TECNICAS INMUNODIAGNOSTICAS. se basan en Interacción Ag-Ac. J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 1

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1 TECNICAS INMUNODIAGNOSTICAS se basan en Interacción Ag-Ac. J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 1

2 PRUEBAS INMUNIDAGNOSTICAS AGLUTINACIÓN: Ag.particulado-Ac. 1) Rosa bengala-brucella (Ag.particulado) 2) LATEX (Lo hacemos particulado)qh 3) Hemaglutinación/Inhibición hemaglutinación (eritrocito(=1)/unido a eritrocito(=2) PRECIPITACION(Ag.soluble) 1) AGID 2) Inmunodifusión Radial 3) Inmunoelectroforesis INMUNOMARCADOS 1) Fluoresceina (IFD/IFI) 2) Enzimas (ELISA/DOT/WESTERN)/INMUNHISTOQUIMICA 3) Radio actividad (RIA) SERONEUTRALIZACION In vitro(cc)/in vivo(sn) J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 2

3 PRUEBAS INMUNO-DIAGNÓSTICAS UNIÓN PRIMARIA ACs-MARCADOS FLUORESCENCIA FERRITINA, ORO COLOIDAL ENZIMATICAS UNIÓN SECUNDARIA (luego de unión Ag-Ac hay): PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN NEUTRALIZACIÓN FIJACIÓN de COMPLEMENTO J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 3

4 PRUEBAS INMUNIDAGNOSTICAS PRECIPITACION (Ag.soluble) 1. AGID (IDGA) 2. Inmunodifusión Radial (Ac o Ag disuelto en Agar) 3. Inmunoelectroforesis J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 4

5 Tanto para las técnicas de PRECIPITACION como de AGLUTINACION Ags y Acs deben estar en cantidades equilibradas Prozona Exceso Acs Exceso Ags J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 5

6 Precipitación (principio) Los anticuerpos son bivalentes (unen dos epitopos a la vez), los antígenos complejos son multivalentes (poseen muchos epitopos). Cuando se forman grandes complejos estos se hacen insolubles y precipitan. J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 6

7 IDGA (AGID) Los Ag y Ac colocados en una placa de gel de agar difunden radialmente en la zona de equilibrio se produce una banda de precipitación. J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 7

8 PRECIPITACION(Ag.soluble) Inmuno Difusión en Gel Agar (AGID) J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 8

9 IDGA Ag Ac Zona de equilibrio (banda de precipitación) J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 9

10 IDGA J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 10

11 Inmunodifusión radial 1. Se incorpora al agar Ac 2. Una vez solidificado se perforan hoyos 3. se coloca Ag 4. Se colocan estandares de conc. Ag conocida 2 mg. 5 mg. 1 mg. muestra 10 mg. 50 mg. El área de este anillo tendrá relación directa con la [Ag] o [Ac]. J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 11

12 PRECIPITACION(Ag.soluble) INMONOELECTROFORESIS J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 12

13 AGLUTINACIÓN Reacción producida por la unión de los Ac con un Ag particulado o insoluble Aglutinación (Ag.particulado) Rosa bengala-brucella Hemaglutinación Ag parte del eritrocito (grupos sanguineos) algunos virus tiene epitopes hemoaglutinantes Inhibición hemaglutinación = Acs. inhiben los epitopes hemoaglutinantes o del eritrocito y hematies no aglutinan LATEX (Lo hacemos particulado) QH J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 13

14 Tanto para las técnicas de PRECIPITACION como de AGLUTINACION Ags y Acs deben estar en cantidades equilibradas Prozona Exceso Acs Exceso Ags J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 14

15 Aglutinación pasiva (Brucella) Brucella + colorante Suero problema Aglutinación J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 15

16 Aglutinación pasiva Rosa bengala-brucella (Ag.particulado) Brucella + colorante rosado Ag Suero Mezclar Control Neg Ag Muestra con Ac anti-brucella Muestra SIN Ac anti-brucella Control Pos J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 16

17 HEMO-AGLUTINACIÓN Eritrocito es el Ag.particulado J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 17

18 Hemoaglutinación El Ag soluble se puede unir químicamente a eritrocitos y (haciendo un Ag. Soluble particulado) Eritrocitos con Ag pegado Suero problema Hemoaglutinación J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 18

19 Hemoaglutinación viral Algunos virus son capaces de aglutinar eritrocitos de mamíferos o aves, y esto puede utilizarse para caracterizar un virus desconocido, o medir [Ac] en suero. Ejemplos : Orthomyxovirus Paramyxovirus Parvovirus Coronavirus J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 19

20 Hemoaglutinación y su Inhibición Virus Hemoaglutinante Hemoaglutinación (HA) Eritrocitos Suero problema Inhibición de Hemoaglutinación (IHA) J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 20

21 Hemoaglutinación J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 21

22 LATEX = Esferas de poliestireno el Ag de QH (que es soluble) lo hacemos particulado, Uniendo el Ag a las esferas de Latex Suero Mezclar Control Neg Ag Control Pos J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 22

23 PRUEBAS INMUNO-MARCADAS (Acs marcados) FLUORESCEINA InmunoFluorescencia Enzimas (Inmunoenzimaticas) ELISA DOT WESTERN-BLOT IHQ = InmunoHistoQuimica Isotopos radioactivos RIA J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 23

24 PRUEBAS INMUNO-MARCADAS Fluoresceina InmunoFluorescencia Directa (IFD) Ag + Acs (específico)-fict Conjugado fluorescente IFI = Ag + Acs (específico) + anti-ig-fict J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 24

25 INMUNOENZIMATICA InmunoFluorescencia Directa (IFD) Fluoresceina J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 25

26 Inmunofluorescencia Negativo Positivo J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 26

27 Inmunofluorescencia Ventajas Permite identificar Ag específicos de patógenos en tejidos, cultivos de células y secreciones (IFD o IFI). Permite identificar Ac específicos en suero (IFI). Desventajas Se debe utilizar microscopio UV. Personal capacitado. Infraestructura necesaria. Fundamentalmente cualitativa J.Maisonnave Area de Inmunología - F.Veterinaria 27