Morfología Agua peptonada. 37 C/ h. investigar: Agar Salmonella. Bacilos gran Shigella. negativos, con Agar Xilosa Lactosa selectivos

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2 Práctica No. 7 Nombre la práctica: Método para la terminación Salmonella en alimentos Objetivo: Intificación Salmonella en una muestra carne NOM: NOM-114-SSA Muestra utilizada: Carne picada Características físicas: Alimento sólido, en buenas condiciones. Condiciones Morfología Agua peptonada microscópica la Caldo Tetrationato Técnica utilizada: 37 C/ h bacteria a Caldo Selenito Preenrequimiento, investigar: Agar Salmonella para su posterior Bacilos gran Shigella siembra en medios negativos, con Agar Xilosa Lactosa selectivos flagelos peritricos Dextrosa realización que no Agar Sulfito Bismuto pruebas sarrollan bioquímicas. capsula ni esporas. Agua peptonada: Diluente preenriquecimiento FUNCIÓN DE LOS MEDIOS Caldo Tetrationato: Caldo Selenito: Enriquecimiento Enriquecimiento selectividad aislamiento. Agar Xilosa Lactosa Agar Sulfito Dextrosa: Bismuto: Aislamiento Selectividad selectividad diferenciación Agua peptonada: Medio usado como diluente para enriquecimiento bacteriano a partir alimentos otros materiales interés sanitario. Agar Xilosa Lactosa Dextrosa Utilizado para el aislamiento diferenciación bacilos entéricos Otro medio: Agar MacConke Aislamiento diferenciación Agar Salmonella Shigella: Medio selectivo para Salmonella Shigella. Otro medio: Agar Ver Brillante Enriquecimiento selectividad UTILIDAD DE LOS SIGUIENTES MEDIOS Caldo Tetrationato: Caldo Selenito: Medio cultivo Medio utilizado para el enriquecimiento enriquecimiento para el aislamiento selectivo Salmonella spp. Salmonella spp. a a partir partir heces, materiales clínicos, orina, alimentos especialmente otros materiales heces. importancia sanitaria. Agar Sulfito Bismuto Medio selectivo para el aislamiento diferenciación Salmonella tphi Agar Salmonella Shigella: Medio cultivo utilizado para el aislamiento Salmonella spp. algunas especies Shigella spp. a partir heces, alimentos otros materiales en los cuales se sospeche su presencia. Otro medio: Otro medio: Agar MacConke Agar Ver Este medio se Brillante utiliza para el Medio aislamiento enriquecimiento bacilos Gram altamente

3 gram negativos, otras Salmonellas a especialmente l partir diversas género Shigella Sal muestras. monella. negativos fácil selectivo para el sarrollo, aerobios aislamiento anaerobios Salmonella spp., facultativos. excepto S. tphi Permite diferenciar S. paratphi, a bacterias que partir muestras utilizan o no, clínicas, alimentos, lactosa en otros materiales muestras clínicas, importancia agua sanitaria. alimentos. PRUEBAS BIOQUIMICAS UTILIZADAS Ureasa: Negativa Indol: Negativo Rojo metilo: Voges proskauer: Positivo Negativo Citratos: Positiva Triple Azúcar Lisina Hierro Agar: Caldo Glucosado: Hierro: Positivo Positivo Positivo con gas Motilidad: Positiva Producción Caldo Lactosado: Caldo sacarosado: Sulfuro: Positivo Negativo Negativo Notas: Conclusiones: Las bioquímicas se observaron un día De acuerdo a la literatura a los spués. resultados obtenidos, se muestra la presencia Salmonella en la muestra carne. mientos_salmonella.pdf Observaciones: En todas las placas se obtuvieron colonias características Salmonella, en su maoría con puntos negros, en don se presumía la presencia l microorganismo. Y al igual en las bioquímicas, don el TSI el Indol se observaron todo negro, dato adjudicado a Salmonella. Amás todas las bioquímicas que indican su bioquímica fueron correctas. UREASA Los microorganismos que poseen la enzima Ureasa tienen la capacidad hidrolizar la urea contenida en el medio con producción amoniaco, para esta prueba se utiliza el caldo urea stuart o agar urea christensen. El caldo sturat esta estabilizado con sales fosfato a un ph 6.8. el microorganismo en estudio be producir cantidas relativamente grans a fin superar el sistema estabilizador l medio elevar el ph l medio los suficiente como para virar el indicador (por encima 8.0) Caldo urea Condiciones Inoculación en caldo, incubar a 37º C por 24 horas. (-): Negativa

4 Utilidad la prueba: Un cambio color Rojo fucsia indica que la urea fue hidrolizada por la ureasa l microorganismo. Técnica inoculación: Inoculacion mediante asadas. Control Negativo Indol El indol, es uno los productos la gradación metabólicas l amino acido triptofano. Las bacterias que producen la enzima triptofanasa son capaces hidrolizar saminar el triptofano con producción Indol, acido piruvico amoniaco. La prueba l indo esta basada en la formación un complejo rojo cuando el Indol reacciona con el grupo alhído pdimetilaminobenzalhido. Este es el principio activo l reactivo Kovacs. Condiciones Agar SIM o caldo triptofano Reactivo 37 C/ 24-48h Kovacs (-): Negativo Utilización la prueba: El sarrollo un color rojo-fucsia en la interfase l reactivo los medio segundos spués añadir el reactivo Kovacs indica la presencia indol. Técnica inoculación: Inocular al medio realizando siembra por picadura hasta la mitad l medio a partir l cultivo l microorganismo en estudio. Incubar 24 horas a 37 grados C. al finalizar este periodo añadir 5 gotas l reactivo Kovacs por la pared l tubo. Control positivo Control Negativo

5 Rojo Metilo Determinar la capacidad un microorganismo para producir mantener estables los productos terminales ácidos la fermentación la glucosa vencer la capacidad amortiguadora l sistema. La prueba Rojo metilo es cuantitativa para la producción acido requiere que los microorganismos produzcan ácidos fuertes a partir la glucosa, forma que el medio l ph scienda a menos 4.4. Esta distinción pue hacerse a través l indicador Rojo metilo que presenta color amarillo por encima un ph 5.1 solo presenta color rojo cuando el ph scien a 4.4. MRVP Indicador Rojo Metilo Condiciones Incubar horas a 37º C. Positivo (-): Utilización la prueba: El sarrollo un color rojo estable en la superficie l medio indica que la producción acido es suficiente como para bajar el ph a 4.4 es una prueba positiva. Técnica inoculación: Inocular en el caldo RMVP con una colonia l cultivo l microorganismo en estudio. finalizado este periodo adicionar 5 gotas l revelador Rojo metilo. Control negativo:

6 Voges Proskawer Utilización la prueba: Condiciones 37ºC hrs Técnica inoculación: Control negativo: (-): Citratos Condiciones Utilización la prueba: (-): Técnica inoculación: Control negativo: Triple Azúcar Hierro

7 Condiciones Utilización la prueba: (-): Técnica inoculación: Control negativo: Lisina Hierro Agar. Utilización la prueba: (-): Técnica inoculación: Control negativo: Imágenes Selenito Tetrationato Condiciones

8 Imágenes Cajas Imágenes Pruebas Bioquimicas TSI

9 Citratos Rojo Metilo Voges-Proskauer

10 LIA SIM Ureasa

11 Caldo Glucosado Caldo Lactosado Caldo Sacarosado