Discordancia entre Ensayos de Anticuerpos Antitiroglobulina en pacientes con CDT. Residente. Nataly Ibañez C.

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1 Discordancia entre Ensayos de Anticuerpos Antitiroglobulina en pacientes con CDT Residente. Nataly Ibañez C.

2 Introducción: Tiroglobulina (Tg) Interferencia producida por anticuerpos antitiroglobulina (ATg) en la medición de Tg Prevalencia de ATg Discordancia entre ensayos de ATg Presentación de dos trabajos y un caso clínico

3 Tiroglobulina : Síntesis Lumen folicular Glicoproteína 660Kd TSH Dímero 2 sub. peptídicas idénticas con 10% HC Célula folicular tiroidea Esqueleto precursor y almacenamiento de T3 yt4

4 Utilidad de la medición de Tiroglobulina Diagnóstico de Tirotoxicosis facticia Investigar etiología de Hipotiroidismo congénito Diagnóstico y monitoreo de tiroiditis destructiva Marcador tumoral en el seguimiento de pacientes con carcinoma diferenciado de tiroides ( malignidad endócrina más frecuente)

5 Aspectos analíticos de la medición de Tiroglobulina La medición de Tiroglobulina presenta limitaciones que deben conocerse y considerarse ya que impactan negativamente sobre su utilidad clínica óptima

6 LIMITACIONES DE LA MEDICIÓN DE TIROGLOBULINA STANDARIZACIÓN SENSIBILIDAD PRECISIÓN EFECTO HOOK PRESENCIA DE ATG

7 La Interferencia producida por los anticuerpos antitiroglobulina en la medición de Tiroglobulina representa la principal limitación y dependerá del inmunoensayo utilizado

8 Efecto de ATG en Métodos RIA Resultados falsamente aumentados ó disminuídos en los niveles de la Tg sérica

9 Efecto de ATg :Métodos IMA (Señal) Fase Sólida Ac. Anti Tg Ac. Captura Ac. AntiTg Ac. Portador Señal ATg Paciente???????????????? Resultados falsamente disminuidos Radioactiva Fluorescente Quimiol.pura Electroquimiol Quimio.puente enzimatico

10 Prevalence of thyroid autoantibodies (anti-tpo or TgAb alone or in combination) in the general population (multiphasic health evaluations) compared with that in patients with DTC. The percentage of total antibodypositive patients includes all patients with... Spencer et al. JCEM 83 (4): 1121

11 En los últimos años ha habido un reconocimiento de que la medición de ATg es de utilidad para el seguimiento de pacientes con CDT.

12 Ensayos de Anticuerpos anti-tg disponibles comercialmente son cualitativa y cuantitativamente diferentes

13 Factores que se atribuyen a la discordancia entre ensayos Heterogeneidad de ATg Diferencias en la especificidad de los ATg circulantes para el antígeno Tg Estándares usados por los diversos métodos Diferencias en los reactivos de ensayos Interferencia de Tg J Clin Endocrinol Metab Oct;90(10):

14 Annals of Clinical Biochemistry 2012; 49:

15 Materiales Se analizaron 606 sueros de pacientes tratados con CDT utilizando Abbott Architect : No competitivo Roche: Competitivo Inmulite: No competitivo

16 Clasificación de muestras basada en RR y LRL Los tres ensayos fueron estandarizados contra la preparación de Referencia Internacional MCR 65/93

17 Resultados La Prevalencia de ATg en pacientes con CDT por los tres ensayos varió entre 6% y 55% - Immulite fue: 6-8%, - Roche: 14-55% - Architec 23-39% Utilizando el LRL la concordancia entre métodos fue de un 45% y según el RR la concordancia fue 75%

18 Ann Clin Biochem Sep;49(Pt 5):463-7

19 Conclusión Se reconoce que la elección del corte, así como la elección del método afecta el rendimiento del ensayo

20 J Clin Endocrinol Metab, November 2012, 97(11):

21 Materiales Se midieron ATg por 3 ensayos no competitivos inmunométricos y 3 RIA competitivos en: - 72 pacientes PTC-T pacientes PTC pacientes TH SN.

22 Para evaluar el patrón de reconocimiento de epitopes de Tg por ATg, se clono la región TgAb-Fab contra 4 epitopes diferentes (A, B, C, D) y se compararon en los sueros que fueron concordantes y discordantes

23 Inhibición por TgAb Fab A, B, C, D TIROGLOBULINA B A A B A B A B C D C D D C C D TgAb-Fab CLONADO (Región A) (Región B) (Región C) (Región D) ATG DEL PACIENTE RESULTADO

24 Resultados La correlación de los 6 ensayos en los 4 grupos fueron variables, dependiendo de la metodología de ATg y el diagnóstico clínico.

25 Resultados 87 pacientes Concordantes n=54 Discordantes n=33 Inhibición A:49% Inhibición B: 27% Inhibición C: 30% Inhibición D: 8,5% Inhibición A:53% Inhibición B: 6% Inhibición C: 4% Inhibición D: 10%

26 Conclusión La metodología es relevante para la discordancia de los ensayos de ATg Las correlaciones entre ensayos es mayor cuando se comparan entre si la misma metodología (IMA no competitivo o competitivo RIA) Sueros de pacientes con PTC-T arrojaron resultados más similares porque el patrón de reconocimiento de epitope de Tg por ATg es más restringido en comparación con los pacientes con PTC

27 Caso Clínico 1 Paciente de sexo femenino de 61 años consulta por primera vez en agosto del 2011 por un nódulo tiroideo de hallazgo incidental. FECHA PROCEDIMIENTO TSH mui/l (QL) ATg UI/mL (EQL) ATPO UI/ml ( EQL) Tg ng/ml (EQL) 8/2011 Suero sin tratamiento 3 < /2012 Se opera 3/2012 Suero bajo estimulo TSHr , /2012 Suero bajo tto con levotiroxina 8/2012 Suero bajo tto con levotiroxina 11/2012 Suero bajo tto con levotiroxina GANGLIO Punción ganglionar 12/2012 (lavado de aguja) 0, ,90 31,4 36,6 0,22 32,4 5,3 > (QL) Método competitivo No competitivo

28 Porque la paciente posee anticuerpos anti-tiroglobulina positivos en ganglio y negativos pero dosables en suero?

29 PAF Tg ng/ml valor medido Tg ng/ml cc final teórica ATg UI/ml Eq ATg UI/ml q Directo > < 20 Dil. 1/10 > < 20 Dil. 1/100* > * < 20 < 20 Dil. 1/1000 > < 20 < 20 Dil 1/ , < 20 < 20 Métodos Competitivo No Competitivo

30 Medición de ATg por ensayo competitivo Eq (Roche) ATG Paciente Ac. Marcado (quelato de rutenio) Efecto de Tg elevada en la medición de ATg por ensayo competitivo Tg del paciente

31 Medición de ATg por ensayo no competitivo quimioluminiscente (Immulite) ATG Paciente Ac. monoclonal Anti Ig humana Tg del paciente

32 OBJETIVO Investigar la interferencia que la Tg puede producir sobre la determinación de los ATg en el líquido de lavado de aguja de punción ganglionar.

33 RESULTADOS ATg fueron negativos en el 100% de las muestras cuando se midieron por el método no competitivo (Q) y francamente positivos en un rango de cuando se midieron por el método competitivo (Eq) Tabla 1: Valores de Tg ng/ml y ATg UI/ml (q y Eq) en el líquido de lavado de aguja de punción ganglionar Pacientes Tg ATg Eq ATg q < < < < < < < < < < < < < < <20 16* < < >4000 < >4000 <20

34 Conclusiones Las altas concentraciones de Tg interfieren en la medición de los ATg cuando los mismos son medidos por un método competitivo electroquimioluminiscente. Se recomienda que en los líquidos de lavado de aguja de punción ganglionar los ATg sean medidos por un método no competitivo quimioluminiscente ya que no parece estar interferido por las altas concentraciones de Tg característica de los ganglios metastásicos.

35 Bibliografía >Boi F, Baghino G, Atzeni F, Lai ML, Faa G, Mariotti S. The diagnostic value for differentiated thyroid carcinoma metastases of thyroglobulin (Tg) measurement in washout fluid from fineneedle aspiration biopsy of neck lymph nodes is maintained in the presence of circulating anti- Tg antibodies. J Clin Endocrinol Metab Apr;91(4): Epub 2006 Jan 24. >Cunha N, Rodrigues F, Curado F, Ilhéu O, Cruz C, Naidenov P, Rascão MJ, Ganho J, Gomes I, Pereira H, Real O, Figueiredo P, Campos B, Valido F. Thyroglobulin detection in fine-needle aspirates of cervical lymph nodes: a technique for the diagnosis of metastatic differentiated thyroid cancer. Eur J Endocrinol Jul;157(1): >Pickett AJ, Jones M, Evans C. Causes of discordance between thyroglobulin antibody assays. Ann Clin Biochem Sep;49(Pt 5): doi: /acb Epub 2012 Jul 24. >Latrofa F, Ricci D, Montanelli L, Rocchi R, Piaggi P, Sisti E, Grasso L, Basolo F, Ugolini C, Pinchera A, Vitti P. Thyroglobulin autoantibodies in patients with papillary thyroid carcinoma: comparison of different assays and evaluation of causes of discrepancies. J Clin Endocrinol Metab Nov;97(11): doi: /jc Epub 2012 Sep 4. >Jeon MJ, Park JW, Han JM, Yim JH, Song DE, Gong G, Kim TY, Baek JH, Lee JH, Shong YK, Kim WB. Serum antithyroglobulin antibodies interfere with thyroglobulin detection in fineneedle aspirates of metastatic neck nodes in papillary thyroid carcinoma. J Clin Endocrinol Metab Jan;98(1): doi: /jc Epub 2012 Nov 8.

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