HANTAVIRUS EN CHILE SECCION VIRUS HEPATICOS Y EMERGENTES ISP 2012

Transcripción

1 HANTAVIRUS EN CHILE SECCION VIRUS HEPATICOS Y EMERGENTES ISP 2012

2 Características generales Partícula viral esférica de nm Envoltura lipídica Pleomórfica 2 glicoproteínas superficiales G1 y G2 1 nucleoproteína central (N) Genoma RNA trisegmentado Segmentos Large (proteinas funcionales, polimerasa) Medium: glicoproteinas Small: nucleoproteína

3 Roedor transmisor del hantavirus Roedor transmisor de la enfermedad: Oligorizomys longicaudatus (ratón colilargo) Habitat del roedor: 3º a 11º región Ratón de hábitos nocturnos. Se alimenta de frutos silvestres (quila). Transmisión por orina, deposiciones y saliva

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5 Hantaviruses en el viejo mundo Virus asociados a subfamilia Murinae Virus Huesped Lugar Enferm. Hantaan Apodemus agrarius Asia, Rusia este HFRS Dobrava Apodemus flavicollis Apodemus agrarius Balcanes Europa HFRS Seoul Rattus norvegicus Todo el mundo HFRS Rattus rattus Virus asociado a subfamilia Arvicolinae Virus Huesped Lugar Enferm. Puumala Clethrionomys glareolus Europa HFRS *Otros numerosos hantaviruses han sido identificados pero no asociados a enfermedad humana

6 Hantavirus del Nuevo Mundo

7 Indet CASOS HANTAVIRUS EN CHILE POR REGION ( ) REGION Nº CASOS ARICA-PARINACOTA TARAPACA ANTOFAGASTA ATACAMA 0 COQUIMBO VALPARAISO METROPOLITANA 32 O`HIGGINS MAULE BIO BIO 194 ARAUCANIA LOS RIOS LOS LAGOS AISEN 68 MAGALLANES 0 0 NO DETERMINADO 7 TOTAL PAIS 768

8 ALGORITMO DIAGNOSTICO SOSPECHA INFECCION POR HANTAVIRUS

9 Sindrome cardiopulmonar por virus Andes Incubación Período de incubación difícil de precisar: 3 a 45 días Pródromos 1 a 12 días, promedio 4 días Fase cardiopulmonar Fallecimiento H Convalescencia 7 a 15 días Dra Castillo, Universidad de la Frontera

10 Sintomas prodromicos SCPH Síntomas Coyhaique n=24 Pto. Montt n=25 Temuco n=54 Concepción n=23 Fiebre Mialgia Cefalea Nauseasvómitos Diarrea Lumbalgia Artralgia CEG

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12 Sospecha clínica en fase prodrómica Antecedente de exposición a roedores o excretas Fiebre y mialgias, con o sin síntomas gastrointestinales. Plaquetopenia < y/o inmunoblastos en sangre. Secundario a daño viral o endotelial, ocurre precozmente trombocitopenia y precede al edema pulmonar. La presencia de inmunoblastos predice la aparición del EPA HUM PATHOL 1995, Lancet 1996, Hospital Practice 1997, Sem Respir Crit Care Med 2000

13 Hemograma virus Andes n = 22 (valor más alterado) 100% Hemoconcentración (Hto 47% a 70%) 100% Trombocitopenia (Plts a x mm 3 ) 95% Leucocitosis (GB a x mm 3 ) Rev Chil Infect 2000, CHEST Jun 2001 Mayores niveles de ARN se correlacionan con peak del hematocrito, nadir de las plaquetas y aparición del edema pulmonar. JID 1999

14 C Romero et al. Rev Méd Chile 2003; 131:

15 Inmunoblastos: Linfocitos Hiperbasófilos HANTAVIRUS Linfocitos Atípicos

16 Laboratorio virus Andes n=22 Hipoxemia 100% Alza de LDH y CPK 100% Alza de SGOT, SGPT 94% PTT prolongado 90% Hiponatremia 79% Alza de creatininemia 55% Alza de amilasa sérica 9% Rev Chil Infect 2000 CHEST Jun 2001

17 Histología pulmonar Neumonitis instersticial Congestión Infiltrado mononuclear ( inmunoblastos ) Edema intra - alveolar y septal Membranas hialinas focales, escasas Ausencia o escasez de: Neutrófilos Daño epitelial Detritus celulares CDC

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20 MUESTRA SOSPECHOSA ELISA IgG ELISA IgM POSITIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO IgM - INFECCION ANTIGUA HANTAVIRUS INFECCION RECIENTE HANTAVIRUS < 48 HRS DIAS DE EVOLUCION CLINICA > 48 HRS POSITIVO PCR NEGATIVO SOLICITAR 2º MUESTRA PARA SEROLOGIA

21 Tecnica ELISA IgM Hantavirus del CDC

22 Placa ELISA IgM Hantavirus

23 Test rápidos hantavirus J Clin Microb 2001:

24 RT PCR HANTAVIRUS 388pb

25 Inmunohistoquímica hantavirus Gentileza Dr Gracia, Panamá (virus choclo) JAMA 2000

26 1.- Caso sospechoso Exámenes Virológicos ANDV SEROLOGIA IgM/IgG Confirmatorios Si son tomadas muy precozmente en la fase prodrómica pueden resultar negativos o limítrofe tanto la IgM como la IgG* La IgM dura alrededor de 8 semanas* PRUEBAS MOLECULARES Confirmatorios Altamente sensibles y especificas. La muestra de elección son las células blancas. Sirve para Dg aún en fases precoces de la infección. Útil para buscar virus en tejidos

27 3.- Expuesto a riesgo con síntomas dentro del PI Ante síntomas como fiebre evaluación clínica y HEMOGRAMA mirando el recuento de plaquetas y los linfocitos hiperbasófilos. Considerar exámenes virológicos conversando con infectólogo idealmente. PCR HV en células blancas, tubo con anticoagulante (EDTA) Serología IgM/IgG HV **

28 Situaciones laborales de mayor riesgo Ingreso a lugares cerrados y con escasa iluminación (galpones, graneros, bodegas, leñeras) Ocupación de cabañas previamente deshabitadas sin ventilación previa Manipulación de leña, objetos o herramientas que han estado en contacto con ratones silvestres Desmalezar, limpiar canales o limpieza de pastizales Ingresar a bosques o entre matorrales o zarzamoras infestadas de ratones Dormir a la intemperie, acampar en zonas silvestres por recreación o trabajo.

29 ALERTA SANITARIA El 06 de febrero del año 2012, el Ministerio de Salud decretó Alerta Sanitaria por aumento de casos de Hantavirus para la Región del Bío Bío y la provincia de Malleco en la Región de La Araucanía.

30 RED DE LABORATORIOS PARA EL DIAGNOSTICO DE HANTAVRIUS Desarrollar una red de laboratorio para la detección de virus Hanta mediante la Técnica de ELISA directa (Kit IgM Virus Andes), que cubra las necesidades de un diagnóstico mas oportuno de esta enfermedad emergente.

31 INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA Se han seleccionado los siguientes laboratorios de la red pública: Región de Valparaíso: Hospital Gustavo Fricke Región del Maule: Hospital de Talca Región del Bío Bío: Hospital Guillermo Grant Benavente Región de La Araucanía: Hospital Dr. Hernán Henríquez Aravena Región de Los Lagos: Hospital Base de Puerto Montt.

32 DESARROLLO 09 de Febrero: Hospital Guillermo Grant Benavente. 23 de Febrero: Hospital Dr. Hernán Henríquez Aravena. Hospital Base de Puerto Montt. 27 de Febrero: Hospital Gustavo Fricke. 07 de Marzo: Hospital Regional de Talca

33 OBJETIVOS Implementar Técnica de ELISA para diagnóstico inicial de Infección por Virus Hanta, que apoye el criterio para el diagnóstico clínico. Conocer el desempeño en la práctica clínica de un test que se encuentra verificado por ISP y que presenta una sensibilidad del 100% y una especificidad del 96% en los análisis realizados por la institución.

34 TÉCNICA El Test es una prueba de ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) que permite la detección de anticuerpos IgM contra el virus Hanta (virus Andes y virus Sin Nombre) en muestras de suero o plasma humano.

35 Técnicas verificadas por ISP: Ventajas y desventajas Recalcar que el 100% de sensibilidad es con IgM captura Andes, pero que durante la fase aguda de la enfermedad, como también en la fase prodrómica, cuando la detección de inmunoglobulinas específicas es todavía negativa. Técnica ELISA al ser directa, puede tener falsos positivos. NOMBRE ENSAYO REAGENA POC PUUMALA IgM ANTI- HANTA VIRUS POOL 2 AMERICA IgM TIPO DE ENSAYO ANTIGENO SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD INMUNOCROMATOGRAFIA PUUMALA 82.6% 95.37% ELISA ANDES Y VSN 100% 96.2%

36 CONSIDERACIONES El objetivo de la implementación de este test a nivel local, no es reemplazar la confirmación del ISP, sino permitir un diagnóstico inicial optimizando el tiempo de respuesta para la atención clínica Se recomienda centralizar a Nivel Regional la ejecución de esta metodología con la intención de mejorar el rendimiento del KIT. Se realizará estudio de concordancia de los resultados con el ISP con los diferentes laboratorios. Así mismo, recomendamos que la mantención de la técnica en dicho hospital sea responsabilidad de las autoridades locales, mientras que el ISP se compromete a otorgar la supervisión de la técnica implementada.

37 CONFIRMACIÓN Red de laboratorio Virus Hanta Red Central Confirmación de casos U.A.V I.S.P P.U.C Araucanía Los Ríos Los Lagos Resto del País En caso requerido Red Regional Acercamiento al diagnóstico clínico Región Valparaíso: Hospital de Viña del Mar Región del Maule: Hospital de Talca Región de Bío Bío: Hospital Guillermo Grant Benavente Región Araucanía: Hospital de Temuco Región Los Lagos: Hospital de Puerto Montt Métodos verificados por el ISP (Puumala y test de ELISA que utiliza antígeno Andes y antígeno Virus Sin Nombre) Nivel Local Acercamiento al diagnóstico clínico Laboratorios que realizan Test Rápido Puumala Centros Asistenciales que no disponen de Test Rápido y pertenecen a las Regiones V, VII,VIII,IX y X; enviar sus muestras a laboratorio regional Centros Asistenciales que no disponen de Test Rápido y pertenecen a otras regiones del país

38 CONDICIONES Horario de Recepción de muestras: de Lunes a Domingo las 24 horas. Horario de procesamiento de muestras: de lunes a viernes. En estado de alerta sanitaria: de lunes a sábado y domingo muestras urgentes. Tipo de muestra: sangre total sin anticoagulante en tubo estéril tapa rosca o de goma. (tubo tapa roja ) y además envío de tubo tapa lila con sistema de extracción al vacío (EDTA) Adultos: 5-8 ml Pediátricos: 3-4ml En caso de paciente fallecido enviar: tejidos en tubo estéril tapa rosca y muestra de punción cardiaca y tejido pulmonar.

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41 IMPORTANTE Comunicar por mail la vía de transporte, día y hora del despacho de la muestra para el examen de Hantavirus. Cada tubo debe estar identificado con el nombre del paciente, tipo de muestra y fecha de obtención. Las muestras deben ser acompañadas con los antecedentes del paciente en el Formulario de Notificación y Envío de Muestras, el cual debe consignar claramente la fecha de toma de muestra, fecha de inicio de los síntomas, y demás antecedentes clínicos solicitados en el formulario. Envío de todos los datos, y el SEGUIMIENTO CLINICO, y diagnóstico en base a antecedentes: clínicos, epidemiológicos y de laboratorio

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43 Precauciones en toma de muestra, procesamiento y envío Uso de precauciones estandar, más mascarilla N 95 al puncionar o aspirar secreciones del paciente. Procesamiento de muestras en el laboratorio ojalá bajo campana, siempre reforzar las BPL (antiparras, guantes, delantal). Evitar aerosoles al abrir los tubos. Envíos bajo normas de bioseguridad y en tubos sellados con tapa rosca, envueltos en papel absorbente y en contenedores de plástico. Temperatura 4 transporte en el dia, alternativamente congelados en hielo seco

44 Identificación y tipificación de Hantavirus en muestra de suero. Nº ISP RT-PCR Tipificación Positivo NT 98.4% AA 98.9% NT Nucleótidos, AA Aminoácidos. La cepa control Hantavirus CHI-7913 (AY228237) fue utilizada para determinar la identidad.

45 SIMILITUD SECUENCIAMIENTO NUCLEOPROTEINA HANTAVIRUS CHILE 2011 REGION Nº CASOS % SIMILITUD NP HANTAVIRUS 6º REGION 1 97,8 14º REGION 5 98,4 8º REGION 1 97,7 11º REGION 1 94,4 11º REGION 1 96,4

46 Árbol Filogenético de una Región de Nucleoproteina de Hantavirus.

47 Gracias