MEDIOS DE CULTIVO. Microbiología Lic. en Biología Molecular FQBF-UNSL Marzo 2017
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- Eugenio Ojeda Prado
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1 MEDIOS DE CULTIVO Microbiología Lic. en Biología Molecular FQBF-UNSL Marzo 2017
2 PROCARIOTAS Bacterias Hongos y levaduras Cianobacterias EUCARIOTAS Protistas urbinavinos.blogspot.com
3 Clasificación de los microorganismos según la fuente de energía y carbono que utilizan
4 Sinónimos Lito = auto Hetero = organo Foto lito trofos = foto auto trofos Foto hetero trofos = foto organo trofos Quimio lito trofos = quimio auto trofos Quimio hetero trofos = quimio organo trofos
5 Qué es un medio de cultivo? Preparación artificial sólida, semisólida o líquida que suministra al microorganismo: -sustancias fundamentales (fuente de C, fuente de N) -fuente de energía -condiciones ambientales para la síntesis y mantenimiento de su protoplasma.
6 CONDICIONES QUÍMICAS 1.Elementos energéticos y constitutivos: Macroelementos 20 Microelementos 10 Factores de crecimiento 0 Macroelementos Microelementos Factores de crecimiento 2. Agua 3. Agentes solidificantes: agar, gelatina, agarosa, silicagel, albúmina
7 VENTAJAS DEL AGAR COMO SOLIDIFICANTE Finales del siglo XIX -Koch -Hesse
8 -MEDIOS DE CULTIVO -A) Sintéticos o definidos: la fórmula química se conoce con exactitud ideal para fotolitotrofos (fotoautotrofos) y fotoorganotrofos (fotoquimiotrofos) Ej.: medios de cultivo para algas Fuente de carbono: CO2 ó acetato, glicerol Fuente de nitrógeno: KNO3, urea, N2 Cualquier otro aporte: comp. inorgánicos Fuente de energía: LUZ
9 b) MEDIOS NATURALES O COMPLEJOS * la fórmula no se conoce con exactitud * ideal para quimioorganotrofos
10 - *Ejemplos: - caldo nutritivo (CN) - agar sulfuro indol movilidad (SIM) - agar nutritivo - agar Sabouraud glucosa *sus fórmulas pueden incluir: PEPTONAS EXTRACTOS HIDRATOS DE CARBONO FACTORES DE CRECIMIENTO
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12 2. EXTRACTOS Factores de crecimiento -de carne: concentrado de componentes hidrosolubles de la carne. -de levadura: producto de lisis ácida o enzimática de levaduras -de malta: producto de cebada malteada, reemplaza al extracto de levadura aportan factores de crecimiento: vitaminas, aminoácidos, bases púricas y pirimidínicas
13 3. HIDRATOS DE CARBONO Glucosa Lactosa Otros Son fuente de carbono y energía
14 4. FACTORES DE CRECIMIENTO Compuestos orgánicos que el microorganismo NO puede sintetizar. Deben ser aportados al medio de cultivo. Ej. de una ruta metabólica: A ---- B ---- C ---- Histidina A ---- B --X--.. Le damos histidina en el medio de cultivo. His ahora es factor de crecimiento.
15 CONDICIONES FÍSICAS para un MEDIO DE CULTIVO -Temperatura: psicrófilos (5 C), mesófilos (37 C), termófilos (45-55 C) -ph: neutro (7), alcalino (8), ácido (5) -Humedad relativa o actividad acuosa (aw ): 0,9 0,7 -Luz: para organismos fotosintéticos -Requerimiento de O2 :
16 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO 1. POR ORIGEN: - sintético o químicamente definido fórmula química exactamente conocida - natural o complejo composición química no se conoce con exactitud ANI, SIM, TSA 2. POR CONSISTENCIA: - líquido (sin agar) -sólido (con agar: -al 0.3%: semisólido: agar SIM -al 1.5 2% sólido: ANI, TSA
17 3. POR SU COMPOSICIÓN: - comunes: AGAR NUTRITIVO - enriquecidos: TSA AGAR SANGRE AGAR YEMA DE HUEVO
18 4. POR SU FUNCIÓN MUESTRA MEDIO DE TRANSPORTE MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO MEDIO SELECTIVO MEDIO DIFERENCIAL
19 4. POR SU FUNCIÓN: -de transporte: - medio de Stuart - medio de Cary Blair Contiene buffer + sustancias criopreservantes (glicerol)
20 - de enriquecimiento (líq.) Caldo Mac Conkey (inhibidor + lactosa + púrpura de bromocresol) - selectivos (sólidos) Agar Rainbow selectivo para Escherichia coli (un inhibidor de otras bacterias + sustrato cromogénico para β-glucuronidasa) Negras: (-) Rosadas: (+)
21 Fermentación de: -diferenciales -glucosa? -sacarosa? -lactosa? Producción de H2S? Gas? Enterobacter El medio incluye los 3 azúcares, sal de Fe2+ y un indicador de ph (rojo neutro) Shigella Proteus Pseudomonas Agar triple azúcar hierro (TSI)
22 PREPARACION DE UN MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO Pesar Preparar Fundir Ajustar ph Fraccionar Esterilizar
23 OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA DE LOS CULTIVOS 1. En caldo: - Crecimiento superficial -Sedimento -Turbidez 2. En agar SIM [agar] = 0,2-0,3% - crecimiento con o sin movilidad
24 OBSERVACIÓN DE COLONIAS Agar nutritivo [agar] = 1,5-2% Agar sangre
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