEOC INFORMA Los asistentes al primer grupo, en el CERSYRA de Valdepe as Asistiendo a la demostraci n pr ctica en el IFAPA de Hinojosa Hinojosa del Duque, grupo 1 Colegas Concentrados en la charla El segundo grupo de Valdepe as En la explotaci n de AGRAMA Juan Pedro y Carlos explicando en Valdepe as Carlos Palacios con el segundo grupo de Hinojosa 5

6 SEOC INFORMA XXXIII JORNADAS CIENTÍFICAS Y XII JORNADAS INTERNACIONALES DE OVINOTECNIA Y CAPRINOTECNIA X JORNADAS CAPRINO Y OVINO DE ALMERÍA Almería, 24, 25, 26 y 27 de Septiembre de 2008 BOLETÍN DE INSCRIPCIÓN POR FAVOR, ENVIAR POR FAX A: VIAJES EL CORTE INGLÉS, S.A. DIVISION DE CONGRESOS TENIENTE BORGES, SEVILLA TELF: FAX.: CONTACTAR CON: SUSANA MORALES - ISMAEL CASTRO NOMBRE: APELLIDOS:... DIRECCION:... CIUDAD: CP: TELFONO:.... FAX:. DNI:... CENTRO DE TRABAJO:. CUOTA DE INSCRIPCION CONGRESISTA ANTES DEL 31 DE JULIO DESPUÉS DEL 31 DE JULIO SOCIOS 160,00 210,00 NO SOCIOS 220,00 300,00 ESTUDIANTES * 105,00 125,00 ACOMPAÑANTES * 120,00 140,00 * La condición de estudiante deberá ser acreditada mediante certificación académica de estar matriculado en curso de grado * Cuota Acompañante: Incluye visitas guiadas, comidas y cena de gala NOMBRE / APELLIDOS ACOMPAÑANTE... TOTAL INSCRIPCIONES: Euros FORMA DE PAGO: TARJETA DE CREDITO: EL CORTE INGLÉS AMERICAN EXPRESS VISA MASTER CARD DINNERS CLUB TITULAR DE LA TARJETA: NUMERO TARJETA DE CREDITO FECHA DE CADUCIDAD: (FIRMA DEL TITULAR OBLIGATORIA) Autorizo a Viajes El Corte Inglés a cargar en mi tarjeta de Crédito el importe total arriba indicado: TRANSFERENCIA BANCARIA: (OBLIGATORIO ENVIAR COPIA POR FAX) todos los gastos derivados por la transferencia serán soportados por el ordenante. TITULAR: VIAJES EL CORTE INGLÉS, S.A. BANCO : SANTANDER CENTRAL HISPANO. OFICINA DE EMPRESAS DIRECCION: PLAZA DE CANALEJAS, MADRID. ESPAÑA NUMERO DE CUENTA: GASTOS DE CANCELACIÓN - Antes del 24 de Agosto de 2008 los inscritos tienen derecho a la devolución total menos un 10% en concepto de gastos de administración. - Antes del 14 de Septiembre de 2008 los inscritos tienen derecho a la devolución total menos un 20% en concepto de gastos de administración días antes del inicio del Congreso (24 de septiembre) se perderá el derecho a la devolución de las cuotas de inscripción. 6 De acuerdo con lo establecido en la regulación LO 15/99 referente a la protección de datos personales, les informamos que la información facilitada será incorporada a una base de datos bajo la responsabilidad de la Sociedad SEOC. Dicha información sólo será utilizada para promoción y otras actividades relacionadas con las Jornadas. Está en su derecho de modificar o cancelar sus datos. Si este es el caso, debe remitir un escrito a nuestras oficinas.

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8 SEOC INFORMA PROGRAMA PROVISIONAL DE LAS JORNADAS DE ALMERÍA HORARIO MIÉRCOLES 24 JUEVES 25 HORARIO VIERNES 26 SÁBADO 27 8:30-9:30 Acreditación y documentación 9:00-10:00 3ª Sesión de comunicaciones 9:30-11:00 1aPonencia:SituaciónepidemiológicaactualdelaLengua Azul 10:00-11:00 2a Ponencia: La leche líquida de pequeños rumiantes: calidad y objetivos de mercado en alimentación humana 11:00-12:00 Saludo de bienvenida e inauguración 11:00-11:30 Café 12:00-12:30 Café 11:30-12:30 3a Ponencia: Avances en inmunología y métodos de diagnostico en la tuberculosis caprina 12:30-13:00 Acciones de la CAP-Andaluza 12:30-13:30 13:30-14:00 14:00-14:30 13:00-14:00 1a Sesión comunicaciones Directrices Plataforma FABRE Presentación Comercial Exopol Presentación Comercial Zotal Visita técnica 14:00-15:00 Comida de trabajo 14:30-15:30 Comida de trabajo 15:00-16:00 Acreditación y documentación Sesión explicativa de póster 15:45-16:45 4a Sesión de comunicaciones 16:00-17:00 Jornada Satélite 2a Sesión de comunicaciones 17:00-19:00 Mesa Redonda: Marcas de calidad en Productos cárnicos de pequeños rumiantes: Realidad o mito 17:00-18:00 Asamblea General socios 18:00-19:00 21:00 Recepción Ciudad Cena de Fraternidad SEOC 8

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10 SEOC INFORMA XXXIII JORNADAS CIENTÍFICAS Y XII JORNADAS INTERNACIONALES DE OVINOTECNIA Y CAPRINOTECNIA Almería, 24, 25, 26 y 27 de Septiembre de 2008 BOLETÍN DE ALOJAMIENTO POR FAVOR, ENVIAR POR FAX A: VIAJES EL CORTE INGLÉS, S.A. DIVISION DE CONGRESOS TENIENTE BORGES, SEVILLA TELF: FAX.: CONTACTAR CON: SUSANA MORALES - ISMAEL CASTRO NOMBRE: APELLIDOS:... DIRECCION:... CIUDAD: CP: TELFONO:.... FAX:. DNI:... CENTRO DE TRABAJO:. * PRECIOS POR HABITACION Y POR NOCHE, DESAYUNO E IVA INCLUIDOS ALOJAMIENTO HABITACIÓN DOBLE HABITACIÓN DUI HOTEL VINCCI MEDITERRANEO 4* 77,00 72,00 HOTEL TORRELUZ III 3* 70,00 64,00 HOTEL TRYP ÍNDALO 4* 70,00 63,00 HOTEL SOL ALMERÍA 2* 65,00 46,00 HOTEL ELBA ALMERÍA 4* 62,00 62,00 HOTEL TORRELUZ II 2* 60,00 53,50 HOTEL CITYMAR INDÁLICO 3* 46,00 42,00 PREFERENCIA DE HOTELES: 1º 2º 3º 4º FECHA DE LLEGADA: FECHA DE SALIDA Nº HABITACIONES DOBLES x NOCHES x Euros = Euros Nº HABITACIONES SINGLE x NOCHES x Euros = Euros TOTAL ALOJAMIENTO: Euros FORMA DE PAGO: TARJETA DE CREDITO: EL CORTE INGLÉS AMERICAN EXPRESS VISA MASTER CARD DINNERS CLUB TITULAR DE LA TARJETA: NUMERO TARJETA DE CREDITO FECHA DE CADUCIDAD: (FIRMA DEL TITULAR OBLIGATORIA) Autorizo a Viajes El Corte Inglés a cargar en mi tarjeta de Crédito el importe total arriba indicado: TRANSFERENCIA BANCARIA: (OBLIGATORIO ENVIAR COPIA POR FAX) todos los gastos derivados por la transferencia serán soportados por el ordenante. TITULAR: VIAJES EL CORTE INGLÉS, S.A. BANCO : SANTANDER CENTRAL HISPANO. OFICINA DE EMPRESAS DIRECCION: PLAZA DE CANALEJAS, MADRID. ESPAÑA NUMERO DE CUENTA: En cumplimiento de lo impuesto en la LO 15/99 de Protección de Datos de Carácter Personal, le informamos de que los datos personales facilitados por Ud., serán incorporados a un fichero responsabilidad de Viajes El Corte Inglés, S.A. para facilidades de promoción relacionadas con el evento. La cumplimentación del presente formulario autoriza a Viajes El Corte Inglés, S.A. para usar los datos personales facilitados con la finalidad citada. Podrá ejercitar sus derechos de acceso, rectificación y cancelación, en su caso, en nuestras oficinas.

11 ARTÍCULOS TÉCNICOS Factores que afectan a los análisis físico-químicos y al diagnóstico en las muestras de leche de cabra pr 9, núm. 2: (2008) J. AMORES 1 ; A. SÁNCHEZ* 1 ; D. SIERRA 2 ; C LUENGO 2 ; A. GÓMEZ 1 ; J.C. CORRALES 1 ; C. DE LA FE 1 ; A. CONTRERAS 1 ; C. GONZALO 3 1 Grupo de investigación Sanidad Caprina. Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad de Murcia. 2 Laboratorio Agroalimentario y de Sanidad Animal, Consejería de Agricultura y Agua, Comunidad Autónoma de la Región de Murcia. 3 Departamento de Producción Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad de León. * El seguimiento de los distintos parámetros medidos en las muestras de leche representa el pilar fundamental de los programas de mejora productiva y sanitaria desarrollados en el ganado caprino lechero. Habida cuenta de las diferentes posibilidades de manejo y conservación de las muestras, el presente trabajo revisa el efecto de las condiciones analíticas de las mismas sobre las determinaciones obtenidas en las muestras de leche de cabra mediante los métodos instrumentales utilizados en los laboratorios lactológicos. Entre los factores que contribuyen de forma significativa a la variación de los valores del recuento de células somáticas y composición físico-química de la leche se han identificado la temperaturadealmacenamiento (refrigeración o congelación), el conservante utilizado (sin conservante, bronopol o azidiol) y la interaccióndedichosfactoresenrelación con el tiempo de almacenamiento. No obstante, y a efectos de la interpretación práctica de dichos valores, las diferencias obtenidaspermitenunamplioabanicode posibilidades de conservación y almacenamiento de las muestras de leche de cabra. En cualquier caso, las diferentes condiciones analíticas citadas deberán definirse, de forma precisa, para cada uno de los parámetros a considerar en los ensayos intercolaborativos y de control de calidad, que desarrollen los laboratorios lactológicos. La posibilidad de utilizar las diferentes muestras de leche que se toman de forma regular en la explotación con fines diagnósticos. supone un incremento en el valor añadido de las mismas. Previamente a la utilización de las muestras de leche adicionadas con conservantes para su aplicación diagnóstica, debe definirse el umbral de detección de cada agente patógeno (i.e. Mycoplasma spp.) paracadaunadelasposiblescondiciones Foto: Grupo de Investigación Sanidad Caprina deconservaciónyalmacenamientoenrelación con la técnica a aplicar. De cara al diagnóstico individual de la infección intramamariasubclínica,laviabilidaddelos principalespatógenosenlasmuestrasde lechecongeladaspermiteoptimizartanto la recogida como el análisis bacteriológico de las mismas. 11

12 ARTÍCULOS TÉCNICOS 12 INTRODUCCIÓN En los rebaños caprinos de aptitud láctea se recogen muestras de leche tanto para los programas de control lechero (muestraindividualdecadaanimal,periodicidad de 42 días) como para los programas de pago por calidad (muestra de leche de tanque,periodicidadde1-2muestraspor semana), además de las muestras de controloficialgestionadasporlasadministracionespúblicasylosprogramasdecontrol de mamitis establecidos a nivel colectivo o individual por los productores. En la mayoríadelascomunidadesautónomas,las muestras de leche de cabra correspondientes al Control Lechero Oficial se adicionan con bronopol (BR), mientras que en las muestras de leche de tanque destinadasalosprogramasdepagoporcalidad y en las destinadas al control oficial se utiliza como conservante el azidiol (AZ). Por el contrario, desde el punto de vista del diagnósticomicrobiológico,lamuestrade leche de elección debe permanecer libre deconservantes.lasdiferentescondiciones de almacenamiento y conservación posibles obligan a establecer el efecto de las mismas sobre cada uno de los procedimientosanalíticosaaplicar,permitiendo así definir su influencia en la precisión de las distintas determinaciones. Al mismo tiempo, la posibilidad de ampliar el rango de determinaciones sobre una muestra de leche en condiciones de conservación conocidas, supone incrementar el valor añadido de dicha muestra, optimizando así el esfuerzo logístico y económico que representa su recogida. Por todo ello, el presente trabajo pretende revisar el efecto de los diferentes conservantes, así como de la temperatura y el tiempo de almacenamiento, sobre las principales determinaciones analíticas a realizar en las muestras de leche de cabra mediante los equipos instrumentales utilizados en los laboratorios lactológicos. Además, se comentan diferentes estrategias de toma y conservación de las muestras de leche que tienen interés desde el punto de vista diagnóstico en el ganado caprino. RECUENTO DE CÉLULAS SOMÁTICAS Entre los factores que contribuyen de forma significativa a la variación de los valores del recuento de células somáticas (RCS), determinados en leche de cabra mediante contadores celulares basados en la citometría de flujo (Fossomatic FC, Foss Electric, Hillerød, Denmark), se han identificado la temperatura de almacenamiento, el conservante utilizado y la interacción de dichos factores en relación con el tiempo de almacenamiento (Sánchez et al., Azidiol Bronopol Sinconservante MMC ES MMC ES MMC ES Log RCS 5,803 a 0,0018 5,877 b 0,0018 5,858 c 0,0020 RCS Grasa (%) 5,352 a 0,0045 5,396 b 0,0045 5,396 b 051 0, Proteínas totales (%) 3,541 a 0,0010 3,574 b 0,0010 3,565 c 0,0011 Lactosa (%) 4,655 a 0,0012 4,686 b 0,0012 4,673 c 0,0014 Sólidos totales (%) 14,538 a 0, ,622 b 0, , c 0, a,b,c Medias con distinto superíndice en una misma fila difieren significativamente (P < 0,05). 1 Media geométrica (x10 3 /ml). RCS: Recuento de Células Somáticas Tabla 1. Media de mínimos cuadrados (MMC) y error estándar (ES) de los diferentes componentes de leche de cabra según los conservantes utilizados (Sánchez et al., 2005). 2005). En relación con los conservantes, las muestras adicionadas con BR presentaron valores de RCS superiores a los obtenidos en las muestras sin conservante (SC) y en aquellas tratadas con AZ, que son las que arrojaron los valores más bajos de RCS (Tabla 1). Para explicar dicho efecto, observado previamente en leche de oveja (Gonzalo et al., 2003, 2004), se ha propuesto La utilización generalizada de los métodos instrumentales de análisis de leche en los laboratorioslactológicoshacenecesarioconocerelefectodelascondicionesanalíticas sobre los valores obtenidos Foto: Grupo de Investigación Sanidad Caprina

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14 ARTÍCULOS TÉCNICOS 14 Muestras de leche con diferentes formas de conservación. De izquierda a derecha: azidiol, bronopol y sin conservante El colorante a utilizar en las fórmulas de los diferentes conservantes se decide en cada laboratorio, con la excepción del azidiol que incluye el azul de bromofenol (según la fórmula del R.D. 1728/2007) Congelación ES Refrigeración ES Log RCS 5,830a 0,0017 5,862 b 0,0013 RCS Proteínas totales (%) 3,563 a 0,0009 3,556 b 0,0007 Lactosa (%) 4,675 a 0,0012 4,668 b 0,0009 Sólidos Totales (%) 14,577 a 0, ,599 b 0,0040 a,b Medias con distinto superíndice en la misma fila difieren significativamente (P < 0,001). 1 Media geométrica (x10 3 /ml). RCS: Recuento de Células Somáticas Tabla 2. Medias de mínimos cuadrados y error estándar (ES) de los diferentes componentes de la leche de cabra según la temperatura de almacenamiento (Sánchez et al. 2005). Foto: Grupo de Investigación Sanidad Caprina Foto: Grupo de Investigación Sanidad Caprina que el BR permite una mayor penetración del bromuro de etidio en el interior de las células, determinando señales fluorescentes de mayor intensidad en los contadores fluoro-opto electrónicos (Ardö, 1982). Aunque la congelación determinó una reducción significativa del RCS (Tabla 2), dicho efecto se encontró modificado por el conservante utilizado. Así, al considerar la interacción del efecto del conservante y la temperatura de almacenamiento, se evidenció que la congelación reduce el RCS en las muestras que han sido tratadas con AZ y en aquellas SC, pero los resultados no se modificaron cuando el conservante empleado fue el BR (comportamiento ya observado en leche de oveja; Martínez et al., 2003). Cuando las muestras se almacenaron a temperatura de refrigeración se obtuvieron RCS similares en las muestras SC y con BR, siendo superiores en ambos casos a las adicionadas con AZ. En relación con el tiempo de almacenamiento, en las muestras SC almacenadas en refrigeración no se observaron variaciones significativas en el RCS durante los primeros 13 días. Las muestras refrigeradas adicionadas con conservantes aumentaron su vida útil, si bien el RCS fue disminuyendo durante el tiempo de almacenamiento (Figura 1). Esta reducción fue mayor al utilizar como conservante el AZ frente al BR (reducción del 15,2% y del 6,9% a los 25 días en refrigeración para las muestras adicionadas con AZ y BR, respectivamente). Por el contrario, la estabilidad de los valores de RCS observada en las muestras adicionadas con BR, permite el almacenamiento en refrigeración de las mismas hasta los 25 días post-recogida, así como su congelación durante períodos superiores de tiempo (Figura 2). En la práctica, las muestras suelen ser procesadas a las horas post-recogida. No obstante, si por cuestiones logísticas las muestras tuvieran que ser procesadas el mismo día de la recogida, se ha observado que ni la adición de BR, ni el incremento de la temperatura de análisis de 40ºC a 60ºC, mejora los valores de RCS obtenidosenloscontadorescelularesbasados en la citometría de flujo (Sierra et al., 2006).

15 ARTÍCULOS TÉCNICOS COMPOSICIÓN FÍSICO-QUÍMICA Grasa, proteína, lactosa y sólidos totales La adición de conservantes ha resultado ser uno de los factores más relevantes que modifican los valores de los componentes de la leche de cabra, determinados por el método basado en tecnología FTIR (Fourier transform infrared analysis) de espectro completo (MilkoScan FT 6000, Foss Electric, Hillerød, Denmark) (Sánchez et al., 2005). Así, los mayores porcentajes de proteína, lactosa, y sólidos totales se observaron en muestras con BR, frente a las muestras SC y con AZ, las cuales obtuvieron los valores más bajos. Los porcentajes de grasa obtenidos en las muestras adicionadas con BR y en las muestras SC no presentaron diferencias significativas, y fueron mayores que los obtenidos en las muestras con AZ (Tabla 1). Al considerar el efecto de la temperatura de almacenamiento, se obtuvieron valores significativamente más elevados en el porcentaje de lactosa para las muestras congeladas frente a las refrigeradas, si bien dicho efecto no se observó en las muestras adicionadas con conservantes. Por el contrario, los valores de grasa no se vieron afectados por la temperatura de almacenamiento,mientrasqueelporcentaje de proteína total fue superior en las muestras congeladas, obteniéndose el efecto contrario en los valores de sólidos totales (Tabla 2). En las muestras conservadas con BR, los valores de grasa, proteína, lactosa y sólidos totales permanecieron estables, frente al valor de referencia (obtenido a las 24 horas), durante los 42 y 105 días almacenados en refrigeraciónycongelación,respectivamente (Sánchez et al., 2005). Si bien los diferentes factores comentados modifican, de forma significativa, los valores de RCS y composición obtenidos por los métodos instrumentales, a efectos de la interpretación práctica de dichos valores las diferencias obtenidas permiten un amplio abanico de posibilidadesdeconservaciónyalmacenamiento de las muestras de leche de cabra. Al mismo tiempo, hay que considerar que, las muestras conservadas con AZ (18 g de azida sódica y 0,75 g de cloranfenicol en 1 litro de conservante a razón de 133 µl de AZ/40 ml de leche, de acuerdo con la fórmula del AZ definida en el Real Decreto 1728/2007), permiten la determinación del recuento total de bacterias mediante la técnica de citometría de flujo (Bactoscan FC, Foss Electric, Hillerød, Denmar) y la detección de residuos de antibióticos mediante los métodos microbiológicos de cribado. En este sentido, existen evidencias en leche de otras especies (i.e. oveja) de que la utilización Log RCS de AZ con mayores concentraciones de azida sódica y cloranfenicol disminuye la especificidad de los test de cribado (Molina et al., 2003, Montero et al., 2005). En cualquier caso, las diferentes condiciones analíticas citadas deberán definirse, de forma precisa, para cada uno de los parámetros a considerar en los ensayos intercolaborativos y de control de calidad que desarrollen los laboratorios lactológicos. Tiempo de almacenamiento Figura 1. Media de mínimos cuadrados del logaritmo del Recuento de Células Somáticas (RCS) en función del tratamiento de conservación (AZ: azidiol, BR: bronopol, SC: sin conservante) para muestras de leche almacenadas a temperatura de refrigeración (Sánchez et al., 2005). Tiempo de almacenamiento Días Figura2.MediademínimoscuadradosdellogaritmodelRecuentodeCélulasSomáticas (RCS) en función del tratamiento de conservación (AZ: azidiol, BR: bronopol, SC: sin conservante) en muestras de leche almacenadas a temperatura de congelación (Sánchez et al., 2005). 15

16 ARTÍCULOS TÉCNICOS 16 Punto crioscópico (mºc) Agua añadida (%) Figura 3. Media de mínimos cuadrados del punto crioscópico de la leche de cabra según el agua añadida y el conservante utilizado (SC: sin conservante; BR20: bronopol con 0,020 g de BR/100 ml de leche; BR40: bronopol con 0,040 g de BR/100 ml de leche; AZ6: azidiol con 0,006 g de azida sódica/100 ml de leche; AZ18: azidiol con 0,018 g de azida sódica/100 ml de leche) (Sánchez et al., 2007). Punto crioscópico El seguimiento de los valores del punto criocóspico (PC) a nivel de tanque, permite evaluar la presencia de agua añadida a la leche, resultante tanto de operaciones de manejo del ordeño como de actividades fraudulentas. En este sentido, se ha determinado experimentalmente que, por cada unidad porcentual de agua añadida el PC, se incrementa en 6 mºc (Sánchez et al., 2007), coincidiendo con las estimaciones matemáticas previamente obtenidas en leche de cabra (Szijarto y Van de Voort, 1983). Los cambios provocados en la osmolaridad de la leche determinan que la adición de conservantes, así como la concentración de estos utilizada, sean factores importantes de variación en la determinación del PC de la leche de cabra utilizando el método instrumental (MilkoScan FT 6000) y el método de referencia (crioscopia con termistor, The Advanced Cryoscope. Advanced Instrument Inc. Massachusetts, USA) (Sánchez et al., 2007). Así, las menores diferencias en el PC se han obtenido en las muestras SC y en las muestras conservadas con BR20 (0,020 g de BR/100 ml de leche) y BR40 (0,040 g de BR/100 ml de leche). Por el contrario, los menores valores de PC fueron obtenidos en las muestras conservadas con AZ18 (azidiol con 0,018 g de azida sódica/100 ml de leche) y AZ6 (azidiol con 0,006 g de azida sódica/100 ml de leche). Los resultados obtenidos muestran que el aumento en la concentración de azida sódica en la fórmula del AZ provoca un importante descenso en los valores del PC. Al mismo tiempo, el efecto de los distintos conservantes y sus concentraciones sobre el PC de la leche de cabra, fue similar en los diferentes niveles de agua añadida (Figura 3). Por lo tanto, con el objetivo de evitar que la utilización de conservantes pueda enmascarar la presencia de agua extraña en la muestra de leche, el tipo de conservante y la concentración utilizada debe tenerse en cuenta en la interpretación de los valores de FP. OPCIONES DIAGNÓSTICAS Muestras de leche de tanque La disponibilidad de muestras de las explotaciones lecheras, como consecuencia de los programas de calidad de leche antes aludidos, permite extender su aplicación para la vigilancia epidemiológica de otras enfermedades infectocontagiosas, pues, además de agentes como en el caso de la agalaxia contagiosa, se pueden detectar anticuerpos inducidos por diferentes enfermedades de interés. En el ganado bovino lechero se realizan desde la última década programas de vigilanciadedeterminadasenfermedades, siendo validados diferentes métodos de diagnóstico, sobre leche de tanque, de agentes como Brucella abortus, Coxiella burnetti, Fasciola hepatica, Leptospira hardjo, Neospora caninum, Salmonella dublin, y diversos virus (herpesvirus bovino-1; diarrea vírica bovina; fiebre aftosa, leucosis bovina). Aunque esta tendencia ha sido menos desarrollada en los pequeños rumiantes, la muestra de leche también ha sido empleada con fines serológicos. En el ganado caprino se han realizado estudios enfocados a la detección de anticuerpos mediante la técnica ELISA, utilizando la muestra de leche para el diagnóstico de diferentes infecciones, como Brucella melitensis (Funk et al., 2005) o Mycobacteruim avium subsp. paratuberculosis (Salgado et al., 2005). En relación con el diagnóstico serológico del virus de la artritis-encefalitis caprina (VAEC), Motha y Ralston (1994) demostraron la validez de muestras de leche individuales para la detección de cabras infectadas por VAEC. El uso de la muestra de suero lácteo, en vez de la muestra de leche, aún mejora los resultados anteriores (Plaza et al., 2007), y se demuestra la ausencia de falsos positivos y la buena concordancia entre los resultados de la muestra de sangre y la de suero lácteo para el diagnóstico del VAEC. Agalaxia contagiosa En la práctica, una de las posibilidades diagnósticas de mayor interés que presenta la muestra de leche de tanque es la detección de Mycoplasma spp. en el rebaño. En el entorno de la cabra Murciano-Granadina, el análisis bacteriológico de las muestras de leche de tanque (refrigeradas y SC), ha permitido realizar el seguimiento de los rebaños frente a la principales especies de micoplasmas responsables de la agalaxia contagiosa (Corrales et al., 2004; Contreras et al., 2008). En los rebaños crónicamente infectados, el aislamiento de micoplasmas en una única muestra de leche de tanque durante la lactación presenta una baja sensibilidad (16,37%). En este

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18 ARTÍCULOS TÉCNICOS Foto: Grupo de Investigación Sanidad Caprina 18 sentido, habida cuenta de la excreción intermitente de Mycoplasma spp. y de la dinámica de la infección en el rebaño, el seguimiento de dichas infecciones, utilizando la muestra de leche de tanque, debe establecerse con un muestreo continuado en el tiempo, y debe utilizarse como información adicional para la toma de decisiones sobre la acreditación como rebaño libre o la aplicación de un programa de lucha. De forma complementaria al análisis microbiológico, en los últimos años se están aplicando nuevos métodos de detección basados en el ADN (la reacción en cadena de la polimerasa o PCR) que tienen a su favor la rapidez en la emisión del diagnóstico y la alta sensibilidad y especificidad de estas pruebas (Sachse, 2003). Algunas de estas técnicas, combinadas con procedimientos de extracción de ADN basados en las propiedades del sílice y de las sales caotrópicas, ya han sido utilizadas satisfactoriamente para la detección de Mycoplasma agalactiae (Tola et al., 1996, 1997) o del grupo M. mycoides (De la Fe et al., 2003) directamente de muestras de leche. Tantoelanálisisbacteriológicoespecífico como la detección de micoplasmas por PCR en muestras de leche de tanque SC, están siendo aplicados en los programas de vigilancia de la agalaxia contagiosa en los rebaños caprinos del Núcleo de Control Lechero de la Región de Murcia. Por otra parte, la posibilidad de utilizar las muestrasdelechedetanqueadicionadas con conservantes para el aislamiento y la detección de Mycoplasma spp. está siendo estudiada en la actualidad (Proyecto AGL GAN, financiado por la Dirección General de Investigación del Ministerio de Educación y Ciencia). Los resultados preliminares muestran diferencias en el efecto de los conservantes citados sobre la viabilidad de las diferentes especies de micoplasmas en la muestra de leche. No obstante, hasta que no se definan los umbrales de detección de las diferentes técnicas diagnósticas (análisis microbiológico específico y PCR) para cada una de las condiciones analíticas y de conservación posibles, no se podrán definir con precisión sus posibilidades diagnósticas. Diagnóstico individual de la infección intramamaria subclínica En los programas de control de mamitis, el diagnóstico bacteriológico de las muestras individuales de leche representa una herramienta insustituible tanto para la vigilancia de las diferentes especies patógenas presentes en los rebaños como para la toma de decisiones sobre los tratamientos de secado a aplicar. El diagnóstico correcto de la infección intramamaria subclínica en una glándula mamaria, requiere el aislamiento del mismo patógeno, como mínimo, en dos muestras consecutivas de leche separadas al menos 24h (Sears et al., 1993). Sin embargo, por razones prácticas y económicas se suele utilizar una única muestra de leche. En el ganado caprino es conocida la mayor frecuencia, así como la capacidad de per-

19 ARTÍCULOS TÉCNICOS sistencia, de las infecciones por estafilococos coagulasa negativos. Para dicho grupo bacteriano, la utilización de una única muestra de leche tomada antes del ordeño, presenta unos parámetros de validez adecuados que permiten su utilización (sensibilidad: 95,9%, especificidad: 97,4%, valor predictivo positivo: 67,6%, valor predictivo negativo: 99,8%) (Contreras et al., 1997). No obstante, ante la presencia de falsos positivos, se ha recomendado realizar el diagnóstico utilizando muestras de leche únicas tomadas después del ordeño ya que presenta valores superiores de especificidad (99,4%) (Sánchez et al., 2004). Laposibilidaddeagruparyseleccionarlas muestras de leche individuales que serán sometidas al análisis bacteriológico, permitereducirelcostefinaldelosprogramas de control de mamitis. En este sentido, la viabilidad de los diferentes patógenos intramamarios (estafilococoscoagulasanegativos y bacilos Gram negativos) en las muestras de leche de cabra congeladas durante períodos de tiempo superiores a la lactación (Sánchez et al., 2003), permite la congelación doméstica de las muestras sospechosas y su selección posterior considerandootrosparámetroscomoson el RCS (Luengo et al., 2004) o el número de parto (Sánchez et al., 1999). AGRADECIMIENTOS Parte de los trabajos citados se han desarrollado en el Proyecto AGL GAN,financiado por ladireccióngeneraldeinvestigación del Ministerio de Educación y Ciencia. Joaquín Amores Iniesta disfruta de una beca de F.P.I del Ministerio de Educación y Ciencia asociada al proyecto de referencia. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS - ARDÖ, Y Bronopol as a preservative in milk samples for the determination of cell content using Fossomatic. Milchwissenschaft, 37: CONTRERAS, A., CORRALES, J.C., SANCHEZ, A., SIERRA, D Persistence of subclinical intramammary pathogens in goats throughout lactation. Journal of Dairy Science, 80: CONTRERAS, A., MIRANDA R.E., SÁNCHEZ, A., DE LA FE, C., SIERRA, D., LUENGO, C. CORRALES, J.C Presence of Mycoplasma species and somatic cell counts in bulk-tank goat milk. Small Ruminant Research, 75: CORRALES, J.C., A. SÁNCHEZ, C. LUENGO, J.B. POVEDA, y A. CONTRERAS Effect of clinical contagious agalactia on the bulk tank milk somatic cell counts in Murciano-Granadina goat herds. Journal of Dairy Science, 87: DE LA FE, C., ASSUNÇAO, P., RAMIREZ, AS. y POVEDA, J.B Rapid detection of mycoplasmas from cluster mycoides in goat milk samples by PCR. Mycoplasma diseases of ruminants: Diagnosis, treatment and control, Sicilia, Italia. - FUNK N.D., TABATABAI, L.B., ELZER, P.H,, HAGIUS, S.D,, MARTIN, B.M., HOFFMAN, L.J., Indirect enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Brucella melitensis-specific antibodies in goat milk. Journal of Clinical Microbiology, 43: GONZALO, C., J. R. MARTÍNEZ, J. A. CARRIEDO, F. SAN PIMITIVO Fossomatic cell-counting on ewe milk: comparison with direct microscopy and study of variation factors. Journal of Dairy Science, 86: GONZALO, C., J. C. BOIXO, J. A. CARRIEDO, F. SAN PRIMITIVO Evaluation of rapid somatic cell counters under different analytical conditions in ovine milk. Journal of Dairy Science. 87: LUENGO, C., A. SÁNCHEZ, J.C. CORRALES, C. FERNÁNDEZ, y A. CONTRERAS Influence of intramammary infection and noninfectious factors on somatic cell counts in dairy goats. Journal of Dairy Research. 71: MARTÍNEZ, J.R., GONZALO C., CARRIEDO J.A., SAN PRIMITIVO F Effect of freezing on fossomatic cell counting in ewe milk. Journal of Dairy Science, 86: MOLINA, M.P., ALTHAUS, R.L., TORRES, A., PERIS, C., FERNÁNDEZ, N Evaluation of screening test for detection of antimicrobial residues in ewe milk. Journal of Dairy Science, 86: MONTERO, A., ALTHAUS, R.L., MOLINA, A., BERRUGA, I., MOLINA, M.P Detection of antimicrobial agents by a specific microbiological method (Eclipse100 ) for ewe milk. Small Ruminant Research, 57: MOTHA, M.X., RALSTON, J.C Evaluation of ELISA for detection of antibodies to CAEV in milk. Veteterinary Microbiology, 38:

20 ARTÍCULOS TÉCNICOS - PLAZA M., SÁNCHEZ, A., CORRALES, J.C., DE LA FE, C., HERNÁNDEZ BALSERA, F., MARTÍNEZ-PARRA, J., CONTRERAS, A Using goat milk samples to diagnosed Caprine Arthritis Encephalitis Virus by ELISA. 5th International Symposium on the Challenge to Sheep and Goats Milk Sectors. Alghero/Sardinia, Italy. - Real Decreto 1728/2007 de 21 de diciembre, por el que se establece la normativa básica de control que deben cumplir los operadores del sector lácteo y se modifica el Real Decreto 217/2004, de 6 de febrero, por el que se regulan la identificación y registro de los agentes, establecimientos y contenedores que intervienen en el sector lácteo, y el registro de los movimientos de la leche. BOE nº 15, 17 de enero de SACHSE, K Specificity and perfomance of diagnostic PCR assays. In Methods in Molecular Biology, vol. 216 en: PCR detection of microbial pathogens: methods and protocols, Edited by Sachse, K. & Frey, J. Totowa, USA. Humana Press Inc. - SALGADO, M., MANNING, E.J.B., COLLINS, M.T Performance of a Johne s disease enzyme-linked immunosorbent assay adapted for milk samples from goats. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 17: SÁNCHEZ, A., CONTRERAS, A, CORRALES, J.C Parity as a risk factor for caprine subclinical intramammary infection. Small Ruminant Research, 3: SÁNCHEZ A., CONTRERAS, A., JIMÉNEZ, J., LUENGO, C., CORRALES, J.C., FERNÁNDEZ, C Effect of freezing goat milk samples on recovery of intramammary bacterial pathogens. Veterinary Microbiology, 94: SÁNCHEZ A., CONTRERAS, A., CORRALES, J.C., MUÑOZ, P Influence of sampling time on bacteriological diagnosis of goat intramammary infection. Veterinary Microbiology, 98: SÁNCHEZ, A., SIERRA, D., LUENGO, C., CORRALES, J.C., MORALES, C.T., CONTRERAS, A., GONZALO, C Influence of storage and preservation on Fossomatic cell count and composition of goat milk. Journal of Dairy Science, 88: SÁNCHEZ, A., SIERRA, D., LUENGO, C., CORRALES, J.C., DE LA FE, C., MORALES, C.T., CONTRERAS, A., GONZALO, C Evaluation of the MilkoScan FT 6000 Milk Analyzer for Determining the Freezing Point of Goat s Milk Under Different Analytical Conditions. Journal of Dairy Science, 90: SEARS, P.M., GONZALEZ, R.N., WILSON, D.J., HAN, H.R Procedures for mastitis diagnosis and control. Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice, 9: SIERRA, D., SÁNCHEZ, A., LUENGO, C., CORRALES, J.C., MORALES, C. T., CONTRERAS, A., GONZALO, C Temperature effects on Fossomatic cell counts in goats milk. International Dairy Journal, 16: SZIJARTO, L., VAN DE VOORT, F. R Determination of added water and bovine milk to caprine milk. Journal of Dairy Science, 66: TOLA, S., IDINI, G., MANUNTA, D., GALLERI, G., ANGIOI, P.P., ROCCHIGIANI, A.M., LEORI, G Rapid and specific detection of Mycoplasma agalactiae by polymerase chain reaction. Veterinary Microbiology, 51, Summary Monitoring the different parameters studied in milk samples represents the main base of productive and healthy improvement programs developed in dairy goat herds. Taking into account the different storage and preservation procedures, the present study reviews the effect of the different conditions in the analysis of goat milk samples by instrumental methods used in milk laboratories. Among the factors that contribute significantly to the Somatic Cell Count and composition variation, can be identified the storage temperature (refrigeration or freezing), preservative (no preservative, bronopol or azidiol) and the interaction of both factors with time. Nevertheless, in a practical interpretation of these values, the differences allow a wide range of preservation and storage. However, different analytical conditions for each milk parameter should be taken into account for intra- and inter-laboratory quality control schemes in milk laboratories. The possibility of using the different milk samples for diagnostic increases their value. Previously to the use of preserved milk samples for diagnosis purposes, the detection limit of each pathogen should be defined (i.e. Mycoplasma spp.) for each preservation and storage condition according to the diagnosis method. For the diagnosis of subclinical intramammary infection in the udder halves, the viability of the main pathogens in frozen milk samples optimize the sampling strategy and the bacteriological analysis of these samples. 20

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