Evaluación n de medios de cultivo para inducir la esporulación n del acaropatógeno. Hirsutella nodulosa OBJETIVO ESPECIFICO
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- Hugo Marín Bustamante
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1 Evaluación n de medios de cultivo para inducir la esporulación n del acaropatógeno Hirsutella nodulosa Elaborado por: Ruth León n González OBJETIVO ESPECIFICO Evaluar distintos medios de cultivo para inducir la esporulación n del hongo Hirsutella nodulosa 1
2 Descripción n de los tratamientos Nº de tratamiento Medio de cultivo PDA SDA Medio E + quitina modificado Descripción n de los tratamientos Nº tratamiento 1 Medio de cultivo PDA Descripción del medio Papa Agua Cantidad de reactivos 300 gr. 20 gr. 15 gr. 1 l. 2
3 Descripción n de los tratamientos 2 SDA Saboraud Agua 40gr. 1 1 L. 3 Medio E (José Luis Rosas, investigador acarólogo de México) Sacarosa Extracto de levadura Peptona agua 10gr gr. 1L. Descripción n de los tratamientos quitina (José Luis Rosas, investigador acarólogo de México) Sacarosa Extracto de levadura Peptona Agua Quitina Sacarosa Extracto de levadura Peptona agua 10gr gr. 1 l. 1% 3gr. 10gr. 0.3gr. 3gr. 3.6gr. 600ml. 3
4 Descripción n de los tratamientos 6 modificado (Comunicación personal Ximena Loría Espinoza) Sacarosa Extracto de levadura Peptona agua 10gr ml. 7 modificado (Comunicación personal Xiomara Mata (INA)) Sacarosa Extracto de levadura Peptona micológica agua 10gr. 0.5 gr. 16 gr. 1 L. Descripción n de los tratamientos 8 Maltosa Cabrera et al, 2004 Maltosa Glucosa Peptona agua 1.5% 1.0% 1.0% 2.0% 100ml 9 Papa-Zanahoria (Comunicación personal Xiomara Mata (INA) Papa Zanahoria Agua 50 gr/l 50 gr/l 15 gr. 1 L. 4
5 Descripción n de los tratamientos quitosano (El QUITOSANO es un derivado de la quitina, es un polímero natural de tipo catiónico, biodegradable y no tóxico, por lo que no contamina). Testigo absoluto Sacarosa Extracto de levadura peptona Quitosano agua Agua 1.25g 0.625g 0.625g g 2.25g 1.25g 125ml 20gr. 1 L. Elaboración n de los diferentes medios de cultivo Todos los medios fueron sólidos s y se prepararon según n su propiedad nutritiva 5
6 Metodología a para colocar Hirsutella nodulosa a los tratamientos Con un sacabocado se sacaron los trocitos del hongo puro Se colocaron 4 mm en el centro del plato petri con el medio de cultivo específico 6
7 Evaluaciones Cada medio de cultivo se repitió 5 veces Se trazo una línea l en el centro del plato petri y se marco una flecha para seguir midiendo en esa misma dirección Evaluación n del crecimiento Se medio con regla el crecimiento radial del hongo en mm. Las evaluaciones se hicieron cada 7 días. d 7
8 Crecimiento micelial del Acaropatógeno Hirsutella nodulosa. E. Carlos Duran, Cartago. Agosto C r e c. p r o m e d i o PDA SDA Medio E Medio H+quitina (JLR) (XL) (INA) Maltosa (Cabrera) Papa- + Zanahoria quitosano (INA) Testigo (agaragua) 8
9 Evaluación n de la esporulación Micelio septado, hialino, Conidias hialinos, septados, curvados Con forma a la de un fósforo encendido Conteo de esporas en cámara c cámara de Levy con un rayado Neubauer 9
10 Resultados conteo de esporas Tratamiento PDA + quitina- + quitosano Todos los medios H Conteo esporas 1.3 X10 6 c/ml 1.3 X10 6 c/ml 8X10 5 c/ml 1X10 6 c/ml Este resultado refleja la poca cantidad de esporas que produce este hongo. En control biológico se utilizan suspensiones de micelio (50g/l) y conidios (1X106c/ml) de Hirsutella (Rosas y Sampedro, 2006). Conclusiones El mayor crecimiento radial diario lo alcanzaron los tratamientos (X L) con 0.67 mm., el + quitina con 0.48 mm., Maltosa (Cabrera) con 0.37 mm., PDA con 0.36 mm. y Papa-Zanahoria (INA) con 0.31 mm. de crecimiento diario. 10
11 Conclusiones El crecimiento radial del hongo H. nodulosa en los diferentes medios evaluados muestra un crecimiento muy lento (0.31 mm diarios). Los diferentes tratamientos mostraron diferentes concentraciones de esporas según n la cámara c de Levy y rayado de Newbauer. Conclusiones La poca concentración n de conidias obliga a que se utilice en control biológico suspensiones de micelio (50g/l) y conidios (1X106c/ml ml). En la literatura no se encuentra la forma de reproducirlo masivamente. 11
12 Conclusiones El conocimiento sobre Hirsutella nodulosa es muy ventajoso ya que se puede emplear como un bioplaguicida el cual es compatible con programas MIP. Conclusiones Las observaciones indican que en este acaropatógeno tanto el micelio como las esporas son las causantes de la muerte del ácaro debido a tres procesos fundamentales: 1)El micelio forma una red que captura al ácaro 2) Se produce cambio de fluidos de los órganos internos Se multiplica el hongo (esporas) 12
13 Conclusiones Debido a esto es que probablemente el hongo no requiere de reproducir tantas esporas como por ejemplo Beauveria bassiana o Metharizium anisopliae donde la espora es vital para introducirse al hospedero Recomendaciones Realizar estudios para de terminar si H. nodulosa produce pocas esporas debido a que primero captura el acaro con el micelio y luego se alimenta o produce las esporas. Probar en el control del ácaro S. spinki las suspensiones de 50g/l de micelio y con 1X106c/ml conidios. Revigorizar las cepas con el fin de aumentar la esporulación n del hongo. 13
14 Agradecimientos Al Laboratorio de Polímeros, Escuela de Química, Universidad Nacional por proporcionar el quitosano y la quitina. A A la Ing. Yeanneth Avilés s por su ayuda en la reproducción n del hongo en Laboratorio de Control biológico del INTA A A Oscar Bravo por su asistencia en el estudio A Xiomara Mata del Instituto Nacional de Aprendizaje por brindarme el tratamiento siete. A A Ximena Loría Espinoza por proporcionarme el tratamiento seis. A A Ovidio Carvajal por su asistencia en el ensayo. "Produce una inmensa tristeza pensar que la naturaleza habla mientras el género g humano no escucha" VICTOR HUGO 14
15 MUCHAS GRACIAS 15
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