Investigación sobre la presencia de Coxiella burnetii en quesos elaborados con leche cruda de oveja

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Montserrat Murillo Gutiérrez
hace 8 años
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1 Investigación sobre la presencia de Coxiella burnetii en quesos elaborados con leche cruda de oveja A. Piñero; R. A. Juste; J. F. Barandika; A. Hurtado; A. L. García-Pérez NEIKER-Instituto Vasco de Investigación y Desarrollo Agrario Departamento de Sanidad Animal, Berreaga DERIO (Bizkaia)

2 Bacteria: Coxiella burnetii Zoonosis de distribución mundial

3 El brote de fiebre Q en Holanda -2007: 168 casos -2008: 1000 casos -2009: 2357 casos -2010: 208 casos Roest et al., 2011, Epidemiol Infect

4 Garrapatas Subproductos Ciclo de Coxiella burnetii Ciclo doméstico Ciclo silvestre

5 Alta resistencia de Coxiella en el ambiente Supervivencia: Soporta el ph ácido Polvo: 120 días Agua: 36 meses Carne fresca:1 mes (4º C) Heces de garrapatas: 1-2 años Mantequilla, queso fresco:42 días Lana: meses Leche: 42 meses (4-6ºC) Orina desecada: 50 días -20º C: 2 años Resistente a los U.V. Destrucción: Etanol 70% Hipoclorito 0.05% Formol 10% Peróxido de hidrógeno 5% Temperaturas: 50ºC 30 72ºC 40 85ºC 7

12-16 meses Leche: 42 meses (4-6ºC) Orina desecada: 50 días -20º C: 2 años Resistente a los U.V.

6 La fiebre Q en humanos PI: 1-3 semanas FORMA AGUDA FORMA CRÓNICA FORMA AGUDA Síndrome febril aislado Síndrome febril aislado Neumonía Neumonía Hepatitis Hepatitis Endocarditis Hepatitis crónica Meningitis Encefalitis Muerte

Síndrome febril aislado Neumonía Neumonía Hepatitis

7 Fiebre Q en rumiantes domésticos FORMA AGUDA: mayoría de los casos asintomáticos y esporádicos: Coxiellosis FORMA CRÓNICA: Ganado ovino/caprino: Abortos a término (hasta 50%) Partos prematuros Bajo peso de corderos/cabritos Ganado bovino: Aborto (esporádicos) Infertilidad Mastitis Metritis

ovino/caprino: Abortos a término (hasta 50%) Partos prematuros Bajo peso

8 Abortos por fiebre Q en los rumiantes de la CAPV OVINO Chamydophila abortus; 12% Salmonella abortus ovis; 10% Nº rebaños analizados= Estudio de fetos, placentas, y otras muestras Not determined; 38% Coxiella burnetii; 9% Border disease; 16% Fetal anomalies; 1% Toxoplasma gondii; 15% Brucella mellitensis; 3% Listeria ; 4% Yersinia pseudotuberculosis; 1% BOVINO Oporto et al., 2006, Annals NY Acad Sci Según casuística de NEIKER, y trabajos de investigación, en vacuno los casos de fallo reproductivo o aborto relacionados con fiebre Q son esporádicos en la CAPV (Atxaerandio, 2001; Aduriz, 2001)

mellitensis; 3% Listeria ; 4% Yersinia pseudotuberculosis; 1% BOVINO Oporto et al.

9 Seroprevalencia frente a Coxiella en los rumiantes de la CAPV Ovejas Vacas Cabras ELISA indirecto (ELISA Cox kit, LSI, Francia) con un antígeno aislado de rumiantes (cepa CBO1) Especie Seroprevalencia explotaciones Seroprevalencia individual Nº Nº Pos (%) Nº Nº Pos (%) Vacuno leche (48.2) (6.5) Vacuno carne (42.9) (6.6) Ovino (73.9) (12.3) Caprino 11 5 (45.5) (8.3) Ruiz-Fons y cols., 2010, BMC Vet Res Astobiza y cols., 2012, J Dairy Sci

Nº Nº Pos (%) Nº Nº Pos (%) Vacuno leche 193 93 (48.2) 2692 176 (6.5) Vacuno carne 42 18 (42.9) 618 41 (6.

10 Casos humanos en la CAPV Ganado ovino es el principal reservorio? (Cilla et al., 2008) Fuente: Informe Dpto. Sanidad del Gobierno vasco, 2008

11 Especies animales asociadas en los brotes humanos Europa ( ) - Rumiantes 6 - Ovino 25 - Caprino 7 - Vacuno 1 EFSA report, 2010 Tissot Dupont y cols, Emerging Infect Dis

12 Eliminación de Coxiella al medio tras el aborto / parto El periodo de mayor riesgo es el periodo de abortos /paridera Una placenta puede contener hasta 1.97x10 9 bacterias Eliminación de Coxiella en fluidos vaginales, leche y heces Especie Periodo de eliminación de C. burnetii Moco vaginal Heces Leche Vacuno esporádico 14 días 13 meses Ovino 71 días 5 meses 4 meses Caprino 14 días 20 días 4 meses Rodolakis y cols, 2007; Guatteo y cols., 2007; Astobiza y cols, 2010; EFSA, 2010

97x10 9 bacterias Eliminación de Coxiella en fluidos vaginales, leche y heces Especie Periodo de eliminación de C.

13 Vías de infección -La fuente más importante de contagio es la aerógena -Entre 1 y 10 bacterias pueden provocar la infección en humanos Contaminación medioambiental en la paridera de un rebaño ovino infectado Fecha visita Nº PARTOS Coxiella/ml en aerosoles EXTERIOR INTERIOR 28/11/ /12/ Neg /12/ Neg /01/ Neg /03/ Neg Neg 02/04/ Neg Neg 100 l./ min durante 10 Muestreador de aire No. anim. posit. / analizadas (%) Ovejas: 61/91 (67%) Primalas: 0/8 (0%) Astobiza et al, Res Vet Sci

28/11/2008 92 1.69 3.47 11/12/2008 32 Neg 1.72 22/12/2008 60 Neg 2.51 29/01/2009 29 Neg 2.

14 Vías de infección - Ruta oral, en discusión Transmisión por vía oral NO CONFIRMADA Seroconversión tras la ingestión de leche cruda o productos lácteos contaminados Berri et al., 2005 Ausencia de síntomas clínicos (Benson et al., 1992; Fishbein y Raoult, 1992).

cruda o productos lácteos contaminados Berri et al.

15 Estudio de la distribución de Coxiella en 154 rebaños ovinos de leche 154 leches de tanque ovinas ELISA (Cox kit LSI, Francia) Suero lácteo Pos/ Neg Estudio de anticuerpos PCR/ qpcr Leche entera Pos/ Neg Cuantificación: Log Cox/ ml Nº rebaños Nº posit % ELISA pos % PCR pos García-Pérez y cols., 2009, J Dairy Sci

anticuerpos PCR/ qpcr Leche entera Pos/ Neg Cuantificación: Log Cox/ ml Nº rebaños

16 Objetivo del estudio Determinar la presencia de C. burnetii en quesos elaborados con leche cruda de oveja con el fin de valorar el riesgo potencial que supondría el consumo de este producto.

17 Materiales y métodos Tipo de muestra N Procedencia Adquisición Compra directa Quesos elaborados a partir de leche cruda de oveja 79 Tres comunidades autónomas en tiendas, mercados y supermercados

18 Materiales y métodos Objetivo Extracción de ADN Detección y cuantificación de ADN de C. burnetii Técnica Pretratamiento de la muestra y Kit comercial (Qiagen) qpcr Homogenización (stomacher) 10 g de queso en 20 ml de buffer. Centrifugaciones y lavados. Extracción ADN según las instrucciones del fabricante. Diana: Gen IS1111. Cuantificación: Diluciones 1/10 de la diana desde 1x10 6 hasta 1x10 2. Control interno de inhibición: TaqMan Exogenous Internal Positive Control Reagents (Applied Biosystems ). Caracterización molecular de las muestras positivas MLVA Análisis del número de repeticiones en tandem presentes en seis posiciones del genoma de C.burnetii.

Extracción ADN según las instrucciones del fabricante. Diana: Gen IS1111. Cuantificación: Diluciones 1/10 de la diana desde 1x10 6 hasta 1x10 2.

19 Detección de C. burnetii por qpcr Autor Año Procedencia Especie de origen N NºPosit (%) Este estudio 2013 local Ovino (47) Hirai A Capuano F Francia Carga Vacunobacteriana: 26 0,1-3,6 (Log 4 (15,4) bact/gr) Italia Vacuno 5 3 (60) Italia Vacuno (39) Italia Ovino/Caprino (27) Italia, Grecia y Francia Vacuno (82) Eldin C Italia, Grecia y Francia Ovino 25 8 (32) Italia, Grecia y Francia Caprino (51)

20 Genotipos MLVA Muestra Especie Origen Año Ms23 Ms24 Ms27 Ms28 Ms33 Ms34 Genotipo Leche Ovino Gipuzkoa AA Aerosol Ovino Gipuzkoa Z Hisopo vaginal Ovino Gipuzkoa S Placenta Ovino Álava T Astobiza et al., 2012, BMC Vet Res Genotipado de DNA de C. burnetii en quesos - 23 genotipos diferentes a los descritos en ovino previamente en casos de abortos - 1 genotipo común en PV y CyL - Mucha variabilidad en las cepas ovinas

9 4 5 2 2 T Astobiza et al., 2012, BMC Vet Res Genotipado de DNA de C.

21 Conclusiones Se ha puesto a punto un procedimiento para la extracción de ADN y amplificación por qpcr de C. burnetii a partir de muestras de quesos. Se ha detectado una prevalencia alta de C. burnetii en quesos elaborados con leche cruda de oveja, similar a las descritas por otros autores. Sin embargo, los estudios de viabilidad de C. burnetii llevados a cabo por dichos autores descartan que las bacterias detectadas sean viables (Hirai et al., 2012; Eldin et al., 2013). El genotipado muestra una gran variedad de genotipos de C. burnetii, que no permite establecer relaciones con brotes previos de abortos ovinos. El genotipado de C. burnetii podrá ser de utilidad en las investigaciones epidemiológicas de los brotes humanos de fiebre Q, para identificar el posible origen de la cepa y la especie animal implicada.

22 Agradecimientos Estudio financiado por INIA y FEDER (RTA ) y Dpto. De Agricultura del Gobierno Vasco. Al grupo de Fiebre Q de NEIKER. ESKERRIK ASKO

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