FERRER P 1, SOBARZO 2 M y AFANI A 1 1 Hospital Clínico Universidad de Chile. 2 Hospital Barros Luco, Santiago, Chile
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- Bernardo Montes Quintero
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1 ADN PROVIRAL DE VIH ES EL BLANCO GENÉTICO ADECUADO PARA EL ESTUDIO DE RESISTENCIA GENOTÍPICA A ANTIRRETROVIRALES EN PACIENTES CON VIREMIAS DE BAJO NIVEL FERRER P 1, SOBARZO 2 M y AFANI A 1 1 Hospital Clínico Universidad de Chile. 2 Hospital Barros Luco, Santiago, Chile pferrer@hcuch.cl
2 INTRODUCCION Existe un creciente interés por evaluar a pacientes VIH que después de un tiempo en terapia antirretroviral (TAR) no llegan a ser indetectables manteniéndose con viremas de bajo nivel. Lamentablemente actualmente no existen en el mercado ensayos genotípicos que puedan realizarse con carga virales<1.000 copias/ml que permitan evaluar la posible aparición de resistencia en estos pacientes. En estos casos se recomienda considerar al ADN proviral de VIH para estudios de resistencia genotípica. OBJETIVO Evaluar la utilidad del ADN proviral de VIH como blanco para análisis de resistencia a antirretrovirales en pacientes en TAR con viremias de bajo nivel.
3 Materiales y Método 8 PR. Harrigan, et-al. J Clin Microbiol Jun;50(6):
4 Materiales y Métodos Descontinuado a nivel mundial en diciembre de 2014 VALIDACIÓN Secuenciación automática usando ReCall TM 10 muestras con CV entre y muestras con CV entre y muestras con carga viral > sola discrepancia 97% concordancia
5 Control Acrometrix es diseñado para laboratorios que realizan test de resistencia genotípica a inhibidores de transcriptasa reversa y proteasa de VIH. 100% de Detección
6 Secuenciación redundante
7 Llamado de bases Confiable
8 Automatic HIV Drug Resistance Genotyping With RECall: TR/PRO. PR. Harrigan, et-al. J Clin Microbiol Jun;50(6): Este método automático es: Rápido: Una semana Bajo costo: Eficiente: solamente 5% de resultados no reportables Reproducibilidad: 100% Validación con respecto a Trugene del 97% Usado en centros de referencia de VIH
9 El Estudio Se estudiaron un total de 75 pacientes adultos de los cuáles un 75% fueron hombres quienes estaban confirmados de infección por el virus VIH y bajo tratamiento antirretroviral al momento del test de resistencia. En primer lugar se analizaron 10 muestras de pacientes que tuvieron una carga viral promedio de copias/ml. Estos pacientes fueron analizados simultáneamente en paralelo por ADN proviral y ARN viral. Posteriormente se estudiaron exclusivamente por ADN proviral 65 pacientes en quienes el médico tratante sospechó de falla virológica. Estos sujetos presentaron una carga viral promedio de 258 (rango de ) copias/ml.
10 Resultados De las 10 muestras analizadas en paralelo por ARN y ADN proviral encontramos que 9 (90%) coincidieron en número y tipo de mutaciones. De estas 9 muestras coincidentes 2 fueron susceptible y 7 fueron resistentes. Con respecto a la muestra discrepante por ARN encontraron más mutaciones de resistencia que por ADN proviral. Las mutaciones K65R, L100I, Y115F, K219R, and F227L fueron solamente detectadas en ARN. Mientras que las mutaciones V108I and K70G fueron detectadas solo en ADN proviral. En esta muestra las mutaciones coincidentes detectadas en ambos compartimentos fueron: K103N, M184V, H221Y. En esta muestra la discrepancia en tipo y número de mutaciones provocó diferencias en el nivel de resistencia predicho para los siguientes antiretrovirales: ABC, D4T, TDF, ETR y RPV. Siendo mayor en número y nivel por ARN. En la serie de muestras analizada por ambos compartimentos no se encontraron mutaciones asociadas a inhibidores de proteasa.
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12 Resultados Con respecto a las 65 muestras analizadas exclusivamente por ADN proviral se encontró que 14 fueron resistentes (22%), 43 fueron susceptible (66%) and 8 fueron no reportables (12%). En las muestras resistentes las siguientes mutaciones fueron detectadas: M184V (13.8%), K103N (7.7%), M41L (4.6%), K70R (3.1%), V108I A62V, V90I, Y181C, M230I, T215Y, T215D, H221Y (1.5%). En esta serie de muestras estudiadas por ADN proviral se pudieron detectar las mutaciones de resistencia a inhibidores de proteasa: I93L, N88T que dio baja resistencia a ATV/r.
13 Seguimiento de un caso
14 La terapia se cambió a; Zidovudine (AZT) + Tenofovir (TDF) + Atazanavir/ritonavir (ATV/r). 4 meses después se evaluó la carga viral y resultó indetectable.
15 Serie de mutaciones comparando ARN y ADN proviral RNA DNA K103N K65R M184V T215F T215I P225H L74I K219E L100I K101P V90I V108I K70T E138A H221Y K70R K101E D67N L74V A62V V106M V179D M184I V75M T69D T215D K219Q K70G G190A A106I G190E K103N/ K70E Y115F K219R T215Y K101P/ D67G T69CR Y181C M41L M230I
16 Conclusiones Nuestros resultados demostraron que el ADN proviral es un blanco adecuado para la prueba de resistencia a fármacos antirretrovirales. Sin embargo, debido a la discrepancia encontrada entre ambos compartimentos, el ADN proviral parece ser adecuado sólo en casos de viremias <1,000 copias / ml. Por lo tanto, no es aconsejable reemplazar el ARN por el proviral. Se recomienda el uso de ADN proviral sólo en los casos en que el análisis de ARN no es posible. En las 65 muestras analizadas con virema <1.000 copias / ml, las mutaciones encontradas dieron resistencia a los fármacos 3TC, FTC, ABC, EFV, NVP, DDI que coincidieron con el tratamiento de los pacientes. Nuestros resultados sugieren que las viremias de bajo nivel pueden ser estudiadas mediante ADN proviral ya que estas podrían estar asociadas a falla virológica que puede ser detectada precozmente y de este modo realizar una intervención terapéutica más precoz que asegure el éxito del tratamiento antirretroviral.
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